Способ ранней диагностики развития осложнений при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки у больных казахской национальности

(51) 01 33/48 (2009.01) 01 33/49 (2009.01) 01 33/50 (2009.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ ранней диагностики развития осложнений у больных язвенной болезнью казахской национальности. Техническим результатом изобретения является повышение точности диагностики на ранних этапах. Это достигается тем, что в заявляемом способе ранней диагностики развития осложнений при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки путем исследования крови, согласно изобретению, исследуют кровь больных язвенной болезнью казахской национальности, проводят генетический анализ, определяют полиморфизм гена 1-адренорецептора и при выявлениигенотипа гена 1-адренорецептора риск развития осложнений считают высоким, а при выявлении СС генотипа гена 1-адренорецептора риск считают низким.(72) Шалхарова Жанат Ныгметовна Шалхарова Жанар Сайлаубековна Садыкова Карлыгаш Жарылкасыновна(54) СПОСОБ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ РАЗВИТИЯ ОСЛОЖНЕНИЙ ПРИ ЯЗВЕННОЙ БОЛЕЗНИ ЖЕЛУДКА И ДВЕНАДЦАТИПЕРСТНОЙ КИШКИ У БОЛЬНЫХ КАЗАХСКОЙ НАЦИОНАЛЬНОСТИ(57) Изобретение относится к области медицины, в частности к терапии и может быть использовано для 22682 Изобретение относится к области медицины, в частности к терапии и может быть использовано для ранней диагностики развития осложнений у больных язвенной болезнью казахской национальности. Известен способ прогнозирования течения язвенной болезни путем исследования крови, в которой во время обострения язвенной болезни определяют содержание водных фракций в биомакромолекулах форменных элементов крови и при значении коэффициента гидратации,отражающего отношение связанной фракции к свободной, равном 0,36 и ниже, судят о тяжелом течении язвенной болезни при значении в пределах 0,37-0,43 - о течении средней тяжести при значении 0,44-0,50 - о легком течении заболевания.(Патент РФ 2312584, кл. 01 33/48, опубл. 20.12.2005, Бюл.35) Недостатком данного способа является сложность и низкая информативность, т.к. не учитываются особенности клинических проявлений и течения заболевания среди различных этнических популяций. Известен также способ диагностики развития осложнений при язвенной болезни, включающий исследование периферической крови и определение в сыворотке уровня интерлейкина - 1 по стандартной методике и при значении этого показателя в спонтанном тесте 2,30,67 усл. ед.,стимулированном - 2,930,58 усл. ед.,прогнозируют благоприятное течение болезни, а при значении показателя в спонтанном тесте 0,340,14 усл. ед., стимулированном - 1,330,2 усл. ед. неблагоприятное течение с развитием осложнений.(Патент РФ 2006040, кл. 01 33/68, опубл. 15.01.1994) Недостатком данного способа является то, что определение в сыворотке уровня интерлейкина - 1 не позволяет прогнозировать развитие осложнений с большой степенью точности, кроме того, этот способ не позволяет оценить вклад индивидуальной генетической предрасположенности. Задачей изобретения является создание эффективного способа ранней диагностики развития осложнений при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки у больных казахской национальности, позволяющего повысить точность прогнозирования,имеющего этническую специфичность и возможность использования не только для доклинического прогнозирования развития осложнений, но и разработки методов их патогенетической терапии у данной национальности. Техническим результатом изобретения является повышение точности диагностики на ранних этапах. Это достигается тем, что в заявляемом способе ранней диагностики развития осложнений при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки путем исследования крови, согласно изобретению, исследуют кровь больных язвенной болезнью казахской национальности, проводят генетический анализ, определяют полиморфизм гена 1-адренорецептора и при выявлениигенотипа 2 гена 1-адренорецептора риск развития осложнений считают высоким, а при выявлении СС генотипа гена 1-адренорецептора риск считают низким. Способ осуществляется следующим образом. У больного язвенной болезнью казахской национальности производят забор венозной крови и локтевой вены объемом 1 мл в одноразовые пластиковые пробирки с ЭДТА объемом 0,5 мл. Выделение ДНК из цельной крови осуществляют набором реагентов(производство ООО Лаборатория ИзоГен). Супернатант с ДНК затем используют для генотипирования методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием набора реагентов для ПЦР амплификации ДНК(производство ООО Лаборатория ИзоГен). Для определения генотипов гена 1-адренорецептора используют пары специфических олигонуклеотидных праймеров 5-3 и 5-3. Используют готовые для амплификации пробирки, которые содержат в лиофилизированном сухом состоянии ингибированную для горячего стартаДНК полимеразу 1 , дезоксинуклеозодтрифосфаты 200 мкМ и хлорид магния 2,5 мМ, а также оптимизированную буферную систему для проведения стандартной ПЦР амплификации. В пробиркидобавляют по 5 мкл смеси праймеров с конечной концентрацией 0,5 мкМ, 10 мкл ПЦР растворителя и по 5 мкл исследуемой ДНК. Для проведения ПЦР амплификации используютПЦР систему 9700). Программа амплификации имеет стандартную схему проведения, температура отжига составляет 55 С дляполиморфизма гена 1 -адренорецептора. После проведения ПЦР-амплификации продукты реакции подвергают рестрикционному расщеплению рестриктазойв течение двух с половиной часов при температуре инкубации 37 С. Продукты рестрикционного анализа фракционируют в 6-ном полиакриламидном геле в течение 90 мин. при напряжении 250 В, окрашивают бромистым этидием и визуализируют в ультрафиолетовом свете. Для определения размера фрагментов ДНК используют маркер с начальной отметкой 50 п.н. При разделении продуктов рестрикции на одиночный продукт 530 р определяют генотип ,при разделении на продукты 530 р 342 р 154 р определяют генотип , при разделении на продукт 342 р 154 р определяли генотип СС. После получения результатов производят оценку риска развития осложнений при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки. При наличиигенотипа гена 1 адренорецептора риск развития осложнений считается высоким, а при выявлении СС генотипа гена 1-адренорецептора риск считают низким. Пример 1. Больной К., 48 лет. Диагноз Язвенная болезнь с локализацией язвы больших размеров (1,01,0 см) в 22682 луковице двенадцатиперстной кишки в стадии обострения, рецидивирующее течение. Поступил с жалобами на периодические боли в эпигастрии,возникающие ночью и через 1,5-2 часа после еды, на тошноту, возникающую после приема пищи. Язвенный анамнез 2 года. Наследственность отягощена. Больной находится на диспансерном учете, обострения наблюдались до 2-х раз в год, но лечение принимал нерегулярно, диету практически не соблюдал. В последние полгода время приступы боли участились (1-2 раза в неделю), они появлялись после приема алкоголя, острой пищи,физических нагрузок,стрессовых ситуаций,увеличилась интенсивность боли, периодически принимал омез (с положительным эффектом), в течение последнего месяца приступы боли возникали ежедневно. ФГДС показала наличие язвы на передней стенке луковицы двенадцатиперстной кишки размером 1,01,0 см, деформацию луковицы и признаки гастрита. После проведения генетического исследования выявленгенотип гена 1-адренорецептора, что является показателем высокого риска развития осложнений. Назначили лечение на снижение риска, при этом через 6 месяцев проявилось осложнение в виде желудочно-кишечного кровотечения. Больной поступил в очередной раз с диагнозом Язвенная болезнь с локализацией язвы больших размеров(1,01,0 см) в луковице двенадцатиперстной кишки в стадии обострения, рецидивирующее течение. Желудочно-кишечное кровотечение. Постгеморрагическая анемия . Жалобы на интенсивные боли в эпигастрии, рвоту по типу кофейной гущи, выраженную слабость, черный дегтеобразный стул. Объективно Общее состояние средней тяжести,вялость,головокружение. Бледность и влажность кожных покровов. Пульс 96 в минуту. Артериальное давление 100/60 мм рт. ст.( степень кровотечения по В. И. Стручкову,Э. В. Луцевичу). Тоны сердца приглушены, ритм правильный. Частота дыхания 22 в минуту. Живот немного вздут, симметричный, участвует в акте дыхания. При поверхностной ориентировочной пальпации живот мягкий, умеренно болезненный. Симптом Щеткина-Блюмберга отрицательный. ФГДС Пищевод свободно проходим. Слизистая бледно-розовая. Кардий смыкается. В желудке слизь с примесью кофейной гущи. Слизистая гиперемирована, складки возвышены. Привратник проходим. Заключение Желудочно-кишечное кровотечение. Общий анализ крови Н-90 г/л,Эритроциты - 2,91012/л, ЦП- 0,92, Лейкоциты 7,7109/л, п/я -3, с/я - 81 , Эозинофилы - 2,Лимфоциты - 7, Моноциты - 5, Тромбоциты 189109/л, СОЭ - 34 мм/ч. ЭКГ. Заключение ритм синусовый, правильный, положение электрической оси сердца нормальное, признаков нарушения ритма, проводимости, ишемических явлений не выявлено. Больному произведена консервативная гемостатическая терапия и коррекция гиповолемических нарушений. Определение вегетативного статуса индекс Кердо ( 6,25), определение исходного вегетативного тонуса по шкале Вейна и глазосердечный рефлекс ДаньиниАшнера указывают на преобладание симпатического тонуса,клиноортостатическая проба выявила нарушение вегетативного обеспечения. Повышенный симпатический тонус у данного больного также свидетельствует о склонности к более тяжелому и осложненному течению язвенной болезни. Пример 2. Больная Е., 34 года. Диагноз Язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки в фазе обострения, редко рецидивирующее течение, язва луковицы средних размеров (0,61,0 см). Жалобы на боли в эпигастрии, возникающие через 60-90 мин. после еды, голодные и ночные боли, снижение аппетита. Из анамнеза болеет в течение 3-х лет. Наследственность отягощена, у отца язвенная болезнь, у сестры гастрит. Принимала стационарное лечение с относительным улучшением,в дальнейшем соблюдала диету и рекомендации врачей, боли практически не беспокоили,обострения наблюдались не более 1 раза в год,протекали без осложнений. Последнее обострение связывает с нервным перенапряжением и погрешностями в диете. ФГДС Пищевод свободно проходим. Слизистая бледно-розовая. Кардий смыкается. В желудке слизь. Слизистая желудка бледно-розовая, складки средние. Привратник проходим. Луковица двенадцатиперстной кишки округлая, на передней стенке язва размером 0,61,0 см. Дно язвы поверхностное, покрыто белым налетом. Слизистая двенадцатиперстной кишки эррозирована. Заключение Язва луковицы двенадцатиперстной кишки. Эрозивный бульбит. Другие общеклинические методы обследования патологии не выявили. После проведения генетического исследования выявлен СС генотип гена 1-адренорецептора, что указывает на малую вероятность риска развития осложнений. Определение вегетативного статуса индекс Кердо(4,17),определение исходного вегетативного тонуса по шкале Вейна и глазосердечный рефлекс Даньини-Ашнера указывают на преобладание парасимпатического тонуса, клиноортостатическая проба выявила нарушение вегетативного обеспечения. Принимала лечение по поводу основного заболевания. Состояние улучшилось. Через 2 недели обследование показало, что состояние улучшилось. Данные ФГДС Желудок средних размеров,содержит слизь, с жидкостью, складки ровные,привратник проходим. Луковица двенадцатиперстной кишки деформирована, на передней стенке имеется налет белого цвета. Заключение деформация луковицы двенадцатиперстной кишки, формирующийся рубец луковицы. У данной больной течение язвенной болезни относительно благоприятное, язвенный дефект легко и быстро подвергается лечению. Прогноз дальнейшего течения и исхода болезни в отношении выздоровления,жизни и трудоспособности благоприятный. 3 22682 Таким образом, заявляемый способ позволяет прогнозировать течение язвенной болезни при небольшой длительности заболевания,бессимптомном ее течении и, что особенно важно,при впервые выявленной язвенной болезни. Это позволяет использовать его для прогнозирования развития осложнений, индивидуализации выбора средств и сроков лечения, а также для оценки эффективности проводимой терапии с учетом этнической принадлежности. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ ранней диагностики развития осложнений при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки путем исследования крови, отличающийся тем, что исследуют кровь больных язвенной болезнью казахской национальности, проводят генетический анализ,определяют полиморфизм гена 1 адренорецептора и при выявлениигенотипа гена 1 адренорецептора риск развития осложнений считают высоким, а при выявлении СС генотипа гена 1 - адренорецептора риск считают низким.