Штамм вируса инфекционного ларинготрахеита кур “ил-10 казниви” № av-003 (казниви), используемый для изготовления эмбриональной вакцины живой сухой

(51) 12 7/00 (2006.01) 61 39/245 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и может быть использовано для инфекцинного ларинготрахеита кур. Технический результат обспечиваемый изобретением, выражается в получении штамма вируса инфекцинного ларинготрахеита кур,пригодного для изготовления слабореактогенной,иммунологически эффективной живой сухой вакцины. Штамм вируса инфекционного ларинготрахеита кур ИЛ-10 КазНИВИ-003, (КазНИВИ) депонирован в лаборатории эпизоотологии и генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт,используемый для изготовления эмбрионольной живой сухой.(72) Кутумбетов Леспек Бекболатович Мырзахметова Балжан Шайзадаевна Абдыхаимова Назира Умирбаевна (анатай Ма)пал (анатай)ызы(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(54) ШТАММ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО ЛАРИНГОТРАХЕИТА КУР ИЛ-10 КАЗНИВИ-003 (КАЗНИВИ), ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ЭМБРИОНАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ЖИВОЙ СУХОЙ Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и может быть использовано при изготовлении вакцины для профилактики инфекционного ларинготрахеита кур,использованный для изучение вакцины Эпизоотология. -Москва Колос, 1974, с.472-479. Известен вакцинный штамм ВНИИБП вируса инфекционного ларинготрахеита кур Недостатком известного штамма вируса является то, что он обладает остаточной вирулентностью и вакцина изготовленная на его основе имеет повышенную реактогенность по отношению прививаемой птице. Задачей изобретения является получение штамма вируса инфекционного ларинготрахеита кур с пониженной остаточной вирулентностью и достаточно высокой иммуногенностью. Технический результат,обспечиваемый изобритением, выражается в получении штамма вируса инфекционного ларинготрахеита кур,пригодного для изготовления слабореактигенной,иммунологически эффективной живой сухой вакцины. Указанный штамм вируса инфекционного ларинготрахеита кур депонирован в лаборатории эпизоотологии и генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт (КазНИВИ). Штамм вируса инфекционного ларинготрахеита кур ИЛ-10 КазНИВИ-003, (КазНИВИ) депонирован в лаборатории эпизоотологии и генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт,используемый для изготовления эмбрионольный живой сухой вакцины против инфекционного ларинготрахеита кур. Штамм вируса инфекционного ларинготрахеита кур ИЛ-10 КазНИВИ-003, (КазНИВИ) Штамм получен из вирулентного вируса инфекционного ларинготрахеита кур, выделенного из слизистой трахеи павшей курицы, доставленной из приусадебного хозяйства Илийского района Алматинской области,путем аттенуации принудительными перемежающимися пассажами в РКЭ,инкубируемых при пониженной и повышенной температурах. Полученный штамм характеризуется следующими признаками . Назначение штамма штамм инфекционного ларинготрахеита кур ИЛ-10 КазНИВИ -003,(КазНИВИ) аттенуированный,не обладает патогенностью по отношению к естественно восприимчивой птице(курам),активно репродуцируется в развивающихся куриных эмбрионах с образованием однородных бляшек в хориоаллантоисной оболочке. Штамм вируса обладает высокой иммуногенной эффективностью и используется для изготовления вакцины. Штамм вируса ИЛ-10 КазНИВИ 003, (КазНИВИ) получают путем культивирование в развывающихся куриных эмбрионах 10-12 суточного возраста, инкубируемых при температуре 37,5-38 С и влажности воздуха не ниже 50. 2 Морфологические признаки. Вирус инфекционного ларинготрахеита кур относится к семействуроду . Геном вируса инфекционного ларинготрахеита кур предоставлен в составе наружный оболочки клетки гликопротеины весом (205, 160, 115, 90, 85, 74, 60, и 50 кД). Гликопротеин Вявляется первым структурным белком вируса ИЛТ кур. Культуральные свойства. Штамм инфекционного ларинготрахеита кур ИЛ-10 КазНИВИ-003,(КазНИВИ) репродуцируется в хориоаллантоисной оболочке развивающихся куриных эмбрионов 10-12 суточного возроста, накапливается в титрах 100,6100,7,ЭИД 50/Г эмбриональные инфекционные дозы,вызывающие 50 инфекционный эффект в развивающихся куриных эмбрионах. Штамм инфекционного ларинготрахеита кур ИЛ-10 КазНИВИ-003, (КазНИВИ) репродуцируется в развивающихся куриных эмбрионах без дополнительных адаптационных пассажей с формированием характерных однородных бляшек в хориоаллантоисной оболочке и накапливается в максимальных титрах на 5-7 сутки после инфицирования. Антигенные свойства. Штамм инфекционного ларинготрахеита кур ИЛ- 10 КазНИВИ 003, (КазНИВИ) в организме иммунизированных кур стимулирует образование вируснейтрализующих, комплементсвязывающих и преципитирующих антител в титрах 31 2. 41 2. 20,5 2 соответственно. Патогенные свойства Штамм инфекционого ларинготрахеита кур ИЛ- 10 КазНИВИ 003, (КазНИВИ) не обладает патогенностью по отношению к курам привитый этим штаммом вируса. Привитая птица остается здоровой и живой. Иммуногенные свойства ИЛ-10 КазНИВИ-003, (КазНИВИ) Штамм инфекционного ларинготрахеита кур репродуцированный в развивающихся куриных эмбрионах 10-12 суточного возраста, стабилизированный защитный средой, содержащей 6 пептона, 8 сахарозы, 1 желатина, в равных объемных пропорциях, и высушенный сублимационным способом, после регидратации дистиллированной водой или физиологическим раствором хлорида натрия в дозе 10 ЭИД 50 и более обладает способностью стимулировать напряженный иммунитет у кур,привытых окулярным или клоачным способом. Стабильность свойств при пассировании Основные иммуннобиологические свойства штамма инфекционного ларинготрахеита кур ИЛ-10 КазНИВИ-003, (КазНИВИ) при пассировании в развивающихся куриных эмбрионах сохраняются на протяжении не менее 20 пассажей. Сохраняемость. Штамм инфекционного ларинготрахеита кур ИЛ-10 КазНИВИ-003,(КазНИВИ) в виде тканевой суспензии хориоаллантоисной оболочки развивающихся куриных эмбрионов не снижает свою биологическую активность в течение 10 суток при температуре 41 С 12 мес -при минус 40 С, срок наблюдения. Пример 1. Для приготовления живой сухой вакцины против инфекционного ларинготрахеита кур в начале готовят биомассу вируса инфекционного ларинготрахеита кур штамм ИЛ 10 КазНИВИ-003, (КазНИВИ) путем репродукции его в развивающихся эмбрионах кур 10-12 суточного возраста. Для этого в аллантоисную полость эмбрионов через воздушную камеру вносят шприцом вирус инфекционного ларинготрахеита кур штамм ИЛ-10 в дозе 103-104 ЭИД 50/0,3 см 3 и инокулированные эмбрионы инкубируют при температуре 37,5-38 С и влажности воздуха не ниже 50 в течение 5-6 суток. За состоянием эмбрионов наблюдает путем ежедневной овоскопии. Живые эмбрионы охлаждают при температуре 2-8 С в течение 12-18 ч и затем вскрывают асептически,собирают хориоаллантоисную оболочку с характерными бляшками,промывают е стерильным физиологическим раствором в смеси с антибиотиками (гентамицин 20 ЕД см 3) и помещают на охлаждение при температуре минус 405 С на 12-18 часов. По истечению указанного времени оболочки размораживают,размельчают до гомогенной массы с помощью гомогенизатора,разбавляют фосфатнобуферным раствором фильтруют через 4-х слойной марлевой фильтр и стабилизирует защитной средой, содержащей 6 пептона, 8 сахарозы и 1 желатина, путем смещивания в равных объемных пропорциях. Полученную смесь подвергают контролю на стерильность по ГОСТ 28085 и биологическую активность титрованием на развивающихся куриных эмбрионах. При соответствии полученной смеси вируса и стабилизирующей среди по стерильности требованием ГОСТ 28085 и наличии титра вируса в ней не ниже 106,0 ЭИД 50/см 3, разливают в пенициллиновые флаконы по 4,0 см 3, инсулиновые 1,0 см . Суспензию во флаконах замораживают при температуре минус 50 С и ниже в течение не менее 6 часов, а затем подвергают сублимации в специальной установке, создающей в камере вакуум менее 100 мм рт. ст, и температуру конденсатора ниже минус 70 С. Сублимацию проводят до достижения остаточной влажности в препарате не более 5. Высушенная таким образом смесь вируса и стабилизатора, после герментизации тары(фасовки) специальными резиновыми пробками и закатывании аллюминиевыми колпачками, используют как готовую живую сухую вакцину против инфекционного ларинготрахеита кур. Вакцину подвергают стандартизации по согласна требованием стерильность по ГОСТ 28085,безвредности и иммуногенности на молодняке кур. Для проверки без вредности вакцину растворяют на физиологическии растворе и в дозе 10 кратно привышащим иммунизируют вводя окулярно или клоачно птице в количества 10 гол. За птицей наблюдают в течение 10 суток. У всей прывытых птицы не должны развиватся какие - либо потологии в течении всего периода наблюдения. Для проверки иммуногенности растворенную вакцину в дозе по 0,05 см 3, содержащей 1000 ЭИД 50 вакцинного вируса штамма ИЛ-10 КазНИВИ-003, (КазНИВИ) вводят окулярно или клоачно молодняку кур в количестве 20 гол. Столько же голов птицы аналогичного возраста оставляют в контроле без привывки вакциной. Через 21 сутки все 20 голов птицы,подвергнутых вакцинации и все 20 гол птицы,находящиеся в контроле подвергают контрольному заражению вирулентным вирусом инфекционного ларинготрахеита кур в дозе по 500- 1000 ИД 50/0,1 см 3 путем интратрахеального введения. За зараженной птицей наблюдают в течение 14 суток. Вакцина считается, иммуногенной, если в контрольной группе забалеют не менее 16 цыплят из 20 голов, в вакцинированной группе не менее чем 16 голов птицы из 20 привытых останется здоровыми. Имеющиеся иммунобиологические свойства штамма ИЛ-10 КазНИВИ-003, (КазНИВИ) вируса инфекционного ларинготрахеита кур позволяют производить высокоиммуногенную,безвредную, живую сухую вакцину, применение которой на практике позволит эффективно регулировать среди кур эпизоотическую ситуацию по инфекционному ларинготрахеиту. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм вируса инфекционного ларинготрахеита кур ИЛ-10 КазНИВИ-003, (КазНИВИ) депонирован в лаборатории эпизоотологии и генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт,используемый для изготовления эмбриональной вакцины живой сухой.