Питательная среда для ускоренного культивирования микобактерий туберкулеза животных

(2010.01), 12 1/20 (2010.01), 12 1/38 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ использовано для ускоренного культивирования микобактерий туберкулеза животных. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в ускорении роста микобактерий туберкулеза животных и сокращении срока получения культуральной массы. Питательная среда для культивирования микобактерий туберкулеза животных, включающая питательную основу, она в качестве питательной основы содержит сухой ферментативный пептон,агар микробиологический, натрий углекислый,картофельный крахмал, кальций хлористый при следующем соотношении компонентов, мас. сухой ферментативный пептон 5-7 агар микробиологический 0,5 - 2,5 натрий углекислый 0,09 - 0,2 картофельный крахмал 1,46- 1,48 кальций хлористый 0, 09 - 0, 2 стимулятор роста 17 - 19 вода дистиллированная остальное.(72) Жмаш Аманжол Слмгерейлы Карабекова Сауле Серикбаевна Мухамедиева Маржан Нурлановна Ашимова Карлыгаш Батырханов Мархабат Серикбаевич Сулейменова Мольдир Турсынбековна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(56) Предварительный патент РК 14202, кл. 12 1/20, 12 132, 2004(54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ УСКОРЕННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА ЖИВОТНЫХ 22779 Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и биотехнологии, и может быть использовано для ускоренного культивирования микобактерий туберкулеза животных. Известен питательная среда для культивирования микобактерий туберкулеза животных, включающая питательную основу Предварительный патент Республики Казахстан 14202, кл. С 121/20, С 12132, 2004 г. Недостатком известной питательной среды является е низкая способность к ускоренному росту микобактерий. Задачей изобретения является создание новой питательной среды, позволяющей в короткие сроки вырастить микобактерий туберкулеза. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в ускорении роста микобактерий туберкулеза животных и сокращения срока получения культуральной массы. Питательная среда для культивирования микобактерий туберкулеза животных, включающая питательную основу, она в качестве питательной основы содержит сухой ферментативный пептон,агар микробиологический, натрий углекислый,картофельный крахмал, кальций хлористый при следующем соотношении компонентов, мас. сухой ферментативный пептон 5-7 агар микробиологический 0,5 - 2,5 натрий углекислый 0,09 - 0,2 картофельный крахмал 1, 46 - 1,48 кальций хлористый 0, 09 - 0, 2 стимулятор роста микобактерий 17 - 19 вода дистиллированная остальное Стимулятор роста микобактерий туберкулеза животных состоит из сахарозы,натрия двууглекислого, смеси цитрата натрия, спирта ректифицированного и воды дистиллированной. Пример 1. Состав питательной среды используют для ускоренного культивирования микобактерий туберкулеза животных при следующем соотношении компонентов сухой ферментативный пептон 5 агар микробиологический 0,5 натрий углекислый 0,09 картофельный крахмал 1, 46 кальций хлористый 0, 09 стимулятор роста 17 вода дистиллированная остальное При этом массовое соотношение стимулятора роста и питательной среды составляет соответственно 120. Рост микобактерий наблюдается на 7 сутки. Пример 2. Состав питательной среды используют для ускоренного микобактерий культивирования туберкулеза животных так же, как и в примере 1, при соотношении компонентов сухой ферментативный пептон 6 агар микробиологический 1,5 натрий углекислый 0,1 картофельный крахмал 1,47 кальций хлористый 0, 01 стимулятор роста микобактерий 182 вода дистиллированная остальное При этом массовое соотношение стимулятора роста и питательной среды составляет соответственно 120. Рост микобактерий наблюдается на 5 сутки. Пример 3. Состав питательной среды используют для ускоренного культивирования микробактерий туберкулеза животных так же, как и в примере 1, при соотношении компонентов сухой ферментативный пептон 7 агар микробиологический 2,5 натрий углекислый 0,2 картофельный крахмал 1,48 кальций хлористый 0, 2 стимулятор роста 19 вода дистиллированная остальное При этом массовое соотношение стимулятора роста и питательной среды составляет соответственно 120. Рост микобактерий наблюдается на 6 сутки. Пример 4. Для приготовления питательной среды берут 6,0 г сухого ферментативного пептона,1,5 г агара микробиологический, 0,01 г натрий углекислый, 1, 47 г картофельный крахмал, 0,013 г кальций хлористый. В колбе все компоненты тщательно перемешивают и добавляют 18,0 см 3 стимулятора роста микобактерий. Полученную смесь вновь тщательно перемешивают ставят на водяную баню при температуре 80 С, до полного его растворения, затем постепенно добавляют 82,0 см 3 дистиллированной воды и устанавливают рН 7,0 7,2, далее полученную питательную среду стерилизуют при 121 С в течение 15 мин. После чего добавляют стимулятор роста микобактерий в соотношении 120. Полученную незастывшую питательную среду для ускоренного выращивания микобактерий разливают в стерильных условиях в чашки Петри в объеме, обеспечивающий слой среды 4-5 мм, дают среде остыть и зафиксироваться. Затем питательную среду для проверки стерильности помещают на 48 ч в термостат при температуре 80 С. Для прижизненной диагностики берут 1,0 см 3 сыворотки животных, реагирующих на туберкулин и 1,0 см 3 стимулятора роста в массовом соотношении 11. Смесь инкубируют в термостате в течение 48 ч при температуре 36-38 С. Для посмертной диагностики берут фрагменты органов или тканей, подвергшихся патологическим изменениям. Отобранный патологический материал просматривают,отмывают стерильной дистиллированной водой, поверхность прижигают нагретым шпателем, отбор пробы проводят из более глубоких слоев, путем вырезания небольших фрагментов тканей или органов, подвергшихся патологическим изменениям. В ступку насыпают песок и вносят разрезанные ножницами биоматериалы размером 0,2-0,5 см 3,наливают 5,0 раствор щавелевой кислоты и оставляют на 15-20 мин. После чего сливают раствор щавелевой кислоты, оставшийся материал размельчают пестиком до однородной массы, затем 22779 дважды отмывают в физиологическом растворе центрифугированием при 3000 об/мин в течение 10 мин. Надосадок отбрасывают, а к осадку наливают 5,0 см 3 физиологического раствора и тщательно перемешивают. Из полученной смеси берут 1,0 см 3 суспензии в гепаринизированные стерильные шприцы, затем дополнительно набирают в шприц 1,0 см 3 стимулятора роста микобактерий туберкулеза. Оба компонента вновь тщательно перемешивают и помещают в термостат при температуре 37 С на 48 час. Через 48 ч смесь сыворотки и суспензии от биоматериала со стимулятором роста высевают на питательную среду в объеме 1,0 см шприцом путем розлива по поверхности питательной среды, с тем,чтобы смесь сыворотки стимулятора роста полностью покрывала поверхность питательной среды. После посева чашки Петри со средой и посевным материалом заклеивают скотчем, не переворачивая,помещают в термостат крышками вверх. Посев на питательной среде в чашках Петри выдерживают в термостате при температуре 36-38 С в течение 5 сут. Первичный рост микобактерий туберкулеза появляется через 5-7 сут. Используемая питательная среда для ускоренного выращивания микобактерий туберкулеза животных позволит значительно ускорить получение культуры микобактерий более чем в 12 раз. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Питательная среда для ускоренного культивирования микобактерий туберкулеза животных, включающая питательную основу,отличающаяся тем, что она в качестве питательной основы содержит сухой ферментативный пептон,агар микробиологический, натрий углекислый,картофельный крахмал, кальций хлористый, воду дистиллированную и дополнительно стимулятор роста микобактерий при следующем соотношении компонентов, мас. сухой ферментативный пептон 5-7 агар микробилогический 0,5-2,5 натрий углекислый 0,09-0,2 картофельный крахмал 1,46-1,48 кальций хлористый 0,09-0,2 стимулятор роста микобактерий 17-19 вода дистиллированная остальное.