Штамм вируса инфекционного гепатита собак AV-0032 КазНИВИ, используемый для изготовления культуральной вакцины против инфекционного гепатита собак

(51) 61 39/235(2011.01) 12 7/00 (2011.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ изготовлении биопрепаратов для профилактики инфекционного гепатита плотоядных животных. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в получении штамма вируса инфекционного гепатита плотоядных,пригодного для изготовления эффективной инактивированной вакцины против инфекционного гепатита собак. Штамм вируса инфекционного гепатита собаки-0032 КазНИВИ КВ-94, депонированный в Лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научноисследовательский ветеринарный институт,используемый для изготовления культуральной вакцины против инфекционного гепатита собак.(72) Абишов Абдикалык Абдижаппарович Хайруллаева Куралай Амангельдиевна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(54) ШТАММ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО ГЕПАТИТА СОБАК -0032 КАЗНИВИ,ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО ГЕПАТИТА СОБАК(57) Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и может быть использовано при 25255 Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и может быть использовано при изготовлении биопрепаратов для профилактики инфекционного гепатита плотоядных животных. Известен вакцинный штамм против инфекционного гепатита плотоядных (Патент Российской Федерации 1459002, кл. А 61 К 39/235,1995). Недостатком данного штамма вируса является то, что изготовленная вакцина не обеспечивает удовлетворительной защиты против вируса инфекционного гепатита плотоядных циркулирующего на территории Казахстана. Задачей изобретения является получение штамма вируса инфекционного гепатита собак, пригодного для контроля иммуногенной активности профилактических препаратов. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в получении штамма вируса инфекционного гепатита плотоядных,пригодного для изготовления эффективной инактивированной вакцины против инфекционного гепатита собак. Штамм вируса инфекционного гепатита собаки-0032 КазНИВИ КВ-94, депонированный в Лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научноисследовательский ветеринарный институт,используемый для изготовления культуральной вакцины против инфекционного гепатита собак. Штамм вируса инфекционного гепатита собаки-0032 КазНИВИ КВ-94. Штамм выделен из моновалентной живой коммерческой вакцины производство России против вируса инфекционного гепатита собаки, путем адаптации его к репродукции в культуре клеток МДСК и первичнотрипсинизированной культуре клеток почки щенка(ПЩ) с помощью перемежающих пассажей на интактных щенках и культурах клеток МДСК и ПЩ. Полученный штамм характеризуется следующими признаками. Назначение штамма штамм инфекционного гепатита собаки -0032 КазНИВИ КВ-94 обладает патогенностыо по отношению естественно восприимчивых животных и высокой урожайностью. Повышает эффективность профилактических и диагностических препаратов. Используют для изготовления лечебнопрофилактических и диагностических биопрепаратов. Состав среды и условия культивирования среда Игла-МЕМ, содержащий 10 сыворотки крови крупного рогатого скота и в организме 2-3 месячных интактных щенков собак. Морфологические признаки. Вирус инфекционного гепатита собак относится к семействуроду . Аденовирус плотоядных имеет капсид размером от 50 до 96 нм примерно сферической формы, лишен наружной липопротеидной оболочки, не содержит липидов и гликопротеидов. Сердцевина содержит ДНК и два внутренних белка, один из которых обладает 2 необычным аминокислотным составом. Гексон,основание пептона и нить вириона построены из полипептидов с мол. массой 120103 Д, 70103 Д и 62103 Д соответственно. Три дополнительных белка, богатых аргинином с мол. массой 46103 Д,24103 Д и 22103 Д, локализованы во внутренней сердцевине,составляющей 20 вириона. Нуклеиновая кислота составляет 11,6-13,5 массы вириона. Штамм инфекционного гепатита собаки -0032 КазНИВИ КВ-94 обладает морфологическими признаками, свойственными для возбудителя инфекционного гепатита плотоядных родасемейства . Культуральные свойства. Штамм инфекционного гепатита собаки -0032 КазНИВИ КВ-94 репродуцируется и накапливается в перевиваемой культуре клеток МДСК в титре 105,0 ТЦД 50/см 3(титр цитопатических доз, вызывающий 50 цитопатическое действие в монослое клеток). В указанной культуре клеток штамм инфекционного гепатита собаки -0032 КазНИВИ КВ-94 размножается после двукратного перемежающего пассажа по схеме Культура клеток-организм щенка. Выраженное цитопатическое действие вируса установлено на третьем пассаже и время репродукции в культуре клеток 8-10 суток. Антигенные свойства. Штамм инфекционного гепатита собаки -0032 КазНИВИ КВ-94 в организме инфицированных животных (собаки,кролики, овцы и козы) вызывает образование вируснейтрализующих, комплементсвязывающих и прецепитирующих антител. Патогенные свойства. Штамм инфекционного гепатита собаки -0032 КазНИВИ КВ-94 у инфицированных интактных щенков вызывает развитие клинических признаков инфекционного гепатита на 5-6 сутки после введения (угнетение,анарексия,повышение температуры,рвота,воспаление слизистых оболочек,диарея),заканчивающаяся гибелью животных на 3-4 сутки после проявления симптомов инфекции. Иммуногенная свойства. Штамм инфекционного гепатита собаки -0032 КазНИВИ КВ-94 репродуцированный в культуре клеток МДСК,инактивированный формальдегидом и адсорбированный гидроокисью алюминия при подкожном или внутримышечном введении щенкам собак в дозе 1,0 см 3 способствует образованию напряженного иммунитета. При контрольном заражении все иммунизированные животные оставались клинически здоровы в течении 10 суток. Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штамма инфекционного гепатита собаки -0032 КазНИВИ КВ-94, при пассировании в культуре клеток МДСК и ПЩ сохраняются в течение 10 пассажей(срок наблюдения). Сохраняемость. Штамм инфекционного гепатита собаки -0032 КазНИВИ КВ-94 в виде культуральной суспензии не снижает свои биологической активности в течение 40 суток при 25255 температуре 41 С, 18 мес - при минус 30 С , а в 20-го органотканевом суспензии 36 мес при минус 40 С. Пример 1. Для приготовления инактивированной вакцины против инфекционного гепатита плотоядных, штамм инфекционного гепатита собаки-0032 КазНИВИ КВ-94 репродуцируют в перевиваемой линии клеток МДСК, выращенный стационарным способом в среде ИГЛА-МЕМ,содержащий 10 сыворотки крови крупного рогатого скота. Для инфицирования культур клеток используют клеток одно- или двух суточного возраста со сплошным монослоем, без каких либо дегенеративных изменений. На 5-6 сутки после заражении клеток, при поражении 70-80 площади монослоя, проводят замораживание сосудов. Через 24 часа после заморозки сосуды размораживают при комнатной температуре,после чего вируссодержащую суспензию объединяют и определяют биологическую активность вируса путем титрования на культуре клеток МДСК или ПЩ. Биологическая активность вирусной суспензии,используемый для изготовления препаратов составляет не менее 105,0-6,0 ТЦД 50/см 3. Вирусную биомассу инактивируют раствором формальдегида в конечной концентрации 0,3 в течении 72 ч при 37 С. Остаточный формальдегид в вирусной суспензии нейтрализуют добавлением 10 раствора тиосульфата натрия. После нейтрализации остаточного формальдегида полноту инактивации возбудителя проверяют путем трехкратного пассирования на перевиваемой линии клеток МДСК. При пассировании вируса на указанной культуре клеток не должна наблюдаться цитопатическое действие вируса. На вирусную суспензию добавляют гель гидрата окиси алюминия в конечной концентрации 1 и после тщательного перемешивания выдерживают в течение 24 часов при 4 С. Полученная таким образом суспензия используется в качестве вакцины против инфекционного гепатита плотоядных для иммунизации восприимчивых животных. Интактных щенков собак 8-10 месячного возраста иммунизируют вакциной против инфекционного гепатита собак, в дозе 1,0 см 3 внутримышечно. Через 21 сутки после вакцинации иммунизированных и не иммунных животных инфицируют штаммом инфекционного гепатита собаки -0032 КазНИВИ КВ-94 в дозе 10000 ТЦЦ 50/СМ 3. За животными ведут ежедневное наблюдение с двукратной термометрией. При этом у животных контрольной группы на 5-7 сутки после их заражения они должны заболеть инфекционным гепатитом с проявлением характерных признаков, а иммунизированные животные остаться здоровыми. Использование штамма вируса инфекционного гепатита собаки -0032 КазНИВИ КВ-94 позволит изготовить эффективную инактивированную вакцину против инфекционного гепатита собак и предотвратить их падеж. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм вируса инфекционного гепатита собак-0032 КазНИВИ, депонированный в Лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт,под КВ-94,используемый для изготовления культуральной вакцины против инфекционного гепатита собак.