Способ получения антимикробного средства и его применение

(2009.01), 61 36/06 (2009.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ биологически активного продукта, обладающего способностью к коррекции гипотиреоза. Способ получения антимикробного средства ,достигается тем, что в качестве микроорганизма используют культуру штамма гриба- 166, его культивирование проводят на жидкой модифицированной среде Чапека,дополненной картофельным отваром из расчета 1 часть отвара на 4 части среды, в конической плоскодонной колбе, заполненой средой на одну треть, мицелий отделяют фильтрацией, фильтрат концентрируют в два раза под вакуумом при разряжении 8 кПа, проводят дополнительную мембранную фильтрацию, полученный фильтрат концентрируют в пять раз и выдерживают на холоду при температуре 4 С до отделения высокополимерных фракции в виде осадка, который отделяют повторной фильтрацией, прозрачный очищенный раствор культурального фильтрата высушивают досуха под вакуумом при разряжении 8 кПа. 2. Применение антимикробного средства по п.1 в качестве биологически активного продукта,обладающего антистафилококковой активностью. 1 табл.(72) Колбай Ибрагим Сулейменулы Джакибаева Гульнар Тураровна Шин Светлана Николаевна Байдалинов Арслан Исаханович Тобагабыл Ляззат Толепбергеновна Саданов Аманкелди Курбанович Сапко Ольга Александровна Утарбаева Айжан Шарельевна Кунаева Рауза Минлиахмедовна Какимжанова Алмагуль Апсаламовна Созинова Любовь Феодосьевна(73) Дочернее государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Институт молекулярной биологии и биохимии им. М.А. Айтхожина Республиканского государственного предприятия на праве хозяйственного ведения Центр биологических исследований Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИМИКРОБНОГО СРЕДСТВА И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ(57) Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в качестве средства для борьбы со стафилококковой инфекцией. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении 22778 Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в качестве средства для борьбы со стафилокковой инфекцией. Известен способ получения антимикробного средства с антистафилококковой активностью включающий применение культурыв качестве антимикробного средства Патент 2262346 С 2 Антимикробное средство. Бюллетень Федеральной службы по интеллектуальной собственности, патентным и товарным знакам 29 от 20.10.2005. Недостатком данного способа является низкая клиническая эффективность и высокая избирательность штамма-продуцента к среде культивирования. Задачей изобретения является получение эффективного и дешевого средства для борьбы со стафилококковой инфекцией. Поставленная задача, достигается тем, что в качестве микроорганизма используют культуру штамма гриба- 166, его культивирование проводят на жидкой модифицированной среде Чапека, дополненной картофельным отваром из расчета 1 часть отвара на 4 части среды, в конической плоскодонной колбе,заполненой средой на одну треть, мицелий отделяют фильтрацией, фильтрат концентрируют в два раза под вакуумом при разряжении 8 кПа, проводят дополнительную мембранную фильтрацию,полученный фильтрат концентрируют в пять раз и выдерживают на холоду при температуре 4 С до отделения высокополимерных фракции в виде осадка, который отделяют повторной фильтрацией,прозрачный очищенный раствор культурального фильтрата высушивают досуха под вакуумом при разряжении 8 кПа. Полученное антимикробное средство применяют в качестве биологически активного продукта,обладающего антистафилококковой активностью. Штамм гриба . - 166 используют для испытания средств защиты растений,резистентности различных сортов картофеля к фузариозам и др. Штамм - 166 был получен из Республиканской коллекции микроорганизмов РК. Пример 1. Культуру штамма гриба .166 культивировали на жидкой модифицированной среде Чапека Билай В.И Фузарии. Наукова думка. -1977.с.441,дополненной картофельным отваром из расчета 1 часть отвара на 4 части среды, в конической плоскодонной колбе объемом 500 см 3 с содержанием питательной среды около 150 см 3 в термостате при температуре 25-27 С без перемешивания в течение 18-19 дней. Пример 2. Среду культивирования гриба отделяли от мицелия с помощью фильтрации через бумажный складчатый фильтр. Культуральный фильтрат концентрировали в роторном испарителе при температуре 38-40 С при разряжении 8 кПа до половины первоначального объема. Полученный концентрат фильтровали с помощью вакуумфильтрационной установки через 2 мембранный фильтр с размером пор 0,22 мкм. Фильтрат концентрировали в роторном испарителе при температуре 38 - 40 С при разряжении 8 кПа до 1/5 объема. Концентрированный фильтрат выдерживали в холодильнике при температуре 4 С в течение 48 часов. Выпавший осадок отделяли с помощью фильтрации через бумажный складчатый фильтр. Получали прозрачный раствор, который высушивали досуха под вакуумом. Получали препарат КФ-1. Для препарата КФбыло проведено исследование его антибактериальной активности. Пример 3. Антибактериальную активность препарата КФ-1 изучали с использованием турбидиметрического метода на штаммах 209, АТСС 3265, АТСС 6538 Р,В-0080, . 25922, .и . О наличии и выраженности эффекта судили по изменению оптической плотности (мутности) питательной среды после инкубации при 37 С через 24, 48, 72 часа. Оптическую плотность измеряли при длине волны 530 нм, . 2.6.12 (Количественное определение антибиотиков турбидиметрическим методом) Препарат КФ- вводили в среду в массообъемном соотношении 11000, которая примерно отражает наиболее часто встречаемые концентрации антибактериальных препаратов в крови после введения в организм терапевтических доз. Способность нового вещества подавлять рост патогенных микроорганизмов сравнивали с данными препаратов сравнения - цефазолина натриевой соли и ципрофлоксацина. Полученные результаты исследования антибактериальной активности препарата КФ-1 представлены в таблице 1. Как видно из таблицы 1, препарат КФнаиболее эффективно подавлял рост стафилококков,незначительно влиял на штамм эшерихии и не обладал активностью против возбудителя синегнойной инфекции (псевдомонад). По степени выраженности действия против стафилококков препарат КФ- был сопоставим с данными препаратов сравнения - натриевой соли цефазолина и ципрофлоксацина. Таким образом, препарат КФ- обладает выраженной антистафилококковой активностью при испытаниях, что может быть применимо для борьбы со стафилококковой инфекцией. Пример 4. Активность препарата КФ- против штаммов микроорганизмов чувствительных по результатам первой серии опытов дополнительно изучили методом диффузии в агаре. Полученные результаты исследования антибактериальной активности препарата КФпредставлены в таблице 2. Как видно из таблицы 2, препарат КФэффективно подавлял рост стафилококков. Причем зона подавления роста штамма-0080 была больше, чем зона подавления роста штамма 209. 22778 Таким образом, препарат КФ- обладает выраженной антистафилококковой активностью при испытаниях, что может быть применимо для борьбы со стафилококковой инфекцией. Пример 5. Исходя из того, что препарат КФпроявил наибольшую активность против патогенных микроорганизмов, на следующем этапе его изучили на моделях стафилококковых инфекций в условиях внутривенного заражения лабораторных мышей штаммом 209. Штамм был предоставлен НИВИ АО КазАгроИнновация. Культуру штамма вводили в стерильный 0,9 физиологический раствор натрия хлорида в концентрации 10000000(десять миллионов) микробных тел в 1 миллилитре. Доза введения на одно животное составила 0,5 см 3/10 г массы тела животного. Выбор вида микроорганизма обусловлен его распространенностью в качестве этиологического фактора стафилококковых инфекций. Испытания проведены на 25 белых мышах массой 21-25 г. Животные во время эксперимента находились на обычном рационе вивария. Мыши были разделены на 5 групп, по 5 животных в каждой группе 1 контрольная группа - интактные животные 2 группаинфицированные, не леченные животные 3 группаинфицированные, леченные животные(начало введения образца через 24 часа после инфицирования). Препарат вводили внутрь, в дозе 8 мг на 1 кг живого веса животного(предполагаемая среднетерапевтическая доза, составляет 1/100 от ЛД 50). Полученные результаты исследования антибактериальной активности препарата КФна модели белых мышей представлены в таблице 3. Из данных представленных в таблице 3 видно,что в группе зараженных, но не леченных животных, развилась стафилококковая инфекция у 2-х животных при вскрытии обнаружены гнойнички на печени. При этом смертность у животных не наблюдалась. Было выявлено небольшое снижение двигательной активности и аппетита. В остальных исследуемых группах визуальных изменений при вскрытии не обнаружено. Была отмечена хорошая двигательная активность и аппетит. Гибель животных отсутствовала. Таким образом, препарат КФ- обладает выраженной антистафилококковой активностью при испытанияхи, что может быть применимо для борьбы со стафилококковой инфекцией. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1.Способ получения антимикробного средства включающий культивирование микроорганизма,отличающийся тем, что в качестве микроорганизма используют культуру штамма гриба- 166, его культивирование проводят на жидкой модифицированной среде Чапека,дополненной картофельным отваром из расчета 1 часть отвара на 4 части среды, в конической плоскодонной колбе, заполненой средой на одну треть, мицелий отделяют фильтрацией, фильтрат концентрируют в два раза под вакуумом при разряжении 8 кПа, проводят дополнительную мембранную фильтрацию, полученный фильтрат концентрируют в пять раз и выдерживают на холоду при температуре 4 С до отделения высокополимерных фракции в виде осадка, который отделяют повторной фильтрацией, прозрачный очищенный раствор культурального фильтрата высушивают досуха под вакуумом при разряжении 8 кПа. 2. Применение антимикробного средства по п.1 в качестве биологически активного продукта,обладающего антистафилококковой активностью.