Способ получения гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа О

(51) 61 35/14 (2006.01) 61 39/135 (2006.01) 61 37/04 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Способ получения гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа О, включает иммунизацию кроликов массой не менее 3 кг комплексным инактивированным ящурным антигеном,содержащим суспензию вируса ящура типа О штамма Д-05 на физиологическом растворе(1200) с содержанием общего вирусного белка в пределах 4,50,1 мкг/см 3 и иммуностимуляторов гидроокись алюминия - 0,8, сапонин - 0,07. При этом кроликов иммунизируют трехкратно, сначала в дозе 2 см 3, а затем на 21 день после первой иммунизации в дозе 3,0 см 3, а на 25 день после второй иммунизации в дозе 4,0 см 3, через 14 суток после последней инъекции антигена, осуществляют забор крови, и отделяют сыворотку общепринятым способом. Заявляемый способ позволяет получить высокоактивную (164) и специфичную сыворотку к вирусу ящура типа О.(72) Абишов Абдикалык Абдижаппарович Мададов Малакша Фашанович Хайруллаева Куралай Амангельдиевна(56) Салажов П.Л. Способ получения гипериммунной сыворотки. Ветеринарные препараты. М. Колос, 1981, с. 73-74(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИПЕРИММУННОЙ СЫВОРОТКИ К ВИРУСУ ЯЩУРА ТИПА О(57) Изобретение относится к биотехнологии, в частности ветеринарной иммунологии и может быть использовано при производстве диагностических сывороток для определения типовой принадлежности вируса ящура в серологических реакциях. 20481 Изобретение относится к биотехнологии, в частности ветеринарной иммунологии и может быть использовано при производстве диагностических сывороток для определения типовой принадлежности вируса ящура в серологических реакциях. Известен способ получения гипериммунной сыворотки для диагностики ящура животных,вызванных вирусом типа О, включающий иммунизацию продуцентов ящурным антигенсодержащим материалом с последующим забором крови и отделением целевого продукта, при этом в качестве продуцентов используют морских свинок Салажов Е.Л. Способ получения гипериммунной сыворотки // Ветеринарные препараты- М, Колос,1981, С.73-74. Недостатком известного способа является то, что он не позволяет получить типоспецифическую сыворотку высокой активности и специфичности. Задачей изобретения является разработка способа получения активной и специфичной сыворотки к вирусу ящура типа О, а также сокращение кратность иммунизации. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении высокоактивной гипериммунной сыворотки для диагностики ящура животных, вызванных вирусом типа О. Способ получения гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа О, включает иммунизацию кроликов массой не менее 3 кг комплексным инактивированным ящурным антигеном,содержащим суспензию вируса ящура типа О штамма Д-05 на физиологическом растворе(1200) с содержанием общего вирусного белка в пределах 4,50,1 мкг/см 3 и иммуностимуляторов гидроокись алюминия - 0,8 , сапонин -0,07. При этом кроликов иммунизируют трехкратно, сначала в дозе 2 см 3, а затем на 21 день после первой иммунизации в дозе 3,0 см 3 , а на 25 день после второй иммунизации в дозе 4,0 см 3. Через 14 суток после последней инъекции антигена, осуществляют забор крови, и при достижении необходимого титра в РСК (164) проводят тотальное обескровливание кроликов путем препарирования яремной вены и взятия крови стерильной иглой. Далее полученную кровь выдерживают в течение 3 ч в термостате при 37 С, после образования сгустка его обводят и выдерживают кровь при температуре 4-8 С в течение 15 ч, образовавшуюся сыворотку сливают во флаконы и центрифугируют при 1500 об/мин в течение 15 мин,полученную сыворотку инактивируют в водяной бане при 58 С в течение 30 мин, затем проверяют на активность и специфичность в реакции связывания комплемента с гомологичным и гетерологичными антигенами. При получении положительных результатов сыворотку разливают в стерильные ампулы по 1,0 см 3 и подвергают сублимационной сушке. Изобретение осуществляется следующим образом. Пример. Используют группу животных из 9 кроликов, которых иммунизируют кроликов массой не менее 3 кг комплексным инактивированным ящурным антигеном, содержащим суспензию вируса ящура типа О штамма Д-05 на физиологическом растворе (1200) с содержанием общего вирусного белка в пределах 4,50,1 мкг/см 3 и иммуностимуляторов гидроокись алюминия - 0,8,сапонин - 0,07. При этом кроликов иммунизируют трехкратно, сначала в дозе 2 см 3, а затем на 21 день после первой иммунизации в дозе 3,0 см 3, а на 25 день после второй иммунизации в дозе 4,0 см. Через 14 дней после последней вакцинации животных тотально обескровливают. Полученную после отстаивания и центрифугирования крови, сыворотку инактивируют в водяной бане при 58 С в течение 30 мин и проверяют в РСК на активность и специфичность в реакции связывания комплемента(РСК) на наличие типоспецифических антител к вирусу ящура типа О. Результаты реакции учитывают визуально по степени задержки гемолиза эритроцитов и выражают в крестах. Предельным титром сыворотки считают ее наивысшее разведение, дающее с гомологичным антигеном, взятым в удвоенном рабочем титре(Р.Т.), задержку гемолиза на 95-100. Результаты опыта, приведены в таблице. Из таблицы следует, что сыворотка, полученная при однократной иммунизации кроликов, и взятая через 21 сутки, сыворотка была активна 116, через 25 дней после второй гипериммунизации - 132, а через 14 дней после третьей иммунизации сыворотка имела активность в разведении 164 с гомологичным антигеном и показывала отрицательные результаты с гетерологичными антигенами типов Азия-1 и А. 20481 Таблица Оценка активности гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа О в РСК Антиген Кратность День введения взятия антигена крови после введения антигена 1 21 2 25 3 14 1 21 2 25 3 14 1 21 2 25 3 14 Таким образом, заявляемый способ позволяет получить высокоактивную (164) и специфичную сыворотку к вирусу ящура типа А. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа О, включающий иммунизацию продуцентов ящурным антигенсодержащим материалом с последующим забором крови и отделением целевого продукта, отличающийся тем, что в качестве продуцентов используют Титры Комплементсвязывающих антител 18 116 164 кроликов массой не менее 3 кг, которых иммунизируют антигеном, содержащим суспензию вируса ящура типа О штамма Д-05 па физиологическом растворе (1200) с содержанием общего вирусного белка в пределах 4,50,1 мкг/см 3 и иммуностимуляторов гидроокись алюминия 0,8, сапонин - 0,07, при этом кроликов иммунизируют трехкратно, сначала в дозе 2,0 ,затем на 21 день после первой иммунизации в дозе 3,0 см 3 а на 25 день после второй иммунизации в дозе 4,0 см 3.