Способ определения микроорганизмов рода salmonella

(51) 12 1/68 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ заключающийся в повышении его специфичности путем образования продукта амплификации длиной 248 пар нуклеотидов. Способ определения микроорганизмов рода,включающий приготовление реакционной смеси, с последующим проведением полимеразной цепной реакции в температурновременном режиме, составляющие реагенты реакционной смеси содержат 10 мкл реакционной смеси, по 1 мкл 10 рМ каждого праймера (5-3 (-) и 5-3 (-и деионизированной воды до 25 мкл, и изменяют программу, задаваемую в амплификатор с одним циклом при температуре 95 С в течение 15 мин, 45 циклов при температуре 94 С в течение 1 мин, при температуре 60 С в течение 30 сек, при температуре 72 С в течение 1 мин, одним циклом при температуре 72 С в течение 10 мин, с последующим выдерживанием при 4 С, в результате реакции получают целевой продукт исследуемой бактерии.(72) Султанов Ахметжан Акиевич Даугалиева Аида Тлековна Егорова Наталья Николаевна Скиба Юрий Александрович(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ РОДА(57) Изобретение относится к области молекулярной биологии и ветеринарной медицины,в частности к идентификации бактерий и может быть использовано для контроля эффективности противоэпизоотических мероприятий при сальмонеллезах сельскохозяйственных животных и птицы. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в разработке способа определения микроорганизмов рода , 30443 Изобретение относится к области молекулярной биологии и ветеринарной медицины, в частности к идентификации бактерий и может быть использовано для контроля эффективности противоэпизоотических мероприятий при сальмонеллезах сельскохозяйственных животных и птицы. Известен способ обнаружения ДНК микроорганизмов рода , включающий детекцию геномного полинуклеотидого локуса,который определяется амплификацией праймерами,имеющими последовательность 5-3 и 5-3 (2), а также приготовление реакционной смеси, с последующим проведением ПЦР в температурно временном режиме Патент Российской Федерации 2360004, кл. С 12 1/68 (2006.01), 2009. Недостатком данного способа является низкая специфичность,связанная с вероятностью появления неспецифических положительных реакций, обусловленных синтезом неспецифических ампликонов длиной 432 пары нуклеотидов. Задачей изобретения является разработка способа определения микроорганизмов рода. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в разработке способа определения микроорганизмов рода ,заключающийся в повышении его специфичности путем образования продукта амплификации длиной 248 пар нуклеотидов. Способ определения микроорганизмов рода,включающий приготовление реакционной смеси, с последующим проведением полимеразной цепной реакции в температурновременном режиме, составляющие реагенты реакционной смеси содержат 10 мкл реакционной смеси, по 1 мкл 10 рМ каждого праймера (5-3 (-) и 5-3 (-и деионизированной воды до 25 мкл, и изменяют программу, задаваемую в амплификатор с одним циклом при температуре 95 С в течение 15 мин, 45 циклов при температуре 94 С в течение 1 мин, при температуре 60 С в течение 30 сек, при температуре 72 С в течение 1 мин, одним циклом при температуре 72 С в течение 10 мин, с последующим выдерживанием при 4 С, в результате реакции получают целевой продукт исследуемой бактерии. Изобретение осуществляют следующим образом. Выделение ДНК производят колоночным способом из бактерии 27. Для амплификации в общем объеме 25 мкл готовят смесь, содержащую 3 мкл ДНК, 10 мкл реакционной смеси, 10 мкл деионизированной воды, по 1 мкл 10 рМ каждого праймера. Программа термоциклирования включает в себя 95 С 15 мин. в течение 45 циклов - 94 С 1 мин, 60 С 30 сек, 72 С 1 мин, и один цикл 72 С 10 мин, с последующим выдерживанием при 4 С. Анализа продуктов ПЦР проводится разделением фрагментов ДНК в агарозном геле. В дорожке,соответствующей положительному контролю, должна быть специфическая светящаяся полоса оранжевого цвета,соответствующая фрагменту ДНКв 280 пар нуклеотидов. Положительные испытуемые пробы должны содержать специфическую светящуюся полосу большей или меньшей интенсивности строго на том же уровне, что и полоса в положительном контроле. Использование праймеров со следующими нуклеотидными последовательностями 5-3 (-) и 5-3 (-), для выявления геномной ДНК микроорганизмов родав ПЦР, позволит получить более короткий ампликон (синтезируемый фрагмент ДНК), обеспечивающий повышение эффективности и специфичности протекания реакции (ПЦР). ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ определения микроорганизмов рода,включающий приготовление реакционной смеси, с использованием специально подобранных праймеров,с последующим проведением ПЦР в температурно-временном режиме, отличающийся тем, что составляющие реагенты реакционной смеси содержат 10 мкл реакционной смеси, по 1 мкл 10 рМ каждого праймера(-и деионизированной воды до 25 мкл, и изменяют программу, задаваемую в амплификатор с одним циклом при температуре 95 С в течение 15 мин, 45 циклов при температуре 94 С в течение 1 мин, при температуре 60 С в течение 30 сек, при температуре 72 С в течение 1 мин, одним циклом при температуре 72 С в течение 10 мин, с последующим выдерживанием при 4 С, в результате реакции получают целевой продукт исследуемой бактерии.