Способ получения гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа А

(51) 61 35/16 (2011.01) 61 39/135 (2011.01) 61 37/02 (2011.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении высокоактивной гипериммунной сыворотки для диагностики ящура животных, вызванных вирусом типа А. Способ получения гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа , включающий многократную иммунизацию кроликов путем введения вирулентной суспензии вируса ящура на физиологическом растворе с последующим их обескровливанием и отделением иммунной сыворотки, используют кроликов массой 2,5-3 кг,которых иммунизируют инактивированной эмульсионной моновалентной вакциной типа ,вакцину вводят трехкратно в дозе 2,0 см 3 внутримышечно с интервалом 21 день, через 8 дней после последней инъекции вакцины, осуществляют забор крови, затем полученную кровь выдерживают в течение 2 ч в термостате при 37, после образования сгустка ее обводят с помощью спицы и выдерживают кровь при температуре 8 в течение 24 ч, после чего сыворотку сливают во флаконы и центрифугируют при 2000 об/мин в течение 20 мин,полученную сыворотку инактивируют в водяной бане при 60 в течение 30 мин, затем проверяют на активность и специфичность в реакции связывания комплемента с гомологичным и гетерологичным антигенами, после получения положительных результатов сыворотку разливают в стерильные ампулы по 1,0 см 3 и подвергают сублимационной сушке.(72) Абишов Абдикалык Абдижаппарович Мададов Малакша Фашанович Хайруллаева Куралай Амангельдиевна Калисынов Берик Серикбаевич Есходжаев Олжас Умирзахович(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(56) Коляков Я.Е., Козловский Е.В., Гительсон С.С.,Байрак В.А. Наставление по постановке реакции связывания комплемента для определения типов вируса со стандартными типовыми антигенами и сыворотками, полученными от кроликов // Практикум по вирусологии. М. Колос, 1967, с. 93103(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИПЕРИММУННОЙ СЫВОРОТКИ К ВИРУСУ ЯЩУРА ТИПА А(57) Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, биотехнологии, в частности, к способам лабораторной диагностики вирусных болезней животных и может быть использовано в производстве диагностических сывороток,применяемых для определения типовой принадлежности и штаммоспецифических принадлежностей вируса ящура, вызывающих заболевание животных, в реакции связывания комплемента. Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, биотехнологии, в частности, к способам лабораторной диагностики вирусных болезней животных и может быть использовано в производстве диагностических сывороток,применяемых для определения типовой принадлежности и штаммоспецифических принадлежностей вируса ящура, вызывающих заболевание животных, в реакции связывания комплемента. Известен способ получения гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа , включающий многократную иммунизацию кроликов путем введения вирулентной суспензии вируса ящура на физиологическом растворе с последующим их обескровливанием и отделением иммунной сыворотки (Коляков Я.Е., Козловский Е.В.,Гительсон С.С, Байрак В.А. Наставление по постановке реакции связывания комплемента для определения типов вируса со стандартными типовыми антигенами и сыворотками, полученными от кроликов/Практикум по вирусологии. М. Колос, 1967.-с.93-103). Однако известный способ не позволяет получить сыворотку высокой активности и не исключает возможность выноса вируса за пределы диагностической лаборатории. Задачей изобретения является разработка способа получения активной и специфической сыворотки к вирусу ящура типа . Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении высокоактивной гипериммунной сыворотки для диагностики ящура животных, вызванных вирусом типа . Способ получения гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа , включающий многократную иммунизацию кроликов путем введения вирулентной суспензии вируса ящура на физиологическом растворе с последующим их обескровливанием и отделением иммунной сыворотки, используют кроликов массой 2,5-3 кг, их иммунизируют инактивированной эмульсионной моновалентной вакциной типа , вакцину вводят трехкратно в дозе 2,0 см 3 внутримышечно с интервалом 21 день, через 8 дней после последней инъекции вакцины, осуществляют забор крови,затем полученную кровь выдерживают в течение 2 ч в термостате при 37, после образования сгустка ее обводят с помощью спицы и выдерживают кровь при температуре 8 в течение 24 ч, после чего сыворотку сливают во флаконы и центрифугируют при 2000 об/мин в течение 20 мин, полученную сыворотку инактивируют в водяной бане при 60 в течение 30 мин, затем проверяют на активность и специфичность в реакции связывания комплемента с гомологичным и гетерологичным антигенами, после получения положительных результатов сыворотку разливают в стерильные ампулы по 1,0 см 3 и подвергают сублимационной сушке. Изобретение осуществляется следующим образом. Пример 1. Используют 2 группы кроликов по 5 голов в каждой. Их вакцинируют внутримышечно инактивированной эмульсионной моновалентной вакциной против типа А в дозе 2,0 см 3. 1 группу через 14 дней, а 2 группу через 21 день проводят повторную иммунизацию кроликов. Препарат вводят в объеме 2,0 см 3 внутримышечно. Через 8 дней после второй вакцинации берут кровь,получают сыворотку и проверяют ее активность и специфичность в РСК па наличие типоспецифических антител к вирусу ящура типа А. Результаты реакции учитывают визуально по степени задержки гемолиза эритроцитов и выражают в крестах. Предельным титром сыворотки считают ее наивысшее разведение, дающее с гомологичным антигеном, взятым в удвоенном рабочем титре,задержку гемолиза на 95-100 . Результаты опыта,приведены в таблице 1. Из таблицы 1 видно, что сыворотки, полученные при введении вакцины с интервалом 21 дней,обладает более высокой активностью. Пример 2. Две группы кроликов по 5 голов в каждой иммунизируют инактивированной эмульсионной моновалентной вакциной из вируса ящура типав дозе 2,0 см 3 трехкратно, первую группу с интервалом 14 дней, а вторую - 21 день. Обескровливание кроликов проводят через 8 дней после последней иммунизации. Полученную после отстаивания и центрифугирования крови,сыворотку инактивируют в водяной бане при 60 в течение 30 мин и проверяют в РСК на активность и специфичность. Результаты исследования приведены в таблице 2. Из таблицы 2 следует, что сыворотка,полученная при гипериммунизации кроликов с интервалом 14 дней, сыворотка была активна 132,тогда как при гипериммунизации с интервалом 21 дней 164 с гомологичным антигеном и дает отрицательные результаты с гетерологичными антигенами типови Азия-1. Пример 3. Две группы кроликов по 5 голов в каждой группе массой 2,5-3 кг гипериммунизируют инактивированной эмульсионной моновалентной типав дозе 2,0 см 3 четырехкратно с интервалом 14, 21 день. Обескровливание кроликов проводят через 8 дней после последней иммунизации. Результаты исследования приведены в таблице 3. Из таблицы 3 видно, что увеличение кратности введения специфического антигена не способствует увеличению титра антител в сыворотке крови гипериммунизированных кроликов. Пример 4. Группу из 5 кроликов иммунизируют введением эмульсионной моновалентной эмульсионной противоящурной вакцины типа А. Препарат вводят животным внутримышечно в объеме 2,0 см 3 трехкратно с интервалом 21 день. На 8 день после введения вакцины кроликов обескровливают. Полученная после отстаивания и центрифугирования крови, сыворотку инактивируют прогреванием при 60 в течение 30 мин и проверяют в РСК на активность и специфичность. Исследования показали, что полученная по предложенному способу сыворотка активна в разведении 164 с гомологичным антигеном и дает отрицательные результаты с гетерологичными антигенами вируса ящура типаи Азия-1. Таким образом оптимальный интервал между введением вакцины для гипериммунизации кроликов составляет 23 дня. Пример 5. В реакции связывания комплемента(РСК) проводят сравнительное титрование сывороток, полученный по предлагаемому способу и коммерческих. В результате сравнительного титрования установлено, что активность сыворотки,полученной по предлагаемому способу составила 164, а коммерческого - 132. Использование предлагаемого способа позволит получать высокоактивных типои штаммоспецифических ящурных сывороток для диагностических целей, при этом к исследованию подвергается афтозный материал, полученный от всех видов восприимчивых и лабораторных животных (вируссодержащая ткань от крольчат,морских свинок, мышат и вирус полученный в первичных и перевиваемых культурах клеток). Внедрение разработанного способа получения гипериммунной сыворотки для диагностики ящура,вызванных вирусом типа , позволит снизить себестоимость 1,0 м 3 гипериммунной сыворотки в 1,5-2 раза. Таблица 1 Оценка активности гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типапосле двукратной иммунизации в РСК Интервалы между Разведение сыворотки Титры комплемент введениями вакцины связывающих антител 12 14 18 116 132 164 Таблица 2 Оценка активности гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типапосле трехкратной иммунизации в РСК Антиген Интервалы между Разведение сыворотки Титры комплемент введениями связывающих антител вакцины (день) 12 14 18 116 132 164 1128 1256 Гомологичный Таблица 3 Оценка активности гипериммунной сыворотки к вирусу ящурапосле четырехкратной иммунизации в РСК Антиген Интервалы Разведение сыворотки Титры между комплемент введениями связывающих вакцины (день) антител 12 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения гипериммунной сыворотки к вирусу ящура типа , включающий многократную иммунизацию кроликов путем введения вирулентной суспензии вируса ящура на физиологическом растворе с последующим их обескровливанием и отделением иммунной сыворотки, отличающийся тем, что используют кроликов массой 2,5-3 кг, которых иммунизируют инактивированной эмульсионной моновалентной вакциной типа , вакцину вводят трехкратно в дозе 2,0 см 3 внутримышечно с интервалом 21 день, через 8 дней после последней инъекции вакцины, осуществляют забор крови, затем полученную кровь выдерживают в течение 2 ч в термостате при 37,после образования сгустка ее обводят с помощью спицы и выдерживают кровь при температуре 8 С в течение 24 ч, после чего сыворотку сливают во флаконы и центрифугируют при 2000 об/мин в течение 20 мин,полученную сыворотку инактивируют в водяной бане при 60 в течение 30 мин, затем проверяют на активность и специфичность в реакции связывания комплемента с гомологичным и гетерологичным антигенами, после получения положительных результатов сыворотку разливают в стерильные ампулы по 1,0 см 3 и подвергают сублимационной сушке.