Штамм вируса инфекционного гепатита собак “а-95″ av-0033 казниви, используемый для изготовления профилактических и диагностических биопрепаратов

(51) 61 39/235 (2009.01) 12 7/00 (2009.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в получении штамма вируса инфекционного гепатита плотоядных,пригодный для изготовления эффективной инактивированной вакцины,антигена и специфической сыворотки для серологической диагностики инфекционного гепатита. Штамм вируса инфекционного гепатита собаки А-95 -0033 КазНИВИ, используемый для накопления биомассы возбудителя получают путем репродукции его в перевиваемой культуре клеток МДСК или первичнотрипсинизированной культуре клеток почек щенят. Указанный штамм вируса инфекционного гепатита собаки А-95 -0033 КазНИВИ депонирован в лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(72) Абишов Абдикалык Абдижаппарович Хайруллаева Куралай Амангелдиевна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(56) Чижов В.А. Инфекционный гепатит песцов и серебристо-черных лисиц // Болезни пушных зверей,М. Колос, - 1984, с. 48-58(54) ШТАММ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО ГЕПАТИТА СОБАК А-95 -0033 КазНИВИ,ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ И ДИАГНОСТИЧЕСКИХ БИОПРЕПАРАТОВ(57) Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и может быть использовано при изготовлении биопрепаратов для профилактики и серологической диагностики инфекционного гепатита плотоядных животных. 22742 Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и может быть использовано при изготовлении биопрепаратов для профилактики и серологической диагностики инфекционного гепатита плотоядных животных. Известен эпизоотический штамм Песец-1630 вируса инфекционного гепатита плотоядных,применяемый для изготовления инактивированной вакцины против инфекционного гепатита плотоядных В кн. Болезни пушных зверей, М. Колос, -1984, с.48-58. Недостатком данного штамма вируса является то, из-за давности его времени получения, часто приходит в несоответствие по антигенности с циркулирующими в природе возбудителями вируса инфекционного гепатита плотоядных. Задачей изобретения является получение штамма вируса инфекционного гепатита собаки, пригодный для контроля иммуногенной активности профилактических препаратов и изготовления лечебно-профилактических,диагностических биопрепаратов. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в получении штамма вируса инфекционного гепатита плотоядных,пригодной для изготовления эффективной инактивированной вакцины,антигена и специфической сыворотки для серологической диагностики инфекционного гепатита. Штамм вируса инфекционного гепатита собаки А-95 - 0033 КазНИВИ, используемый для накопления биомассы возбудителя получают путем репродукции его в перевиваемой культуре клеток МДСК или первичнотрипсинизированной культуре клеток почек щенят. Указанный штамм вируса инфекционного гепатита собаки А-95 -0033 КазНИВИ депонирован в лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(КазНИВИ). Штамм вируса инфекционного гепатита собаки А-95 -0033 КазНИВИ Штамм получен из полевого изолята вируса инфекционного гепатита собаки, выделенного в 2001 году от больного щенка с клиническими признаками заболевания в г.Алматы путем адаптации его к репродукции в культуре клеток МДСК и ПЩ с помощью перемежающих пассажей на интактных щенках и культурах клеток МДСК и ПЩ. Полученный штамм характеризуется следующими признаками. Назначение штамма штамм инфекционного гепатита собаки А-95 -0033 КазНИВИ обладает патогенностью по отношению естественно восприимчивых животных и высокой урожайностью. Повышает эффективность профилактических и диагностических препаратов. Используют для изготовления лечебнопрофилактических и диагностических биопрепаратов. 2 Состав среды и условия культивирования среда Игла-, содержащий 10 сыворотки крови крупного рогатого скота и в организме 2-3 месячных интактных щенков собак. Морфологические признаки. Вирус инфекционного гепатита собак относится к семействуроду . Аденовирус плотоядных имеет капсид размером от 50 до 96 нм примерно сферической формы, лишен наружной липопротеидной оболочки, не содержит липидов и гликопротеидов. Сердцевина содержит ДНК и два внутренних белка, один из которых обладает необычным аминокислотным составом. Гексон, основание пентона и нить вириона построены из полипептидов с мол. массой 120103 Д,70103 Д и 62103 Д соответственно. Три дополнительных белка, богатых аргинином с мол. массой 46103 Д, 24103 Д и 22103 Д, локализованы во внутренней сердцевине, составляющей 20 вириона. Нуклеиновая кислота составляет 11,613,5 массы вириона. Штамм инфекционного гепатита собаки А-95-0033 КазНИВИ обладает морфологическими признаками, свойственными для возбудителя инфекционного гепатита плотоядных родасемейства . Культуральные свойства. Штамм инфекционного гепатита собаки А-95 -0033 КазНИВИ репродуцируется и накапливается в перевиваемой культуре клеток МДСК в титре 104,75 ТЦД 50/см 3(титр цитопатических доз, вызывающий 50 цитопатическое действие в монослое клеток). В указанной культуре клеток штамм инфекционного гепатита собаки А-95 -0033 КазНИВИ размножается после двукратного перемежающего пассажа по схеме Культура клеток-организм щенка. Выраженное цитопатическое действие вируса установлено на третьем пассаже и время репродукции в культуре клеток 8-10 суток. Антигенные свойства. Штамм инфекционного гепатита собаки А-95 -0033 КазНИВИ в организме инфицированных животных (собаки,кролики, овцы и козы) вызывает образование вируснейтрализующих, комплементсвязывающих и прецепитирующих антител. Патогенные свойства. Штамм инфекционного гепатита собаки А-95 -0033 КазНИВИ у инфицированных интактных щенков вызывает развитие клинических признаков инфекционного гепатита на 5-6 сутки после введения (угнетение,анарексия,повышение температуры,рвота,воспаление слизистых оболочек,диарея),заканчивающаяся гибелью животных на 3-4 сутки после проявления симптомов инфекции. Иммуногенная свойства. Штамм инфекционного гепатита собаки А-95 -0033 КазНИВИ репродуцированный в культуре клеток МДСК,инактивированный формальдегидом и адсорбированный гидроокисью алюминия при подкожном или внутримышечном введении щенкам собак в дозе 1,0 см 3 способствует образованию напряженного иммунитета. При контрольном 22742 заражении все иммунизированные животные оставались клинически здоровы в течении 10 суток. Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штамма инфекционного гепатита собаки А-95 -0033 КазНИВИ, при пассировании в культуре клеток МДСК и ПЩ сохраняются в течение 10 пассажей(срок наблюдения). Сохраняемость. Штамм инфекционного гепатита собаки А-95 -0033 КазНИВИ в виде культуральной суспензии не снижает свои биологической активности в течение 40 сут при температуре 41 С, 18 мес - при минус 30 С, а в 20-го органотканевом суспензии 36 мес при минус 40. Пример 1. Для приготовления инактивированной вакцины против инфекционного гепатита плотоядных, штамм инфекционного гепатита собаки А-95 -0033 КазНИВИ репродуцируют в перевиваемой линии клеток МДСК, выращенный стационарным или роллерным способами в среде ИГЛА-МЕМ, содержащий 10 сыворотки крови крупного рогатого скота. Для инфицирования культур клеток используют клеток одно- или двух суточного возраста со сплошным монослоем, без каких либо дегенеративных изменений. На 5-6 сутки после заражении клеток, при поражении 70-80 площади монослоя, проводят замораживание сосудов. Через 24 часа после заморозки сосуды размораживают при комнатной температуре,после чего вируссодержащую суспензию объединяют и определяют биологическую активность вируса путем титрования на культуре клеток МДСК или ПЩ. Биологическая активность вирусной суспензии,используемый для изготовления препаратов должен быть не менее 104,75 ТЦД 50/см 3. Вирусную биомассу инактивируют раствором формальдегида в конечной концентрации 0,3 в течении 72 ч при 37 С. Остаточный формальдегид в вирусной суспензии нейтрализует добавлением 10 раствора тиосульфата натрия. После нейтрализации остаточного формальдегида полноту инактивации возбудителя проверяют путем трехкратного пассирования на перевиваемой линии клеток МДСК. При пассировании вируса на указанной культуре клеток не должна наблюдаться цитопатическое действие вируса. На вирусную суспензию добавляют гель гидрата окиси алюминия в конечной концентрации 1 и после тщательного перемешивания выдерживают в течении 24 часов при 4 С. Полученная таким образом суспензия используется в качестве вакцины против инфекционного гепатита плотоядных для иммунизации восприимчивых животных. Интактных щенков собак 8-10 месячного возраста иммунизируют вакциной против инфекционного гепатита собак, в дозе 1,0 см 3 внутримышечно. Через 21 сутки после вакцинации иммунизированных и не иммунных животных инфицируют штаммом инфекционного гепатита собаки А-95 -0033 КазНИВИ в дозе 10000 ТЦД 50/см 3. За животными ведут ежедневное наблюдение с двукратной термометрией. При этом у животных контрольной группы на 5-7 сутки после их заражения они должны заболеть инфекционным гепатитом с проявлением характерных признаков, а иммунизированные животные остаться здоровыми. Пример 2. Способ получения гипериммунной сыворотки для серологических реакций при инфекционного гепатита собаки используют штамм инфекционного гепатита собаки А-95 -0033 КазНИВИ. Для репродукции вируса используют культуру клеток МДСК. Двух суточных культур клеток инфицируют вирусом инфекционного гепатита в дозе 0,001 ТЦД/кл. При поражении 7080 площади монослоя сосуды замораживают,после размораживания инактивируют 0,3 формальдегидом при 37 С в течение 72 часов,адсорбируют гидратом окиси алюминия и используют в качестве антигенсодержащего материала для гипериммунизации животных. Животных иммунизируют четырехкратно первое введение антигена в дозе 1,0 см 3 внутримышечно, а последующие через каждые 10 суток в дозе 2,0 см 3 в область лопатки. Перед каждым введением антигена осуществляют забор крови для определения уровней специфических антител. Через 14 дней после последней инъекции животных тотально обескровливают. Полученную сыворотку инактивируют в водяной бане при температуре 63 С в течение 30 мин. разливают в стерильные ампулы по 1 мл, подвергают сублимационной сушке и получают готовый продукт. Использование штамма вируса инфекционного гепатита собаки позволит повысит иммуногенную активность вакцинного препарата и диагностическую ценность антигена изготовленного из данного штамма. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм вируса инфекционного гепатита собак А-95 -0033 КазНИВИ, родасемейства(лаборатория по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт), используемый для изготовления профилактических и диагностических биопрепаратов.