Способ получения трансдермального липосомального лекарственного препарата для лечения туберкулеза

(51) 61 9/127 (2006.01) 61 31/00 (2006.01) 61 31/06 (2006.01) МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Способ получения трансдермального липосомального лекарственного препарата,включает загрузку липосом, при этом используют липосомы фосфатидилинозитола размером менее 1 мкм, в концентрации от 0,05 до 0,2,изготовленные из полярного,заряженного фосфолипида,оболочка которых укреплена глютаматдегидрогеназой, взятой в концентрации от 1 мг/мл до 4 мг/мл и скваленом, взятым в концентрации 0,01. Липосомы загружают противотуберкулезными химиотерапевтическими средствами первого ряда с помощью ультразвуковой интрузии, затем загруженные липосомы смешивают с мазевой основой. Получение трансдермального липосомального лекарственного препарата по предлагаемому способу позволяет добиться полноты и точности концентрации загрузки лекарственного средства,способ технологически прост,не требует значительных затрат, а получаемый препарат стабилен и может храниться длительно.(72) Карабалин Арман Балтабаевич Туткышбаев Серик Оспанович Аманжолова Лайла Кусайыновна Гильманов Мурат Курмашевич Абилдаев Тлеухан Шилдебаевич Бегзат Аскар Нагиулы(73) Республиканске государственное казенное предприятие Национальный центр проблем туберкулеза Министерства здравоохранения Республики Казахстан(56) Предварительный патент РК 17043,15.03.2006 г(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТРАНСДЕРМАЛЬНОГО ЛИПОСОМАЛЬНОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ТУБЕРКУЛЕЗА(57) Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии и может быть использовано для получения трансдермального липосомального лекарственного препарата для лечения туберкулеза. Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии и может быть использовано для получения трансдермального липосомального лекарственного препарата для лечения туберкулеза. Туберкулез на сегодняшний день является одним из распространенных, и наиболее социально значимых инфекционных заболеваний, поражающих все органы и системы человека. При этом костносуставной туберкулез (КСТ) является основной причиной инвалидности пациентов. Противотуберкулезные препараты (ПТП), вводимые перорально, с задержкой достигают очага поражения, частично инактивируются в желудочнокишечном тракте, обладают множеством побочных эффектов. Поэтому разработка новой,трансдермальной формы противотуберкулезного препарата на основе липосом позволит повысить эффективность комплексной терапии КСТ и избежать побочных эффектов ПТП. Известен способ получения липосомального лекарственного препарата, включающий загрузку липосом(мицелл) веществами при смене гидрофобной фазы на гидрофильную с помощью колоночной гель-хроматографии.(Предварительный патент К 17043, МПК А 61 9/127, В 01 15/02, Опубл. 15.03.2006,бюллетень 3) Недостатками данного способа является 1. то,что при загрузке лекарственного средства с помощью колоночной гель-хроматографии имеет место неконтролируемое разведение препарата 2 гель используемый в данном способе является дорогостоящим, кроме того его необходимо менять не менее одного раза в месяц 3 - липосомы легко агрегируют, что может привести к нежелательным эффектам 4 - короткий срок хранения - при комнатной температуре всего один месяц. Задачей изобретения является разработка способа получения трансдермального липосомального лекарственного препарата для лечения туберкулеза. Технический результат получение липосомального лекарственного препарата по предлагаемому способу позволяет добиться полноты и точности концентрации загрузки лекарственного средства, способ технологически проще прототипа,значительно дешевле,получаемый препарат стабилен, может храниться длительно. Технический результат достигается тем, что в способе получения липосомального лекарственного препарата,включающем загрузку липосом отличительной особенностью,согласно изобретению, является то, что используют липосомы фосфатидилинозитола размером менее 1 мкм, в концентрации от 0,05 до 0,2,изготовленные из полярного,заряженного фосфолипида,оболочка которых укреплена глютаматдегидрогеназой, взятой в концентрации от 1 мг/мл до 4 мг/мл и скваленом в концентрации 0,01,липосомы загружают противотуберкулезными химиотерапевтическими средствами первого ряда с помощью ультразвуковой 2 интрузии, а для получения его трансдермальной формы загруженные липосомы смешивают с мазевой основой. Основу липосом составляет фосфатидилинозитол(ФИ), представляющий собой шестиатомный спирт инозитол, соединенный с 3-м атомом глицерола, к 1 и 2 углеродному атому которого присоединены две жирные кислоты с четным числом углеродных атомов от С 12 до С 22. Так как ФИ имеет отрицательный заряд, получаемые липосомы заряжены отрицательно. Вследствие наличия отрицательного заряда они отталкиваются друг от друга и поэтому не способны к агрегации. Для придания гидрофильности,прочности и стабильности липосом в ФИ мембраны встраивают молекулы глютаматдегидрогеназы по методу,описанному в книге (Гильманов М.К., Фурсов О.В.,Францев А.П. // Методы очистки и изучения ферментов растений // Алма-Ата Изд-во Наука,1981, с.91). Кроме того, для придания липосомам прочности,добавляют сквален - углеводород тритерпенового ряда, принадлежащий к группе каротиноидов. Сквален это природный ненасыщенный углеводород, которому не хватает 12-ти атомов водорода до стабильного состояния, при соединении с карбоксильной группой он осуществляет захват водорода,между несколькими молекулами фосфолипида, таким образом, скрепляя ламелярные слои липосом между собой, что оказывает стабилизирующее и скрепляющее действие на структуру капсул. Сквален легко проникает через кожу внутрь организма, воздействует на весь организм и является мощным иммуностимулятором. Раствор таких липосом может храниться в стерильных условиях более 3-х лет. Способ осуществляют следующим образом. Для получения липосом используют суспендирование фосфатидилинозитола в буферном растворе с последующим ультразвуковым диспергированием. Конечная концентрация фосфатидилинозитола в растворе составляет от 0,05 до 0,2, с оптимумом 0,1. Затем липосомы инкубируют с гомогенной глютаматдегидрогеназой,взятой в концентрации от 1 мг/мл до 4 мг/мл, с оптимумом 2 мг/мл не менее 12 часов. Несвязавшиеся молекулы глютаматдегидрогеназы удаляют гель - хроматографией на колонке с сорбентом Сефароза - 2 В или Сефароза - 4 В. Расчеты показали,что с фосфатидилинозитольными липосомами связывается 0,2 глютаматдегидрогеназы от всего объема полученных липосом. Далее липосомы загружают противотуберкулезными препаратами первого ряда изониазидом, пиразинамидом,этамбутолом с помощью ультразвукового диспергирования со скваленом. Пример 1. При концентрации ФИ в растворе менее 0,05 концентрация липосом недостаточна для получения липосомального лекарственного средства. Пример 2. При концентрации ФИ в растворе более 0,2 наблюдался перерасход дорогостоящего ФИ. Эта концентрация ФИ не увеличивала эффективности липосомального лекарственного средства. Пример 3. Концентрация глютаматдегидрогеназы менее 1 мг/мл оказалась недостаточна для полного покрытия ФИ липосом. Пример 4. При концентрации глютаматдегидрогеназы более 4 мг/мл не увеличивалась эффективность липосомального лекарственного средства, а лишь происходила лишняя трата дорогостоящего препарата. Пример 5. Раствор фосфатидилинозитола,взятый в концентрации 0,1 суспендируют в буферном растворе,подвергают ультразвуковому диспергированию при средней силе тока в течение нескольких минут и получают липосомы размером менее 1 мкм. Их инкубируют с гомогенной глютаматдегидрогеназой, взятой в концентрации 2 мг/мл, не менее 12 часов. Несвязавшиеся молекулы глютаматдегидрогеназы удаляют гель хроматографией на колонке с сорбентом Сефароза 2 В или Сефароза - 4 В. Пример 6. Загрузка ФИ липосом скваленом и противотуберкулезными препаратами первого ряда. Для получения липосомальной формы лекарственного препарата липосомы перемешивали с скваленом и с противотуберкулезными препаратами первого ряда - изониазидом,пиразинамидом,этамбутолом с конечной концентрацией в липосомах сквален - 0,01 Изониазид - 8 мг/мл Пиразинамид - 5 мг/мл Этамбутол - 3 мг/мл путем ультразвукового диспергирования. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения липосомального лекарственного препарата, включающий загрузку липосом, отличающийся тем, что используют липосомы фосфатидилинозитола размером менее 1 мкм, в концентрации от 0,05 до 0,2,изготовленные из полярного,заряженного фосфолипида,оболочка которых укреплена глютаматдегидрогеназой, взятой в концентрации от 1 мг/мл до 4 мг/мл и скваленом, взятым в концентрации 0,01, затем липосомы загружают противотуберкулезными химиотерапевтическими средствами первого ряда с помощью ультразвуковой интрузии, а для получения его трансдермальной формы загруженные липосомы смешивают с мазевой основой.