Способ получения микрокапсулярного препарата, обладающего антибактериальным действием”.

(51) 61 9/50 (2011.01) 61 31/545 (2011.01) 6131/417 (2011.01) 61 31/00 (2011.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ получение липосом, отличающийся тем, что используют микрокапсулы фосфатидилинозитола размером около 1 мкм, изготовленные из полярного,заряженного фосфолипида, оболочка которых укреплена глютаматдегидрогеназой, загруженные цефазолином с метронизадолом с помощью гельхроматографии на колонке с сорбентом-20 в следующем соотношении компонентов мас. Фосфатидилинозитола 0,1 Глютаматдегидрогеназы 0,2 Цефазолина 150 мг/мл Метронизадола 75 мг/мл. Технический результат - получение микрокапсул,загруженных антимикробными лекарствами, не способных к агрегации, годных для хранения в течении нескольких лет. Полученный микрокапсулярный лекарственный препарат обладает свойством легко проникать через ткани кожи, мышц и костей в поражнные инфекцией органы. Лекарственный препарат имеет срок хранения более 3-х лет в стерильных условиях.(76) Гильманов Мурат Курмашевич Гильманова Сауле Муратовна Кейкибаев Алтынбек Ниеталиевич(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МИКРОКАПСУЛЯРНОГО ПРЕПАРАТА,ОБЛАДАЮЩЕГО АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫМ ДЕЙСТВИЕМ.(57) Способ получения мукрокапсулярного препарата,обладающего антибактериальным действием. Изобретение относится к области медицины,касается лечения инфекционных заболеваний. Способ получения микрокапсулярного лекарственного препарата,обладающего антибактериальным действием,включающий Изобретение относится к области медицины,касается лечения инфекционных заболеваний. Известен способ получения липосом,содержащих метронидазол (трихопол) для лечения розовой угревой сыпи (. , М..//1998, . 8, . 2,.283-293). Недостатком является то, что эти липосомы изготовлены из сложной нестандартной смеси фосфолипидов, срок хранения которых не превышает 4 недели. Прототипом является способ получения липосом из смеси лецитина и холестерола высушиванием тонкой пленки фосфолипидов с метронидазолом. Эти липосомы имели размеры от 10 до 15 мкм//// . 2,1,2009). Недостатком является большая гидрофобность, вследствие которой липосомы легко агрегируют и слипаются. Такие большие размеры липосом не позволяют им свободно проходить через кожу и мышцы. Данные липосомы не использовались для лечения вагинитов, а только для изучения поведения липосом в модельных условиях. Задача изобретения - разработать способ получения микрокапсулярного препарата,обладающего антибактериальным действием. Технический результат получение микрокапсул,загруженных антимикробными лекарствами, не способных к агрегации, годных для хранения в течении нескольких лет. Полученный микрокапсулярный лекарственный препарат обладает свойством легко проникать через ткани кожи, мышц и костей в пораженные инфекцией органы. Лекарственный препарат имеет срок хранения более 3-х лет в стерильных условиях. Технический результат достигается способом получения микрокапсулярного лекарственного препарата,обладающего антибактериальным действием, включающий получение липосом,отличающийся тем, что используют микрокапсулы фосфатидилинозитола размером около 1 мкм,изготовленные из полярного,заряженного фосфолипида,оболочка которых укреплена глютаматдегидрогеназой,загруженные цефазолином с метронизадолом с помощью гельхроматографии на колонке с сорбентом-20 в следующем соотношении компонентов мас. фосфатидилинозитола 0,1 глютаматдегидрогеназы 0,2 цефазолина 150 мг/мл метронизадола 75 мг/мл Основу микрокапсул составляет фосфатидилинозитол (ФИ), представляющий собой шестиатомный спирт - инозитол, соединенный с 3-м атомом глицерола, к 1 и 2 углеродному атому которого присоединены две жирные кислоты с четным числом углеродных атомов от С 12 до С 22. Так как ФИ имеет отрицательный заряд, то поэтому 2 получаемые микрокапсулы заряжены отрицательно. Вследствие наличия отрицательного заряда они отталкиваются друг от друга и поэтому не способны к агрегации. Для придания гидрофильности,прочности и стабильности микрокапсул в ФИ мембраны встраивают молекулы глютаматдегидрогеназы, получаемые по методу,описанному в книге (Гильманов М.К., Фурсов О.В.,Францев А.П. // Методы очистки и изучения ферментов растений // Алма-Ата Изд-во Наука,1981, с.91). Раствор микрокапсул может храниться в стерильных условиях более 3-х лет. Микрокапсулы обладают способностью легко проходить через кожу и мышцы и в течение 10 минут достигать инфицированного органа. Для получения микрокапсул использовали суспендирование фосфатидилинозитола в буферном растворе с последующим ультразвуковым диспергированием. Конечная концентрация фосфатидилинозитола в растворе от 0,05 до 0,2,с оптимумом 0,1. Затем микрокапсулы инкубировали с гомогенной глютаматдегидрогеназой, взятой в концентрации от 1 мг/мл до 4 мг/мл, с оптимумом 2 мг/мл не менее 12 часов. Несвязавшиеся молекулы глютаматдегидрогеназы удаляли гель хроматографией на колонке с сорбентом Сефароза 2 В или Сефароза - 4 В. Расчеты показали, что с фосфатидилинозитольными липосомами связалось 0,2 глютаматдегидрогеназы от всего объема полученных микрокапсул. Микрокапсулу загружали с помощью гель-хроматографии на колонке с сорбентом- 20 следующими препаратами цефазолин и метронидазол. Пример 1 При концентрации фосфатидилинозитола в растворе 0,05 концентрация липосом недостаточна для получения микрокапсулярного лекарственного средства. Пример 2 При концентрации фосфатидилинозитола в растворе 0,2 наблюдался перерасход дорогостоящего фосфатидилинозитола. Эта концентрация фосфатидилинозитола не увеличивала эффективности микрокапсулярного лекарственного средства. Пример 3 Концентрация глютаматдегидрогеназы 1 мг/мл оказалась недостаточна для полного покрытия фосфатидилинозитольных липосом. Пример 4 Концентрация глютаматдегидрогеназы 4 мг/мл не увеличивала эффективности микрокапсулярного лекарственного средства, а лишь приводила к ненужной трате дорогостоящего препарата. Пример 5 Способ получения микрокапсул раствор фосфатидилинозитола, взятого в концентрации 0,1 суспендируют в буферном растворе, подвергают ультразвуковому диспергированию при средней силе тока в течение нескольких минут и получают микрокапсулы размером менее 1 мкм. Микрокапсулы инкубируют с гомогенной глютаматдегидрогеназой, взятой в концентрации 2 мг/мл, не менее 12 часов. Несвязавшиеся молекулы глютаматдегидрогеназы удаляют гель хроматографией на колонке с сорбентом Сефароза 2 В или Сефароза - 4 В. Пример 6 - Загрузка ФИ микрокапсул цефазолином и метронидазолом для лечения инфекционных заболеваний Для получения лекарственного микрокапсулярного лекарственного препарата микрокапсулы загружали цефазолином и метронидазолом. Цефазолин относится к цефалоспоринам, активен против большого спектра Аэробных микроорганизмов. Метронидазол противопротозойный и противомикробный препарат, производное 5 нитроимидазола. Активен против большого спектра Анаэробных микроорганизмов и простейших. Эти два препарата в сочетании друг с другом эффективны практически против большинства микроорганизмов, вызывающих инфекционные болезни человека. Микрокапсулярный лекарственный препарат для лечения инфекционных заболеваний получают следующим образом Раствор, содержащий микрокапсулы подвергали гель-хроматографии на колонке с сорбентом-20, уравновешенную 96,5 этанолом. Микрокапсулы выходили в первом пике. Фосфатидилинозитольные микрокапсулы в собранных фракциях находились в 96,5 этаноле и в этом растворе они раскрываются подобно двустворчатой раковине. Перед трис- хлоридным буфером, рН 7,4. На эту колонку наносят раствор,содержащий от 2 г/мл до 4 г/мл, оптимальная концентрация 1 г/мл цефазолина и от 0,025 г/мл до 1 г/мл,оптимальная концентрация 0,5 г/мл метронизадола в соотношении 21 и дают ему впитаться, после чего наносят 10 мл того же трисхлоридного буфера, после чего наносят спиртовый раствор, содержащий раскрытые ФИ микрокапсулы. Так как раскрытые фосфатидилинозитольные микрокапсулы являются крупными структурами, то они быстро проходят слой буфера с растворнным лекарством. В этом растворе микрокапсулы начинают закрываться, захватывая раствор с растворенными в нем антибактериальными препаратами. После чего,загруженные микрокапсулы входят в раствор чистого буфера и выходят первым пиком. Во втором пике будут содержаться свободные цефазолин и метронидазол. Проведнный анализ содержания цефазолина и метронидазола в микрокапсулах показал, что в них содержится от 100 мг/мл до ЗООмг/мл цефазолина,с оптимумом лекарственного действия 150 мг цефазолина на 1 мл раствора микрокапсул и от 20 мг/мл до 150 мг/мл с оптимумом лекарственного действия 75 мг метронидазола на 1 мл микрокапсул. При изменении этого соотношения ухудшается антибактериальный эффект. Пример 7 - Клинико - экспериментальные исследования Клинические испытания мази, содержащей цефазолин с метронидазолом проводились в Институте кардиологии и внутренних болезней МЗ РК под руководством к.м.н. Нуралина Рустема Шекербаевича. Результаты лечения у больных с гнойнонекротическими поражениями нижних конечностей. Наблюдение 1. Больная Ж. 48 лет, (И.Б.397) поступила в хирургическое отделение с жалобами на наличие раны в области культи 4 и 5 пальцев правой стопы. Болеет в течении 3 недель. Больная СД 2 типа - 4 лет, в течении последних двух лет наблюдаются диабетическая полинейропатия и микроантипатия нижних конечностей. Лечение раны проводилось мазью актовегин - без эффекта.на правой стопе имеется отчность,гиперемия, рана в области культи 4 и 5 пальцев,размерами 1237 мм , со скудным серозным отделяемым. На поверхности раны имеется незначительный налет фибрина, грануляции незернистой структуры, бледные, тусклые. Очагов эпетелизации не обнаружено. Кожа вокруг раны сухая. Клиническая картина, до начала местного лечения препаратом, была следующей скудное отделяемое из ран носило серозный характер,грануляционная ткань была вялой, бледной,тусклой,консистенция незернистой,очаги эпителизации отсутствовали, отмечался налет фибрина на раневой поверхности. Кожа вокруг раны была истончена, сухая. При использовании мази, содержащей цефазолин с метронидазолом развитие грануляционной ткани отмечали на 2,90,21 сутки. Появление очагов и краевой эпителизации отмечено 3,240,11 сутки. Скорость заживления составляла 3,370,37 в сутки. Уменьшение размеров раны в 2 раза отмечено в сроки от 7 до 14 суток. Полное заживление раны достигли в срок 4 недели. Наблюдения 2 Больная Д., 61 год, (И.Б. 249) Д 3 СД 2 тип. поступила в хирургическое отделение с жалобами на боли в правой голени и наличие язвы,появившейся более 4-х месяцев назад. Лечения язвы на предыдущем этапе проводили с применением солкосерила, актовегина. Эффекта не получено. Размеры язвы прогрессировали.на передней поверхности правой голени, в области средней трети правой голени имеется трофическая язва размером 1181 мм 2, на поверхности которой незначительные наложения фибрина, грануляционная ткань вялая бледная,очагов эпитализации не отмечается, раневое отделяемое в небольшом количестве и носит серозный характер. Кожа вокруг язвы истончена,бледная, пигментирована, в области средней трети голени на коже имелись пятна гиперемии с шелушением. Начато лечение мазью, содержащей цефазолин с метронидазолом. На пятые сутки лечение отмечено очищение язвы от налета фибрина, появление розовых сочных грануляций, по краям и в центре появились очаги эпителизации. Появление грануляционной ткани началось в среднем на 3 4,90,27 сутки, краевой эпителизации на 5,760,35 сутки лечения. Скорость заживления язвы составила 2,530, 62 сутки. Полную эпителизацию наблюдали через 5 недель. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения микрокапсулярного лекарственного препарата,обладающего антибактериальным действием,включающий получение липосом, отличающийся тем, что используют микрокапсулы фосфатидилинозитола размером около 1 мкм, изготовленные из полярного,заряженного фосфолипида, оболочка которых укреплена глютаматдегидрогеназой, загруженные цефазолином с метронизадолом с помощью гельхроматографии на колонке с сорбентом-20 в следующем соотношении компонентов мас. фосфатидилинозитола 0,1 глютаматдегидрогеназы 0,2 цефазолина 150 мг/мл метронизадола 75 мг/мл.