Способ получения гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа Азия-1

(51) 61 35/16 (2006.01) 61 39/135 (2006.01) 61 37/02 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ диагностики ящура животных, вызванных вирусом типа Азия-1 . Способ получения гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа Азия-1 включающий иммунизацию животных антигенсодержащим материалом, последующий забор крови и отделение целевого продукта, используют кроликов массой 2,5-3 кг, которых иммунизируют инактивированной моновалентной вакциной типа Азия-1, ее вводят трехкратно в дозе 2,0 мл внутримышечно с интервалом 23 дня, через 14 дней после последней инъекции антигена, осуществляют забор крови,после чего проводят тотальное обескровливание кроликов путем препарирования яремной вены,затем полученную кровь. выдерживают в течение 2 ч в термостате при 37 С, после образования сгустка обводят с помощью спицы и выдерживают кровь при температуре 4-8 С в течение 17 ч, после чего сыворотку сливают во флаконы и центрифугируют при 2000 об/мин в течение 20 мин, полученную сыворотку инактивируют в водяной бане при 58 С в течение 30 мин, затем проверяют на активность и специфичность в реакции связывания комплемента с гомологичным и гетерологичными антигенами,после получения положительных результатов сыворотку разливают в стерильные ампулы по 1,0 мл и подвергают сублимационной сушке.(72) Абишов Абдикалык Абдижаппарович Мададов Малакша Фашанович(73) Дочернее государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Научноисследовательский ветеринарный институт Республиканского государственного предприятия на праве хозяйственного ведения Научнопроизводственный центр животноводства и ветеринарии Министерства сельского хозяйства Республики Казахстан(56) Салажов Е.Л. Способ получения гипериммунной сыворотки(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИПЕРИММУННОЙ СЫВОРОТКИ К ВИРУСУ ЯЩУРА ТИПА АЗИЯ-1(57) Изобретение относится к биотехнологии,частности ветеринарной иммунологии и может быть использовано при производстве диагностических сывороток для определения типовой принадлежностей вируса ящура в серологических реакциях. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении высокоактивной гипериммунной сыворотки для 20769 Изобретение относится к биотехнологии, в частности ветеринарной иммунологии и может быть использовано при производстве диагностических сывороток для определения типовой принадлежности вируса ящура в серологических реакциях. Известен способ получения гипериммунной сыворотки для диагностики ящура животных,вызванных вирусом типа Азия-1, включающий иммунизацию морских свинок ящурным антигенсодержащим материалом с последующей забором крови и отделение целевого продукта Салажов Е.Л. Способ получения гипериммунной сыворотки // Ветеринарные препараты-М., Колос,1981, с.73-74. Недостатком известного способа является то что он не позволяет получить типоспецифическую сыворотку высокой активности и специфичности. Задачей изобретения является разработка способа получения активной и специфичной сыворотки к вирусу ящура типа Азия-1, а также сокращение кратность иммунизации. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении высокоактивной гипериммунной сыворотки для диагностики ящура животных, вызванных вирусом типа Азия-1. Способ получения гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа Азия-1,включающий иммунизацию животных ящурным антигенсодержащим материалом, последующий забор крови и отделение целевого продукта,используют кроликов массой 2,5-3 кг, которых иммунизируют инактивированной моновалентной вакциной типа Азия-1, ее вводят трехкратно в дозе 2,0 мл внутримышечно с интервалом 23 дня, через 14 дней после последней инъекции антигена,осуществляют забор крови, ДЛЯ чего проводят тотальное обескровливание кроликов путем препарирования яремной вены, затем полученную кровь выдерживают в течение 2 ч в термостате при 37 С, после образования сгустка обводят с помощью спицы и выдерживают кровь при температуре 4-8 С в течение 17 ч, после чего сыворотку сливают во флаконы и центрифугируют при 2000 об/мин в течение 20 мин,полученную сыворотку инактивируют в водяной бане при 58 С в течение 30 мин,затем проверяют на активность и специфичность в реакции связывания комплемента с гомологичным и гетерологичными антигенами,после получения положительных результатов сыворотку разливают в стерильные ампулы по 1,0 мл и подвергают сублимационной сушке. Изобретение осуществляется следующим образом. Пример 1. Используют группу животных из 9 кроликов вакцинируют внутримышечно инактивированной сорбированной моновалентной вакциной против типа Азия-1 в дозе 2,0 мл. Через 7,14 и 21 день проводят повторную иммунизацию кроликов. Препарат вводят в объеме 2,0 мл внутримышечно. Через 14 дней после второй вакцинации берут кровь, получают сыворотку и 2 проверяют ее активность и специфичность в РСК на наличие типоспецифических антител к вирусу ящура типа Азия-1. Результаты реакции учитывают визуально по степени задержки гемолиза эритроцитов и выражают в крестах. Предельным титром сыворотки считают ее наивысшее разведение, дающее с гомологичным антигеном, взятым в удвоенном рабочем титре(Р.Т.), задержку гемолиза на 95-100 . Результаты опыта, приведены в таблице 1. Из таблицы 1 видно, что сыворотки, полученные при введении вакцины с интервалом 21 день,обладает более высокой активностью. Пример 2. Группу из 9 кроликов массой 2,5-3 кг иммунизируют инактивированной сорбированной моновалентной вакциной из вируса ящура типа Азия-1 в дозе 2,0 мл трехкратно с интервалом 7,14 и 23 дней. Обескровливание кроликов проводят через 14 дней после последней иммунизации. Полученную после отстаивания и центрифугирования крови,сыворотку инактивируют в водяной бане при 58 С в течение 30 мин и проверяют в РСК на активность и специфичность. Результаты исследования приведены в таблице 2. Из таблицы 2 следует, что сыворотка,полученная при гепериммунизации кроликов с интервалом 7 дней, сыворотка была активна 116, а с интервалом 14 дней- 132, тогда как при гипериммунизации с интервалом 23 дней, сыворотка была активна в разведении 1128 с гомологичным антигеном и дает отрицательные результаты с гетерологичными антигенами типов А и О. Пример 3. Группу из 9 кроликов массой 2,5-3 кг гипериммунизируют инактивированной сорбированной моновакциной из вируса ящура типа Азия-1 в дозе 2,0 мл, четырехкратно с интервалом 7,14, 23 дней. Обескровливание кроликов проводят через 14 дней после последней иммунизации. Результаты исследования приведены в таблице 3. Из таблицы 3 видно, что увеличение кратности введения специфического антигена не способствует увеличению титра антител в сыворотке крови гипериммунизированных кроликов. Пример 4. Группу из 5 кроликов иммунизируют введением моновалентной сорбированной противоящурной вакцины типа Азия-1. Препарат вводят животным внутримышечно в объеме 2,0 мл, трехкратно с. интервалом 23 дня. На 14 день после последнего введения вакцины кроликов обескровливают. Полученную после отстаивания и центрифугирования крови, сыворотку инактивируют прогреванием при 58 С в течение 30 мин и проверяют в РСК на активность и специфичность. Исследования показали, что полученная по предложенному способу сыворотка активна в разведении 1128 с гомологичным антигеном и дает отрицательные результаты с гетерологичными антигенами вируса ящура типа А и О. 20769 Таким образом оптимальный интервал между введением вакцины для гиперимунизации кроликов составляет 23 дня. Пример 5. В реакции связывания комплемента(РСК) проводят сравнительное титрования сывороток, полученный по предлагаемому способу и коммерческих. В результате сравнительного титрования установлено, что активность сыворотки, полученной по предлагаемому способу составила 1128, а коммерческого - 132. Использование предлагаемого способа позволит получать высокоактивных типои штаммоспецифических ящурных сывороток для диагностических целей, при этом к исследованию подвергается афтозный материал, полученный от всех видов восприимчивых и лабораторных животных (вируссодержащая ткань от крольчат,морских свинок, мышат и вирус полученный в первичных и перевиваемых культурах клеток). Внедрение разработанного способа получения гипериммунной сыворотки для диагностики ящура,вызванных вирусом типа Азия-1, позволит снизить себестоимость 1,0 мл гипериммунной сыворотки в 2 раза. Таблица 1 Оценка активности гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа Азия-1 после двукратной иммунизации в РСК Антиген Интервалы между введениям и вакцины (день) Гомологичный 7 Р.Т. 14 21 Гетерологичный 7 тип А 14 21 7 тип О 14 21 Титры комплемен тсвязываю щих антител 18 116 132 Таблица 2 Оценка активности гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа Азия-1 после трехкратной иммунизации в РСК Антиген Интервалы между введениями вакцины Разведение испытуемой сыворотки 18 116 132 1164 1128 Титры комплеме нтсвязыва ющих антител 116 132 1128 Таблица 3 Оценка активности гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа Азия-1 после четырехкратной иммунизации в РСК Антиген Гомологиич Интервалы между 12 ввсдениям и вакцины Разведение испытуемой сыворотки 18 116 132 1164 1128 Титры комплеме нтсвязыва ющих антител 116 3 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа Азия-1,включающий иммунизацию животных ящурным антигенсодержащим материалом, последующий забор крови и отделение целевого продукта,отличающийся тем, что в качестве животных используют кроликов массой 2,5-3 кг, которых иммунизируют инактивированной моновалентной вакциной типа Азия-1, при этом ее вводят трехкратно в дозе 2,0 мл, внутримышечно, с интервалом 23 дня, через 14 дней после последней инъекции антигена осуществляют забор крови, для чего проводят тотальное обескровливание кроликов путем препарирования яремной вены, затем полученную кровь выдерживают в течение 2 ч в термостате при 37 С, после образования сгустка обводят с помощью спицы и выдерживают кровь при температуре 4-8 С в течение 17 ч, после чего сыворотку сливают во флаконы и центрифугируют при 2000 об/мин в течение 20 мин, полученную сыворотку инактивируют в водяной бане при 58 С в течение 30 мин, затем проверяют на активность и специфичность в реакции связывания комплемента с гомологичным и гетерологичными антигенами,после получения положительных результатов сыворотку разливают в стерильные ампулы по 1,0 мл и подвергают сублимационной сушке.