Штамм Staphyloсоccus aureus 1501, используемый как референс-штамм при определении α- и β- гемолитической активности стафилококков

(51) 12 1/20 (2006.01) 61 39/085 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ ГЕМОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ СТАФИЛОКОККОВ(57) Изобретение относится к микробиологии,биотехнологии и может быть использовано в качестве референс-штамма при определении - и гемолитической активности стафилококков. Цель изобретения - является получение штамма 1501 обладающего - и- гемолитической активности. Технический результат, Штамм 1501 обладает способностью к полному разрушению эритроцитов, проявляя - и - гемолиз и может быть использован в качестве референсштамма при изучении гемолитической активности стафилококков, выделенных от больных, объектах окружающей среды и других источников, когда необходима дифференциация патогенных и непатогенных штаммов.(72) Алмагамбетов Каиртай Хамитович Динкаева Карашаш Амангельдиновна Бисенова Неля Михайловна Махатова Айгерим Сериковна Сатенова Акбота Мейрамовна Закарья Кунсулу(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Республиканская коллекция микроорганизмов Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан(54) ШТАММ СО 1501, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ КАК РЕФЕРЕНСШТАММ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ - И 30442 Изобретение относится к микробиологии,биотехнологии и может быть использовано в качестве референс-штамма при определении - и- гемолитической активности стафилококков. Известен штамм- 233,одномоментно продуцирующий - и - гемолизины,наиболее часто используемый в лабораторных условиях для получения -, - гемолизинов и в качестве референс-штамма при изучении гемолитической активности микроорганизмов.(Патент 2081168). Для получения целевого продукта штамм культивируют на жидких питательных средах,биомассу осаждают центрифугированием, а из надосадочной жидкости извлекают гемолизины. При изучении гемолитической активности штамм засевают на плотные питательные среды,содержащие эритроциты барана и кролика. Недостатком известного штамма является то, что он относится к группе грамотрицательных микроорганизмов, что затрудняет его использование при изучении гемолитической активности штаммов грамположительных микроорганизмов и их гемолизинов. Целью изобретения является получение штамма 1501 обладающего - и- гемолитической активности. Штамм 1501 выделен от больного человека, депонирован в коллекции музея РГП Республиканская коллекция микроорганизмов под номером В-РКМ 0587. Свойства штамма 1501 Данный штамм характеризуется следующими культурально-морфологическими признаками грамположительные кокки, неспорообразующие,располагаются одиночно, попарно. Матовые колонии правильной формы, выпуклые гладкие,края ровные, размер клеток 1,5 мкм. Штамм растет на многих натуральных и синтетических средах. На мясопептонном бульоне при 37 С через сутки наблюдается помутнение среды. На мясопептонном агаре образуются колонии округой формы,непрозрачные, бледно-розового цвета. Идентификация штамма была осуществлена на основании изучения его культуральноморфологических и физиолого-биохимических характеристик в соответствии с описанием, данным в определителе бактерий(Определитель бактерий Берджи). Параллельно также идентифицировали на бактериологическом анализаторе с использованием карты . Для идентификации использовали чистую, свежую культуру, разведенную в 3,0 см 3 в водном 0,450,50 растворе . При этом плотность культуры была 0,50-0,63 Мак-Фарланда, которую измеряли,используя калиброванный денситометр 2. По результатам идентификации,основанной на результатах бактериологического анализа с использованием стандартных биохимических тестов культура была идентифицирована какс вероятностью 99. Далее идентификация была осуществлена методом определения прямой нуклеотидной последовательности фрагмента 16 гена, с последующим определением нуклеотидной идентичности с последовательностями,депонированными в международной базе данных- 007447.1108. С СТА ТА СТАСАСАТА ТАС. По результатам проведенного анализа культура идентифицирована какс гомологией 100. Физиолого-биохимические признаки. Факультативный анаэроб. Оптимум роста 37 С,7,2-7,4. Оксидазный тест отрицательный. Ферментирует с образованием кислоты без газа глюкозу,-ацетилглюкозамин. Активно расщепляет аргинин, бета - галактозидазу,фосфатазу, -пирролидонил - ариламидазу, галактозу, -лактату, лактозу, -мальтозу, маннит, -маннозу, метил-вглюкопиранозиду,сазарозу,-трегалозу. Уреаза отрицателен. Аргининдигидролаза отсутствует. Устойчив к бацитрацину, оптохину, 0/129, полимиксину. Не разлагает салицин, раффинозу, не ферментирует сорбит, не сбраживает рибозу, ксилозу. Вирулентные свойства 50 для белых мышей 2-108 КОЕ/мл. Чувствительность к антибактериальным препаратам. Штамм чувствителен к ванкомицину,азитромицину,тикарцилину,цефазолину,хлорамфениколу,кларитромицину,ципрофлоксацину. Умеренно чувствителен к цефтриаксону, цефотаксину, амоксиклаву. Биологические свойства. Применение на практике данного штамма обусловливается его физиолого-биохимическими особенностями. Штамм используют следующим образом Пример 1. Определение гемолитической активности Для определения гемолитической активности использовали питательный агар с добавлением 5-м содержанием кровь кролика и выдерживали при температуре (37)С в течение 24 ч. Посев 1501 проводили уколом. Чашки Петри помещали в термостат при 37 С 2448 ч. Учет результатов проводили по образованию зон гемолиза, образованных вокруг колоний которая составляет 5,5-6,5 мм. Пример 2. Определение гемолитической активности Для определения гемолитической активности использовали питательный агар с добавлением 5-м содержанием кровь барана и выдерживали при температуре (37)С в течение 24 ч. Посев 1501 проводили уколом. Чашки Петри помещали в термостат при 37 С 2448 ч. Учет результатов проводили по образованию зон гемолиза, образованных вокруг колоний которая составляет 4-5 мм. Пример 3. Определение гемолитической активности. Для определения гемолитической активности использовали питательный агар с добавлением 5 Наименование Кровь барана Кровь кролика Кровь человека м содержанием кровь человека и выдерживали при температуре (37)С в течение 24 ч. Посев 1501 проводили уколом. Чашки Петри помещали в термостат при 37 С 2448 ч. Учет результатов проводили по образованию зон гемолиза, образованных вокруг колоний которая составляет 6-6,5 мм. В таблице 2 представлены результаты сравнительный анализ гемолитической активности. Как видно из таблицы штамм бактерий 1501, используемый в качестве референс - штамма отличается тем, что обладает высокой гемолитической активностью. Штамм 1501 обладает способностью к полному разрушению эритроцитов,проявляя - и - гемолиз и может быть использован в качестве референс-штамма при изучении гемолитической активности стафилококков,выделенных от больных, объектах окружающей среды и других источников, когда необходима ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм бактерий 1501,депонирован в коллекции музея РГП Республиканская коллекция микроорганизмов под номером 0587, используемый как референс-штамм при определении и