Штамм вируса чумы плотоядных аv-0029 казниви “ввк-95″, используемый для изготовления культуральной вакцины

(2010.01), 61 37/06 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ вируса из аттенуированного производственного штамма Рокборн путем селекции вирионов вируса с помощью предельных разведений и перемежающих пассажей в перевиваемой клеточной линии клетоки первичнотрипсинизированной культуре клеток куриных фибробластов, пригодной для изготовления эффективной сухой культуральной вакцины. Штамм вируса чумы плотоядных -0029 КазНИВИ ВВК-95, используемый для накопления биомассы возбудителя получают путем репродукции его в первичнотрипсинизированной культуре клеток куриных фибробластов. Указанный штамм вируса чумы плотоядных депонирован в лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(72) Абишов Абдикалык Абдижаппарович Хайруллаева Куралай Амангельдиевна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(56) Чумаков М.П. Сухая культуральная вирусвакцина против чумы плотоядных // Ветеринарные препараты, 1981, с. 123-124(54) ШТАММ ВИРУСА ЧУМЫ ПЛОТОЯДНЫХ А-0029 КАЗНИВИ ВВК-95,ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ(57) Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и может быть использовано для профилактики чумы плотоядных животных. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в получении штамма 22777 Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и может быть использовано для профилактики чумы плотоядных животных. Известен штамм Рокборн вируса чумы плотоядных, используемый для изготовления культуральной вакцины против чумы плотоядных Чумаков М.П. Сухая культуральная вирусвакцина против чумы плотоядных // В кн. Ветеринарные препараты. - 1981. с. 123-124. Недостатком данного штамма вируса является то, что он активно размножается только на перевиваемой линии клеток МДСК. Задачей изобретения является получение штамма вируса чумы плотоядных для изготовления культуральной вакцины против чумы, способного репродуцироваться в первичнотрипсинизированной культуре клеток куриных фибробластов в титре не менее 105 ТЦД 50/см 3 (титр цитопатических доз вызывающий 50 цитопатическое действие в культуре клеток), обладающего иммуногенной эффективностью, безвредного при применении. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в получении штамма вируса из аттенуированного производственного штамма Рокборн путем селекции вирионов вируса с помощью предельных разведений и перемежающих пассажей в перевиваемой клеточной линии клетоки первичнотрипсинизированной культуре клеток куриных фибробластов, пригодной для изготовления эффективной сухой культуральной вакцины. Штамм вируса чумы -0029 КазНИВИ ВВК 95, используемый для накопления биомассы возбудителя получают путем репродукции его в первичнотрипсинизированной культуре клеток куриных фибробластов (КФ). Указанный штамм вируса чумы плотоядных депонирован в лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(КазНИВИ). Штамм вируса чумы плотоядных -0029 КазНИВИ ВВК-95. Штамм вируса чумы плотоядных получен из вакцинного штамма путем селекции вирионов и адаптации его к репродукции в первичнотрипсинизированной культуре клеток куриных фибробластов (КФ). Штамм характеризуется следующими признаками. Назначение штамма штамм -0029 КазНИВИ ВВК-95 вируса чумы плотоядных обладает авирулентностью, иммуногенной и антигенной активностью,повышает эффективность профилактического препарата. Используют для изготовления сухой культуральной вакцины против чумы плотоядных. Состав среды и условия культивирования На первичнотрипсинизированной культуре клеток куриных фибробластов в питательной среде Игла-МЕМ, содержащий 10 сыворотки крови крупного рогатого скота. 2 Морфологические признаки. Вирус чумы плотоядных относится к семействуродус липопротеидной оболочкой диаметром от 150-300 нм. Нуклеокапсид в виде единого тяжа длиной 1 мкм состоит из РНК и белковых субъединиц, уложенных в спираль, мол. масса 6104 Д. Вирионы содержат около 1 одноцепочечной РНК с мол. массой 4-8106 Д,состав оснований А-20-26 Г-24-25 Ц-24-27 У-2231. Вирус чумы плотоядных содержат 6 основных белков -, , , ,1 и 2 имеющих мол. массу 200000, 76000, 66000, 58000,40000 и 23000 Д соответственно. Штамм -0029 КазНИВИ ВВК-95 вируса чумы плотоядных обладает морфологическими признаками, свойственными для возбудителя чумы плотоядных рода. Культуральные свойства. Штамм -0029 КазНИВИ ВВК-95 вируса чумы плотоядных репродуцируется и накапливается в первичной культуре клеток КФ в титре 105,5 ТЦД 50/см 3 (титр цитопатических доз,вызывающий 50 цитопатическое действие в монослое клеток). Размножается и вызывает выраженный цитопатический эффект в перевиваемой клеточной линиии первичнотрипсинизированной культуре клеток куриных эмбрионов. Цитопатический эффект проявляется через 48-72 ч после заражения и характеризуется образованием круглых клеток, резко преломляющих свет. В последующем размеры патологических очагов увеличиваются и к 5-7 суткам поражается более 80 клеток монослоя. Антигенные свойства. Штамм-0029 КазНИВИ ВВК-95 вируса чумы плотоядных в организме иммунизированных животных (собак,кроликов, овец и коз) вызывает образование вируснейтрализующих, комплементсвязывающих и прецепитирующих антител. Патогенные свойства. Штамм-0029 КазНИВИ ВВК-95 вируса чумы плотоядных безвреден и не обладает вирулентностью по отношению естественно восприимчивым животным. Иммуногенная свойства. Штамм -0029 КазНИВИ ВВК-95 вируса чумы плотоядных репродуцированный в первичной культуре клеток КФ при подкожном или внутримышечном введении в дозе 1000 ТЦД 50 создает стоики иммунитет у привитых собак на 14-21 сутки после вакцинации продолжительностью 12 месяцев. Реверсибельность и контагиозность. Штамм 0029 КазНИВИ ВВК-95 вируса чумы плотоядных не восстанавливает вирулентных свойств при последовательных пассажах на щенках собак(неререверсибелен) и не передается при совместном содержании привитых и интактных собак(неконтагиозен). Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штамма -0029 КазНИВИ ВВК-95 вируса чумы плотоядных, при пассировании в первичной культуре клеток КФ 22777 сохраняются в течение 15 пассажей (срок наблюдения). Сохраняемость. Штамм -0029 КазНИВИ ВВК-95 вируса чумы плотоядных в виде культуральной суспензии не снижает свои биологической активности в течение 20 сут при температуре 41 С, 24 месяцев - при минус 30 С. Пример 1. Для приготовления культуральной вакцины против чумы плотоядных из штамма 0029 КазНИВИ ВВК-95 вирус репродуцируют в первичной культуре клеток куриных фибробластов,выращенный стационарным или роллерным способами в среде ИГЛА-, содержащий 10 сыворотки крови крупного рогатого скота. Для инфицирования используют культуру клеток двух суточного возраста со сплошным монослоем, без каких либо дегенеративных изменений. До заражения монослой клеток трехкратно промывают раствором Хенкса, подогретой до 37 С. Культур клеток заражают вирусом чумы плотоядных в дозе 0,01 ТЦД 50/кл и их инкубируют при 37 С. Ежедневно наблюдают за инфицированными клетками, путем просматривания монослоя под малым увеличением микроскопа. На 6-8 сутки после заражении клеток,при поражении 60-70 площади монослоя, проводят замораживание сосудов. Через 24 часа после заморозки сосуды размораживают при комнатной температуре,после чего вируссодержащую суспензию объединяют и определяют биологическую активность вируса путем титрования на культуре клеток куриных фибробластов. Биологическая активность вирусной суспензии,используемый для изготовления препаратов должен быть не менее 104,5 ТЦД 50/см 3. Вирусную суспензию смешивают со стабилизирующим раствором в соотношении 11 и лиофилизируют. Приготовленный таким образом сухой культуральный вирус используют в качестве вакцины против чумы плотоядных. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм вируса чумы плотоядных -0029 КазНИВИ ВВК-95, депонирован в лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт (КазНИВИ), используемый для изготовления культуральной вакцины.