Способ ранней диагностики развития комбинированных и сочетанных пороков сердца у больных с хронической ревматической болезнью сердца казахской национальности

(51) 12 1/68 (2009.01) 01 33/48 (2009.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ предрасположенности к развитию комбинированных или сочетанных пороков сердца у больных хронической ревматической болезнью сердца (ХРБС) казахской национальности. Техническим результатом изобретения является повышение надежности и точности прогнозирования. Это достигается тем, что в заявляемом способе ранней диагностики развития комбинированных и сочетанных пороков сердца у больных хронической ревматической болезнью сердца путем забора крови и проведения генетического анализа, согласно изобретению, берут кровь больного казахской национальности, определяют полиморфизм гена АТ 2 Р и при выявлении генотипа АА илириск развития комбинированных или сочетанных пороков сердца считается высоким, а при выявлении генотипариск считают низким.(72) Шалхарова Жанат Ныгметовна Шалхарова Жанар Сайлаубековна Бахтиярова Гаухар Косылбаевна(54) СПОСОБ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ РАЗВИТИЯ КОМБИНИРОВАННЫХ И СОЧЕТАННЫХ ПОРОКОВ СЕРДЦА У БОЛЬНЫХ С ХРОНИЧЕСКОЙ РЕВМАТИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНЬЮ СЕРДЦА КАЗАХСКОЙ НАЦИОНАЛЬНОСТИ(57) Изобретение относится к области медицины, в частности к терапии и может быть использовано для раннего определения индивидуальной 22780 Изобретение относится к области медицины, в частности к терапии и может быть использовано для раннего определения индивидуальной предрасположенности к развитию комбинированных или сочетанных пороков сердца у больных хронической ревматической болезнью сердца (ХРБС) казахской национальности. Известен способ диагностики активности воспалительного процесса у больных ревматической болезнью сердца, включающий определение концентрации С - реактивного белка и содержания лимфоцитарно-тромбоцитарных розеток (тест ЛТА). Рассчитывают коэффициент воспалительной активности по формуле (ЛТА х (СРБ, где ЛТА относительное содержание лимфоцитарнотромбоцитарных розеток(Б) логарифмированный показатель концентрации Среактивного белка и при значении коэффициента менее 47,9 диагностируют отсутствие активного воспаления, при значении коэффициента 47,9-70,6 диагностируют минимальную активность воспалительного процесса и при увеличении этого показателя более 70,6 диагностируют выраженную активность воспаления с возможными развитиями осложнений.(Патент РФ 2327996, кл. 1 33/68, опубл. 27.06.2008 г., Бюл.18) Недостатком данного способа является низкая точность, т.к. при минимальной активности воспалительного процесса при ревматической болезни концентрация СРБ может оставаться в пределах нормы, а содержание лимфоцитарно тромбоцитарных розеток не могут применяться для определения индивидуальной предрасположенности к развитию осложнений. Так же данный способ не применим на ранних этапах диагностики. Известен также способ определения риска развития пороков сердца путем проведения генетического анализа и определения в крови полиморфизма гена. Сочетание гомозиготности по аллелю 66 с недостаточностью витамина 12 является фактором риска развития врожденных порока сердца.(Полиморфизм гена 66 и врожденные пороки сердца /.,.,. // . .. .-2006.-44, 11.-с 1317-1323) Недостатком данного способа является низкая эффективность, т.к. сочетание гомозиготности по аллелю 66 с недостаточностью витамина В 12 не показывает риск развития сочетанных и комбинированных пороков сердца и не может применяться у представителей разных этнических групп. Задачей изобретения является создание способа ранней диагностики развития комбинированных и сочетанных пороков сердца у больных с хронической ревматической болезнью сердца казахской национальности, позволяющего повысить надежность и точность определения риска,обусловленного генетическими факторами, что в свою очередь даст возможность в выборе 2 оптимальной стратегии и тактике лечения данной категории больных. Техническим результатом изобретения является повышение надежности и точности прогнозирования. Это достигается тем, что в заявляемом способе ранней диагностики развития комбинированных и сочетанных пороков сердца у больных хронической ревматической болезнью сердца путем забора крови и проведения генетического анализа, согласно изобретению, берут кровь больного казахской национальности, определяют полиморфизм гена АТ 2 Р и при выявлении генотипа АА илириск развития комбинированных или сочетанных пороков сердца считается высоким, а при выявлении генотипариск считают низким. Способ осуществляется следующим образом. У больного хронической ревматической болезнью сердца казахской национальности производят забор венозной крови из локтевой вены объемом 1 мл в одноразовые пластиковые пробирки с ЭДТА объемом 0,5 мл. Выделение ДНК из цельной крови осуществляют набором реагентов 200 (производство ООО Лаборатория ИзоГен). Супернатант с ДНК затем используют для генотипирования методом полимеразной цепной реакции(ПЦР) с использованием набора реагентов для ПЦР амплификации ДНК(производство ООО Лаборатория ИзоГен). Для определения 1675 А полиморфизм гена АТ 2 Р второго типа используют пары специфических олигонуклеотидных праймеров 53 и 5-3. Используют готовые для амплификации пробирки, которые содержат в лиофилизированном сухом состоянии ингибированную для горячего стартаДНК полимеразу 1 , дезоксинуклеозодтрифосфаты 200 мкМ и хлорид магния 2,5 мМ, а также оптимизированную буферную систему для проведения стандартной ПЦР амплификации. В пробиркидобавляют по 5 мкл смеси праймеров с конечной концентрацией 0,5 мкМ, 10 мкл ПЦР растворителя и по 5 мкл исследуемой ДНК. Для проведения ПЦР амплификации используютПЦР система 9700 (). Программа амплификации имела стандартную схему проведения, температура отжига составляла 55 С 1675 полиморфизм гена АТ 2 Р второго типа. После проведения ПЦРамплификации продукты реакции подвергают рестрикционному расщеплению рестриктазойв течение двух с половиной часов при температуре инкубации 60 С. Продукты рестрикционного анализа фракционируют в 6-ном полиакриламидном геле в течение 90 мин при напряжении 250 В, окрашивают бромистым этидием и визуализируют в ультрафиолетовом свете. Для определения размера фрагментов ДНК используют маркер с начальной отметкой 50 п.н. При 22780 разделении продуктов рестрикции на продукты 194 р определяют генотип АА и 61 р определяютгенотип. После получения результатов определяют возможность развития комбинированных и сочетанных пороков сердца. Если у больного хронической ревматической болезнью сердца казахской национальности выявляют генотип АА или , риск развития комбинированных или сочетанных пороков сердца считают высоким. При выявлении у больного ХРБС казахской национальности генотипариск считают низким. Пример 1. Больной Е., 52 года. Диагноз Хроническая ревматическая болезнь сердца (ХРБС). Сочетанный митральный порок сердца с преобладанием стеноза. Осл нарушение ритма по типу мерцательной аритмии постоянная форма. СНФК. Из анамнеза стаж заболевания 16 лет. Перенесенные в детстве заболевания хронический тонзилит. Наследственность неотягощена. Объективно при аускультациитон ослаблен на верхушке и у мечевидного отростка,тон ослаблен над аортой, выслушивается второй тон Траубе,систолический шум выслушивается на верхушке сердца, диастолический шум выслушивается на верхушке сердца, в точке Боткина-Эрба, во втором межреберье слева, выслушивается 2-й шум Виноградова-Дюрозье,шум Флинта. При трехкратном измерении АД 110/70, ЧСС 75 ударов в минуту. Клинический вариант течения ХРБС проявлялся следующими признаками хронической сердечной недостаточности (ХСН) - одышкой,сердцебиением, отеками, боли в суставах,утомляемостью. Также определяли индекссумма баллов - 15,2. Также у больного определяли 6-минутный тест на толерантность к физической нагрузке, который составил - 354 м., шкалу оценки клинического состояния больных с ХСН (в модификации В.Ю.Мареева, 2000) сумма баллов которого равна 10. На электрограмме (ЭКГ) мерцательная аритмия,частота сердечных сокращений 66-72 в минуту, признаки неполной блокады левой ножки пучка Гиса. Показатели эхокардиографии (ЭхоКГ) конечно-систолический размер левого желудочка (КСР) - 3,5 см, конечнодиастолический размер левого желудочка (КДР) 4,6 см, конечно-систолический объем левого желудочка(КСО) 53,4 мл,конечнодиастолический объем левого желудочка (КДО) 101,0 мл, ударный объем (УО) - 47,6 мл, минутный объем (МО) - 2,6 мл/мин, фракция выброса (ФВ) 47, дельта- 24, диаметр левого предсердия(Длп) - 4,3 см, диаметр правого желудочка (Дпж) 2,3 см, диаметр аорты (Да) - 3,2 см, толщина межжелудочковой перегородки (Тмжп) - 1,1-1,1 см,толщина задней стенки левого желудочка (Тзслж) 1,2-1,6 см. У данного больного наблюдается поражение трех суставов межфаланговых,голеностопных и коленных суставов. У данного больного выявлен генотип АА гена АТ 2 Р, при котором возможен высокий риск развития комбинированных или сочетанных пороков сердца. Наблюдается динамика прогрессирования порока за 5-летний период. Диагноз Хроническая ревматическая болезнь сердца. Комбинированный митральный,аортальный, трикуспидальный порок сердца. Сочетанный митральный порок сердца с преобладанием стеноза. Недостаточность трикуспидального клапана,недостаточность аортального клапана. Осл нарушение ритма по типу мерцательной аритмии постоянная форма. СНФКПример 2. Больная К., 41 лет. Диагноз ХРБС. Недостаточность митрального клапана. Осл СНФК. Из анамнеза стаж заболевания 28 лет. Диагноз впервые был установлен в 1982 году. Перенесенные заболевания - частый хронический тонзилит. Наследственность неотягощена. Объективно при аускультациитон усилен на верхушке,ослаблен,диастолический шум выслушивается на верхушке сердца. При трехкратном измерении АД 110/70 мм.рт.ст., ЧСС 78 в минуту. Клинический вариант течения заболевания проявлялся следующими признаками хронической сердечной недостаточности (ХСН) с 1994 года - одышкой, сердцебиением, отеками, боли в суставах,утомляемостью,ограничением физической нагрузки. Также определяли индекссумма баллов - 26. Также у больного определяли 6-минутный тест на толерантность к физической нагрузке, который составил - 425 м., а также шкалу оценки клинического состояния больных с ХСН (в модификации В.Ю.Мареева,2000) сумма баллов которого равна 4. На электрограмме (ЭКГ) транзиторная полная блокада правой ножки пучка Гиса, полная блокада левой ножки пучка Гиса, частота сердечных сокращений 85 в минуту. Показатели эхокардиографии (ЭхоКГ) конечно-систолический размер левого желудочка(КСР) - 3,5 см, конечно-диастолический размер левого желудочка (КДР) - 5,0 см, конечносистолический объем левого желудочка (КСО) - 50,0 мл,конечно-диастолический объем левого желудочка (КДО) - 115,0 мл, ударный объем (УО) 65,0 мл, минутный объем (МО) - 5,5 мл/мин,фракция выброса (ФВ) -50, дельта- 29,диаметр левого предсердия (Длп) - 4,4 см, диаметр правого желудочка (Дпж) - 2,3 см, диаметр аорты(Да) 2,7 см,толщина межжелудочковой перегородки (Тмжп) - 0,6-0,9 см, толщина задней стенки левого желудочка (Тзслж) - 0,6-1,0 см. У данного больного наблюдается поражение одного крупного сустава коленного сустава. При определении полиморфного варианта гена ангиотензинпревращающего фермента был выявлен генотип , который указывает на высокий риск развития сочетанного порока сердца. Наблюдается динамика прогрессирования порока за 5-летний период. 22780 Диагноз Хроническая ревматическая болезнь сердца. Сочетанный митральный порок сердца с преобладанием стеноза. Осл СНФК. Пример 3 Больная Д., 43 года. Диагноз Хроническая ревматическая болезнь сердца. Недостаточность митрального клапана. Осл СНФК. Из анамнеза стаж заболевания 7 лет. Впервые диагноз был установлен в 1998 году. Наследственность неотягощена. Перенесенные заболевания - хронический тонзилит. Объективно при аускультациитон ясный, 2 тон ясный, усилен, систолический шум на верхушке сердца. При трехкратном измерении АД 110/60 мм.рт.ст., ЧСС 75 в минуту. Клинический вариант течения заболевания проявлялся следующими признаками хронической сердечной недостаточности (ХСН) - одышкой, сердцебиением,отеками, боли в суставах, утомляемостью. Также определяли индекссумма баллов - 21,4. Также у больного определяли 6-минутный тест на толерантность к физической нагрузке, который составил - 468 м., а также шкалу оценки клинического состояния больных с ХСН (в модификации В.Ю.Мареева, 2000) сумма баллов которого равна 4. На электрограмме (ЭКГ) ритм правильный,синусовый,частота сердечных сокращений 85 в минуту, ЭОС промежуточное,признаки гипертрофии левого желудочка. Показатели эхокардиографии (ЭхоКГ) конечносистолический размер левого желудочка (КСР) 2,5 см, конечно-диастолический размер левого желудочка (КДР) - 3,6 см, конечно-систолический объем левого желудочка (КСО) - 21,5 мл, конечнодиастолический объем левого желудочка (КДО) 53,9 мл, ударный объем (УО) - 32,4 мл, минутный(Длп) - 2,3 см, диаметр правого желудочка (Дпж) 1,3 см, диаметр аорты (Да) - 2,4 см, толщина межжелудочковой перегородки (Тмжп) - 0,9-1,2 см,толщина задней стенки левого желудочка (Тзслж) 0,9-1,1 см. У данного больного наблюдается поражение одного сустава коленного сустава. При определении полиморфного варианта гена ангиотензинпревращающего фермента был выявленгенотип гена АТ 2 Р, по истечении 5 лет наблюдения у больного не наблюдается прогрессирование порока сердца. Таким образом, заявляемый способ позволяет определять индивидуальную предрасположенность к риску развития комбинированных или сочетанных пороков у больных хронической ревматической болезнью сердца казахской национальности, найти генетические причины, изучать молекулярные механизмы патологии, обосновать генетические варианты болезни и тем самым улучшить лечение,направленное на предупреждение и снижение данных осложнений. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ ранней диагностики развития комбинированных и сочетанных пороков сердца у больных с хронической ревматической болезнью сердца, включающий забор крови и проведение генетического анализа, отличающийся тем, что берут кровь больного казахской национальности,определяют полиморфизм гена АТ 2 Р и при выявлении генотипа АА илириск развития комбинированных или сочетанных пороков сердца считается высоким, а при выявлении генотипариск считают низким.