Способ ранней диагностики высокого сердечно – сосудистого риска у больных сахарным диабетом 2 типа казахской национальности

(51) 12 1/68 (2009.01) 01 33/48 (2009.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ сосудистых осложнений у больных сахарным диабетом 2 типа казахской национальности. Техническим результатом изобретения является повышение надежности и точности ранней диагностики. Это достигается тем, что в заявляемом способе ранней диагностики высокого сердечно сосудистого риска у больных сахарным диабетом 2 типа путем забора крови и проведения генетического анализа, согласно изобретения берут кровь больного сахарным диабетом 2 типа казахской национальности, определяют полиморфизм гена 3 адренорецептора и при выявлении генотипа / или / риск развития сердечно - сосудистого заболевания считается высоким, а при выявлении генотипа /Тр риск считают низким.(72) Шалхаров Сайлаубек Шалхарович Шалхарова Жанар Сайлаубековна Аскарова Салтанат Сейлбековна(54) СПОСОБ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ ВЫСОКОГО СЕРДЕЧНО - СОСУДИСТОГО РИСКА У БОЛЬНЫХ САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ 2 ТИПА КАЗАХСКОЙ НАЦИОНАЛЬНОСТИ(57) Изобретение относится к области медицины, в частности к терапии и может быть использовано для раннего определения индивидуальной предрасположенности к развитию сердечно 22665 Изобретение относится к области медицины, в частности к терапии и может быть использовано для раннего определения индивидуальной предрасположенности к развитию сердечно сосудистых осложнений у больных сахарным диабетом 2 типа казахской национальности. Оценка уровня риска осложнений исторически проводится на основании суммирования имеющихся известных факторов риска. При этом количество учитываемых факторов риска постоянно растет. Шкала риска Фрамингэм и шкалаоснованы на расчете 10-летнего риска фатальных сердечно сосудистых событий, с включением таких факторов риска как значения индекса массы тела, окружности талии, показатели артериального давления, уровень общего холестерина, глюкозы в крови натощак,наличие отягощенного наследственного анамнеза, в первую очередь перенесенных инсультов,инфарктов миокарда и сердечно - сосудистой смерти у ближайших родственников. На основании подсчета числа имеющихся факторов риска у каждого больного производится оценка суммарного риска по таблицам.(Сравнение двух различных методов оценки сердечно - сосудистого риска шкала риска Фрамингэм и шкала ./. // . . . 2007. - 26,2. - с 94 - 97) Точность определения риска развития сердечно сосудистых осложнений этими способами в настоящее время не превышает 50. Кроме того,эти способы оценки риска не позволяют оценить вклад индивидуальной генетической предрасположенности. Известен также способ определения риска развития сердечно - сосудистых осложнений у больных путем забора крови и определения генотипа ангиотензинпревращающего фермента(АПФ). В случае сочетания концентрической гипертрофии левого желудочка и генотипадиагностируют высокий риск развития сердечно сосудистых осложнений.(Патент РФ 2334466, кл. 12 1/68, опубл. 27.09.08, Бюл.27) Недостатком данного способа является то, что результаты, полученные в одной выборке обследуемых, не всегда могут быть воспроизведены в другой популяции, в частности, в казахской, т.к. большое влияние оказывают экологические факторы и образ жизни. Задачей изобретения является создание способа ранней диагностики высокого сердечно сосудистого риска у больных сахарным диабетом 2 типа казахской национальности, позволяющего повысить надежность и точность оценки сердечно сосудистого риска, обусловленного генетическими факторами, что приведет к уменьшению числа фатальных осложнений и снижению инвалидизации и смертности пациентов. Техническим результатом изобретения является повышение надежности и точности ранней диагностики. Это достигается тем, что в заявляемом способе ранней диагностики высокого сердечно сосудистого риска у больных сахарным диабетом 2 типа путем забора крови и проведения генетического анализа, согласно изобретения берут кровь больного сахарным диабетом 2 типа казахской национальности,определяют полиморфизм гена 3-адренорецептора и при выявлении генотипа / или / риск развития сердечно - сосудистого заболевания считается высоким, а при выявлении генотипа Тр/Тр риск считают низким. Способ осуществляется следующим образом. У больного сахарным диабетом 2 типа казахской национальности производят забор венозной крови и локтевой вены объемом 1 мл в одноразовые пластиковые пробирки с ЭДТА объемом 0,5 мл. Выделение ДНК из цельной крови осуществляют набором реагентов(производство ООО Лаборатория ИзоГен). Супернатант с ДНК затем используют для генотипирования методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием набора реагентов для ПЦР амплификации ДНК(производство ООО Лаборатория ИзоГен). Для определения 64 полиморфизма гена 3 адренорецептора используют пары специфических олигонуклеотидных праймеров 5-3 и 5-3. Используют готовые для амплификации пробирки,которые содержат в лиофилизированном сухом состоянии ингибированную для горячего стартаДНК полимеразу 1 , дезоксинуклеозодтрифосфаты 200 мкМ и хлорид магния 2,5 мМ, а также оптимизированную буферную системы для проведения стандартной ПЦР амплификации. В пробиркидобавляют по 5 мкл смеси праймеров с конечной концентрацией 0,5 мкМ, 10 мкл ПЦР растворителя и по 5 мкл исследуемой ДНК. Для проведения ПЦР амплификации используютПЦР система 9700 (). Программа амплификации имеет стандартную схему проведения, температура отжига составляет 55 С для 64 полиморфизма гена 3-адренорецептора. После проведения ПЦРамплификации продукты реакции подвергают рестрикционному расщеплению рестриктазой 2 в течение двух с половиной часов при температуре инкубации 60 С. Продукты рестрикционного анализа фракционируют в 6-ном полиакриламидном геле в течение 90 мин при напряжении 250 В, окрашивают бромистым этидием и визуализируют в ультрафиолетовом свете. Для определения размера фрагментов ДНК используют маркер с начальной отметкой 50 п.н. При разделении продуктов рекстрикции на продукты 6299 определяют генотип Тгр/Тгр, при разделении на продукты 62 р 99 р 161 р 22665 определяют генотип /, при разделении на продукт 161 р определяют генотип /. После получения результатов производят оценку сердечно - сосудистого риска. Если у больного сахарным диабетом 2 типа казахской национальности выявлен генотип / или /, риск развития сердечно - сосудистого заболевания считают высоким. При выявлении у больного сахарным диабетом 2 типа казахской национальности генотипа Тр/Тр сердечно - сосудистый риск считают низким. Пример 1. Больной Т., 43 года. Диагноз Сахарный диабет 2 типа, средней степени тяжести, в стадии декомпенсации. Из анамнеза страдает сахарным диабетом 2 типа в течение 6 лет, с гипергликемическим и глюкозурическим синдромом, наследственность отогощена, рост 177 см, вес 93 кг, ИМТ 30 кг/см 2, ОТ 105 см, ОБ 113 см , артериальное давление 170/100 мм рт ст,глюкоза в крови натощак 13 ммоль/л, общий холестерин 5,3 моль/л, холестерин липопротеидов высокой плотности 1,00 ммоль/л, холестерин липопротеидов низкой плотности 3,5 ммоль/л,триглицериды 1,76 моль/л. При определении полиморфного варианта гена 3-адренорецептора выявлен Тр/Тр генотип гена 3-адренорецептора, что свидетельствует о наличии низкого сердечно-сосудистого риска у данного больного, что было подтверждено данными оценки по модификации на основании данных. 10-летний риск ишемической болезни сердца 15,1 (с учетом САД) и 13,7 (с учетом ДАД), инфаркта миокарда 10,1(с учетом САД) и 8,2 (с учетом ДАД), смерть ишемической болезни сердца 2,7 (с учетом САД) и 1,9 (с учетом ДАД), инсульта 3,5 (с учетом САД) и 2 (с учетом ДАД), сердечно-сосудистых заболеваний в целом 24,4 (с учетом САД) и 20 (с учетом ДАД), смертности от сердечно-сосудистых заболеваний 3,1 (с учетом САД) и 2,1 (с учетом ДАД). Пример 2. Больной Е., 45 лет. Диагноз Сахарный диабет 2 типа, средней степени тяжести, в стадии декомпенсации. Из анамнеза страдает сахарным диабетом 2 типа в течение 5 лет, с гипергликемическим и глюкозурическим синдромом, наследственность не отогощена, рост 170 см, вес 107 кг, ИМТ 37,02 кг/см 2, ОТ 108 см, ОБ 123 см, АД 170/110 мм рт ст, глюкоза в крови натощак 8.5 ммоль/л, общий холестерин 6.1 моль/л,холестерин липопротеидов высокой плотности 1,3 ммоль/л,холестерин липопротеидов низкой плотности 3,91 ммоль/л, триглицериды 1,96 моль/л. При определении полиморфного варианта гена 3-адренорецептора выявлен / генотип гена 3-адренорецептора, что свидетельствует о наличии высокого сердечно-сосудистого риска у данного больного, что было подтверждено данными оценки по модификации на основании данных. 10-летний риск ишемической болезни сердца 40.5 (с учетом САД)(с учетом САД) и 24,1 (с учетом ДАД),смертности от ишемической болезни сердца 8,4 (с учетом САД) и 6,7 (с учетом ДАД), инсульта 10,9 (с учетом САД) и 7,1 (с учетом ДАД),сердечно-сосудистых заболеваний в целом 51,2 (с учетом САД) и 47,9 (с учетом ДАД), смертности от сердечно-сосудистых заболеваний 13,4 (с учетом САД) и 10,8 (с учетом ДАД). Пример 3. Больная М., 60 лет. Диагноз Сахарный диабет 2 типа, средней степени тяжести, в стадии декомпенсации. Из анамнеза страдает сахарным диабетом 2 типа в течение 10 лет, с гипергликемическим и глюкозурическим синдромом, наследственность отогощена, рост 160 см, вес 77 кг, ИМТ 30 кг/см 2, ОТ 100 см, ОБ 115 см ,артериальное давление 160/80 мм рт ст, глюкоза в крови натощак 13,5 ммоль/л, общий холестерин 6,4 моль/л,холестерин липопротеидов высокой плотности 1,00 ммоль/л, холестерин липопротеидов низкой плотности 4,1 ммоль/л, триглицериды 0,9 моль/л. При определении полиморфного варианта гена 3-адренорецептора выявлен / генотип гена 3-адренорецептора, что свидетельствует о наличии высокого сердечно-сосудистого риска у данной больной, что было подтверждено данными оценки по модификации на основании данных. 10-летний риск ишемической болезни сердца 48,1 (с учетом САД) и 52,8 (с учетом ДАД), инфаркта миокарда 17,3(с учетом САД) и 16,7(с учетом ДАД),смертности от ишемической болезни сердца 15,5(с учетом САД) и 15,4 (с учетом ДАД), инсульта 14,9 (с учетом САД) и 12,8 (с учетом ДАД),сердечно-сосудистых заболеваний в целом 54,9 (с учетом САД) и 54,9 (с учетом ДАД), смертности от сердечно-сосудистых заболеваний 23,9 (с учетом САД) и 23,3 (с учетом ДАД). Таким образом, заявляемый способ существенно повышает точность определения до клинических проявлений высокого риска развития сердечно сосудистых осложнений у больных сахарным диабетом 2 типа казахской национальности, что позволит назначить больным с высоким риском более агрессивную терапию, направленную на снижение этого риска. Это приведет к снижению числа фатальных осложнений, что имеет не только медицинский, но и социально - экономический эффект. Больным с низким уровнем риска может быть отменена или уменьшена неоправданная терапия, что приведет к уменьшению затрат на лечение и снижению риска побочных эффектов терапии. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ ранней диагностики высокого сердечнососудистого риска у больных сахарным диабетом 2 типа путем забора крови и проведения генетического анализа, отличающийся тем, что берут кровь у больного сахарным диабетом 2 типа казахской национальности,определяют 3 22665 полиморфизм гена 3-адренорецептора и при выявлении генотипа / или / риск развития сердечно-сосудистого заболевания считают высоким, а при выявлении генотипа Тр/ Тр риск считают низким.