Штамм вируса чумы плотоядных AV-0329, используемый для изготовления профилактических и диагностических биопрепаратов

(51) 12 7/00 (2006.01) 61 39/00 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(72) Абишов Абдикалык Абдижаппарович Хайруллаева Куралай Амангельдиевна(73) Дочернее государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Научноисследовательский ветеринарный институт Республиканского государственного предприятия на праве хозяйственного ведения Научнопроизводственный центр животноводства и ветеринарии Министерства сельского хозяйства Республики Казахстан(56) Аулова С.В. Экспериментальное заражение соболей вирусом чумы плотоядных. Ветеринария 2, 1991, с. 33-34(54) ШТАММ ВИРУСА ЧУМЫ ПЛОТОЯДНЫХ-0329, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ И ДИАГНОСТИЧЕСКИХ БИОПРЕПАРАТОВ(57) Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и может быть использовано при изготовлении биопрепаратов для профилактики и серологической диагностики чумы плотоядных животных. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в получении штамма вируса чумы плотоядных,пригодной для изготовления эффективной инактивированной вакцины, антигена и специфической сыворотки для серологической диагностики чумы. Штамм вируса чумы плотоядных -0329,используемый для изготовления профилактических и диагностических биопрепаратов. Указанный штамм вируса чумы плотоядных депонирован в лаборатории Музей культур микроорганизмов ДГП Научноисследовательский ветеринарный институт 20327 Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и может быть использовано при изготовлении биопрепаратов для профилактики и серологической диагностики чумы плотоядных животных. Известен эпизоотический штаммвируса чумы плотоядных, применяемый для контроля иммуногенной активности профилактических препаратов Аулова С.В. Экспериментальное заражение соболей вирусом чумы плотоядных // Ветеринария.- 2. - 1991. с. 3334 Недостатком данного штамма вируса является то, из-за давности его времени получения, часто приходит в несоответствие по антигенности с циркулирующими в природе возбудителями вируса чумы плотоядных. Задачей изобретения является получение штамма вируса чумы плотоядных, пригодный для контроля иммуногенной активности профилактических препаратов и для изготовления лечебнопрофилактических, диагностических биопрепаратов. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в получении штамма вируса чумы плотоядных,пригодной для изготовления эффективной инактивированной вакцины, антигена и специфической сыворотки для серологической диагностики чумы. Штамм вируса чумы -0329 Д-2004,используемый для накопления биомассы возбудителя получают путем репродукции его в перевиваемой культуре клеток . Указанный штамм вируса чумы плотоядных депонирован в лаборатории Музей культур микроорганизмов ДГП Научно-исследовательский ветеринарный институт (КазНИВИ). Штамм вируса чумы плотоядных -0329 Д 2004 Штамм получен из полевого изолята вируса чумы, выделенного в 2004 году от больного щенка с клиническими признаками заболевания в г.Алматы путем адаптации его к репродукции в культуре клетокс помощью перемежающих пассажей на интактных щенках и перевиваемой линии культуры клеток . Полученный штамм характеризуется следующими признаками. Назначение штамма штамм -0329 Д-2004 вируса чумы плотоядных обладает патогенностью по отношению естественно восприимчивых животных и высокой урожайностью. Повышает эффективность профилактических и диагностических препаратов. Используют для изготовления лечебно-профилактических и диагностических биопрепаратов. Состав среды и условия культивирования среда Игла, содержащий 10 сыворотки крови крупного рогатого скота и в организме 2-3-месячных интактных щенков. Морфологические признаки. Вирус чумы плотоядных относится к семействуродус липопротеидной оболочкой диаметром от 150-300 нм. Нуклеокапсид в виде 2 единого тяжа длиной 1 мкм состоит из РНК и белковых субъединиц, уложенных в спираль, мол. масса 6-104 Д. Вирионы содержат около 1 одноцепочной РНК с мол. массой 4-8106 Д, состав оснований А-20-26 Г-24-25 Ц-24-27 У-2231.Вирус чумы плотоядных содержат 6 основных белков -, , , ,1 и 2 имеющих мол. массу 200000, 76000, 66000, 58000, 40000 и 23000 Д соответственно. Штамм -0329 Д-2004 вируса чумы плотоядных обладает морфологическими признаками, свойственными для возбудителя чумы плотоядных рода. Культуральные свойства. Штамм -0329 Д 2004 вируса чумы плотоядных репродуцируется и накапливается в перевиваемой культуре клетокв титре 104,5 ТЦД 50/см 3 (титр цитопатических доз,вызывающий 50 цитопатическое действие в монослое клеток). В указанной культуре клеток штамм -0329 Д-2004 размножается после двукратного перемежающего пассажа по схеме Культура клеток-организм щенка. Выраженное цитопатическое действие вируса установлено на третьем пассаже и время репродукции в культуре клеток 8-10 суток. Антигенные свойства. Штамм -0329 Д-2004 вируса чумы плотоядных в организме инфицированных животных (собаки, кролики, овцы и козы) вызывает образование вируснейтрализующих, комплементсвязывающих и прецепитирующих антител. Патогенные свойства. Штамм -0329 Д-2004 вируса чумы плотоядных у инфицированных интактных щенков вызывает развитие клинических признаков чумы на 4-5 сутки после введения(угнетение, анарексия, повышение температуры,рвота, воспаление слизистых оболочек, диарея,пустулезный сыпь на коже), заканчивающаяся гибелью животных на 3-4 сутки после проявления симптомов инфекции. Иммуногенная свойства. Штамм -0329 Д 2004 вируса чумы плотоядных репродуцированный в культуре клеток , инактивированный формальдегидом и адсорбированный гидроокисью алюминия при подкожном или внутримышечном введении щенкам собак в дозе 1,0 мл способствует образованию напряженного иммунитета. При контрольном заражении все иммунизированные животные оставались клинически здоровы в течении 10 суток. Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штамма -0329 Д-2004 вируса чумы плотоядных,при пассировании в культуре клетоксохраняются в течение 10 пассажей (срок наблюдения). Сохраняемость. Штамм -0329 Д-2004 вируса чумы плотоядных в виде культуральной суспензии не снижает свои биологической активности в течение 40 сут при температуре 41 С, 18 мес - при минус 30 С, а в 20-го оргканотканевом суспензии 36 мес при минус 40 С. 20327 Пример 1. Для приготовления инактивированной вакцины против чумы плотоядных штамм -0329 Д-2004 вируса чумы плотоядных репродуцируют в перевиваемой линии клеток , выращенный стационарным или роллерным способами в среде ИГЛА-МЕМ, содержащий 10 сыворотки крови крупного рогатого скота. Для инфицирования культур клеток используют клеток двух суточного возраста со сплошным монослоем, без каких либо дегенеративных изменений. На 5-6 сутки после заражении клеток, при поражении 60-70 площади монослоя, проводят замораживание сосудов. Через 24 часа после заморозки сосуды размораживают при комнатной температуре,после чего вируссодержащую суспензию объединяют и определяют биологическую активность вируса путем титрования на культуре клеток . Биологическая активность вирусной суспензии,используемый для изготовления препаратов должен быть не менее 104,5 ТЦД 50/см 3. Вирусную биомассу инактивируют раствором формальдегида в конечной концентрации 0,2 в течении 48 ч при 37 С. Остаточный формальдегид в вирусной суспензии нейтрализует добавлением 10 раствора тиосульфата натрия. После нейтрализации остаточного формальдегида полноту инактивации возбудителя проверяют путем трехкратного пассирования на перевиваемой линии клеток . При пассировании вируса на указанной культуре клеток не должна наблюдаться цитопатическое действие вируса. На вирусную суспензию добавляют гель гидрата окиси алюминия в конечной концентрации 1 и после тщательного перемешивания выдерживают в течении 24 часов при 4 С. Полученная таким образом суспензия используется в качестве вакцины против чумы плотоядных для иммунизации животных. Интактных щенков собак 8-10 месячного возраста иммунизируют вакциной против чумы плотоядных в дозе 1 мл внутримышечно. Через 21 сутки после вакцинации иммунизированных и не иммунных животных инфицируют штаммом 0329 Д-2004 вируса чумы в дозе 1000 ТЦД 50/см 3. За животными ведут ежедневное наблюдение с двукратной термометрией. При этом у животных контрольной группы на 5-7 сутки после их заражения они должны заболеть чумой с проявлением характерных признаков,а иммунизированные животные остаться здоровыми. Пример 2. Способ получения гипериммунной сыворотки для серологических реакций при чумы плотоядных используют штамм -0329 Д-2004 вируса чумы плотоядных. Для репродукции вируса используют культуру клеток . Двух суточных культур клеток инфицируют вирусом чумы в дозе 0,001 ТЦД/кл. При поражении 60-70 площади монослоя сосуды замораживают,после размораживания инактивируют 0,2 формальдегидом при 37 С в течение 48 часов,адсорбируют гидратом окиси алюминия и используют в качестве антигенсодержащего материала для гипериммунизации животных. Животных иммунизируют четырехкратно первое введение антигена в дозе 1 мл внутримышечно, а последующие через каждые 10 суток в дозе 2 мл в область лопатки. Перед каждым введением антигена осуществляют забор крови для определения уровней специфических антител. Через 14 дней после последней инъекции животных тотально обескровливают. Полученную сыворотку инактивируют в водяной бане при температуре 63 С в течение 30 мин. разливают в стерильные ампулы по 1 мл,подвергают сублимационной сушке и получают готовый продукт. Использование штамма вируса чумы плотоядных позволит повысит иммуногенную активность вакцинного препарата и диагностическую ценность антигена изготовленного из данного штамма. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм вируса чумы плотоядных -0329 Д 2004, семейства , рода(Музей культур микроорганизмов ДГП Научноисследовательский ветеринарный институт),используемый для изготовления профилактических и диагностических биопрепаратов.