Способ диагностики гиперинсулинемии у больных с метаболическими нарушениями

(51) 01 33/48 (2009.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Способ диагностики гиперинсулинемии у пациентов с метаболическими нарушениями включает проведение исследование крови, из крови делают мазки, которые окрашивают на выявление гранул щелочной и кислой фосфатазы, и с помощью компьютерной морфоденситометрии проводят определение морфоденситометрических показателей среднего периметра, средней площади,средней оптической плотности,средней интегральной оптической плотности гранул щелочной и кислой фосфатазы, при определении роста вышеуказанных параметров у больных ишемической болезнью сердца и у больных ишемической болезнью сердца с метаболическими нарушениями по сравнению со значениями таких же параметров условно здоровых лиц диагностируют наличие инсулинорезистентности. Способ экономически выгоден, не травматичен,снижает время диагностики, информативен и доступен.(72) Додонова Елена Александровна Нурашева Бибигуль Тулегеновна Енин Евгений Альбертович Полимбетов Дулат Сейтжанович(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГИПЕРИНСУЛИНЕМИИ У БОЛЬНЫХ С МЕТАБОЛИЧЕСКИМИ НАРУШЕНИЯМИ(57) Изобретение относится к медицине, а именно к терапии и предназначено для диагностики гиперинсулинемии у пациентов с метаболическими нарушениями, а также находящихся в группе риска по развитию метаболического синдрома и сахарного диабета. 22683 Изобретение относится к медицине, а именно к терапии и предназначено для диагностики гиперинсулинемии у пациентов с метаболическими нарушениями, а также находящихся в группе риска по развитию метаболического синдрома и сахарного диабета. Важность раннего выявления гиперинсулинемии у пациентов с метаболическими нарушениями обусловлена ее ролью в развитии целого ряда заболеваний, таких как атеросклероз, артериальная гипертензия, воспалительные заболевания и так далее, при этом в основе развития метаболических нарушений лежит резистентность тканей к инсулину. Гиперинсулинемия особенно опасна тем,что, первично изменяя обмен веществ или подключаясь к уже имеющимся метаболическим нарушениям,запускает саморазгоняющиеся механизмы повреждения организма. При ожирении гиперинсулинемия ведет к дальнейшему набору избытка жировой ткани и препятствует мероприятиям по снижению веса. Известен способ диагностики гиперинсулинемии у пациентов с метаболическими нарушениями,включающий внутривенное введение глюкозы с последующим введением толбутамида, проведение количественной оценки инсулинрезистентности по величине клиренса глюкозы, отнесенной к степени гиперинсулинемии, вызванной введением глюкозы.(Долгов В.В., Селиванова А.В., Ройтман А.П. и др. Лабораторная диагностика нарушений обмена углеводов. Метаболический синдром, сахарный диабет // М. - Тверь ООО Издательство Триада,2006. - 128 с. - С. 28 - 30 Е.,.,.// .. - 1997. - . 100. - . 1166 - 1173). Однако,известный способ является недостаточно точным, поэтому он не может быть использован широко в клинической практике. Известен способ диагностики гиперинсулинемии у больных с метаболическими нарушениями,включающий определение уровня инсулина в крови путем иммуноферментного анализа. Сущность иммуноферментного анализа заключается в специфическом взаимодействии антитела и антигена с последующим присоединением к полученному комплексу коньюгата(антивидового иммуноглобулина, меченого ферментом). Фермент вызывает разложение хромогенного субстрата с образованием окрашенного продукта, который выявляется либо визуально, либо фотометрически(3) .232). Известный способ является наиболее часто используемым иммунологическим методом. Однако,выполнение определения является достаточно длительным по времени, его характеризует высокая себестоимость, а также необходимость в специально обученном персонале и оборудовании. 2 Задачей изобретения является разработка способа диагностики гиперинсулинемии у больных с метаболическими нарушениями, использование которого ускоряет диагностику, повышает степень ранней выявляемости метаболических нарушений. Способ диагностики гиперинсулинемии у пациентов с метаболическими нарушениями включает проведение исследование крови, из крови делают мазки, которые окрашивают на выявление гранул щелочной и кислой фосфатазы, и с помощью компьютерной морфоденситометрии проводят определение морфоденситометрических показателей среднего периметра, средней площади,средней оптической плотности,средней интегральной оптической плотности гранул щелочной и кислой фосфатазы, при определении роста вышеуказанных параметров у больных ишемической болезнью сердца и у больных ишемической болезнью сердца с метаболическими нарушениями по сравнению со значениями таких же параметров условно здоровых лиц диагностируют наличие инсулинорезистентности. Способ диагностики гиперинсулинемии у больных с метаболическими нарушениями,включающий проведение исследование крови,отличающийся тем, что из крови делают мазки,которые окрашивают на выявление гранул щелочной и кислой фосфатазы, и с помощью компьютерной морфоденситометрии проводят определение морфоденситометрических показателей значения среднего периметра гранул,средней площади гранул, средней оптической плотности гранул,средней интегральной оптической плотности гранул. Способ по п. 1, отличающийся тем, что при определении у больных ишемической болезнью сердца повышение параметров значения среднего периметра гранул, средней площади гранул, средней оптической плотности гранул,средней интегральной оптической плотности гранул щелочной фосфатазы соответственно на 14 , на 24, на 17, на 41, а также повышение параметров определения среднего периметра гранул, средней площади гранул, средней оптической плотности гранул,средней интегральной оптической плотности гранул кислой фосфатазы соответственно на 31 , на 52, на 3,на 69, по сравнению с такими же значениями условно здоровых лиц диагностируют гиперинсулинемию. Способ по п. 1, отличается тем, что при определении у больных с ишемической болезнью сердца и метаболическими нарушениями повышение параметров значения среднего периметра гранул, средней площади гранул, средней оптической плотности гранул,средней интегральной оптической плотности гранул щелочной фосфатазы соответственно на 49, на 97, на 52, на 207, а также повышение параметров определения среднего периметра гранул, средней площади гранул, средней оптической плотности гранул,средней интегральной оптической плотности гранул кислой 22683 фосфатазы соответственно на 62, на 130, на 67,на 295, по сравнению с такими же значениями этих параметров условно здоровых лиц диагностируют гиперинсулинемию. Способ осуществляют следующим образом. У пациентов выявляют метаболические нарушения путем определения индекса массы тела, измеряя объемы талии (ОТ) и бедер (ОБ), определяя отношения ОТ/ОБ. Определяют уровня глюкозы в крови. Затем у пациента берут периферическую кровь, центрифугируют на центрифуге(Голландия) при 2000 обмин в течение 15-20 минут. Делают мазки осадка. Окраску мазков крови для выявления активности кислой фосфатазы проводят по методу Каплоу в модификации Р.П. Нарциссова,окраску для выявления активности щелочной фосфатазы по методу Каплоу в модификации Хейхоу и Кваглино. Исследуют активность кислой фосфатазы, щелочной фосфатазы в окрашенных мазках крови в лейкоцитах, а именно в нейтрофильных гранулоцитах. В местах локализации кислой фосфатазы в цитоплазме нейтрофилов определяют красные гранулы, в местах локализации щелочной фосфатазы в цитоплазме нейтрофилов определяют коричневые гранулы. Проводят определение морфоденситометрических параметров гранул щелочной и кислой фосфатазы при помощи компьютерной морфоденситометрии, таких как средний периметр гранул, среднюю площадь гранул, среднюю оптическую плотность гранул,среднюю интегральную оптическую плотность гранул. Ферментативная активность нейтрофилов исследуют при помощи программного продукта ВидеоТесТ для анализатора изображений в медицине и биологии ВидеоТесТ (фирма ВидеоТесТ, Санкт- Петербург) с вычислением морфометрических и денситометрических параметров гранул щелочной и кислой фосфатазы. При определении у больных ишемической болезнью сердца повышения параметров среднего периметра, средней площади, средней оптической плотности, средней интегральной оптической плотности гранул щелочной фосфатазы соответственно на 14 , на 24, на 17, на 41, а также повышение значения среднего периметра,средней площади, средней оптической плотности,средней интегральной оптической плотности гранул кислой фосфатазы соответственно на 31 , на 52,на 3, на 69, по сравнению со значениями этих параметров условно здоровых лиц диагностируют гиперинсулинемию. При определении у больных ишемической болезнью сердца и метаболическими нарушениями повышения значения среднего периметра, средней площади, средней оптической плотности, средней интегральной оптической плотности гранул щелочной фосфатазы соответственно на 49, на 97, на 52, на 207, а также повышение параметров определения среднего периметра,средней площади, средней оптической плотности,средней интегральной оптической плотности гранул кислой фосфатазы соответственно на 62, на 130, на 67, на 295, по сравнению с такими же значениями этих параметров условно здоровых лиц диагностируют гиперинсулинемию. Клинические примеры выполнения способа. Пример 1. Больной П., 60 лет, механик,госпитализирован 01.04.08 в 3 кардиологическое отделение Городского кардиологического центра. Диагноз основной ишемическая болезнь сердца,прогрессирующая стенокардия, НКА. Диагноз сопутствующий артериальная гипертония (АГ)степени, риск 3, язвенная болезнь желудка,ремиссия. Жалобы при поступлении боли в области сердца, повышение артериального давления,головную боль, слабость. АГ и приступы стенокардии беспокоят в течение 5 последних лет. Объективно правильного телосложения,нормального питания. Кожные покровы чистые,теплые на ощупь. Подкожная жировая клетчатка развита равномерно. Рост - 160 см, вес - 60 кг, ОТ 83 см, ОБ - 99 см, ОТ/ОБ - 0,84, ИМТ - 23, 44 кг/м 2. Отеков нет. Частота дыхательных движений - 16 в минуту. Аускультативно дыхание везикулярное,хрипов нет. Границы относительной сердечной тупости не расширены. Тоны сердца приглушены,ритм правильный. ЧСС -55 в минуту, пульс - 55 в минуту. АД на момент осмотра - 170/105 мм рт. ст Живот при пальпации мягкий, безболезненный. Печень - по краю реберной дуги. Лабораторные показатели Общий анализ крови Эр. - 4,8 х 10 12, г/л , Н 149 г/л,- 7,7 х 10 9 г/л , СОЭ - 3 мм/ч. ТГ - 1,88 ммоль/л, ХС - 5,9 ммоль/л, глюкоза 5,6 ммоль/л, инсулин - 10,8 мкЕд/мл, индекс НОМА-- 2,7 единиц. ЭКГ Ритм - синусовая брадикардия, ЧСС - 50 в минуту. Вертикальное положение электрической оси сердца. Синдром ранней реполяризации желудочков. ЭХО - КГ Аорта - не расширена. Полости сердца не расширены. Зон гипокинезии не выявлено. Сократительная функция ЛЖ и ФВ удовлетворительные ОА - 2,9 см, УО - 77 мл, ФВ 65 ,- 41 , МЖП -0,8 см, ТЗСЛЖ - 11 мм. Морфоденситометрические показатели активности щелочной фосфатазы крови в условных ед. средний периметр - 2,346 (увеличен на 14 по сравнению с контролем), средняя площадь - 0,989(увеличена на 24 по сравнению с контролем),средняя оптическая плотность - 0,156 (увеличена на 17 по сравнению с контролем), средняя интегральная оптическая плотность 15,765(увеличена на 41 по сравнению с контролем). Морфоденситометрические показатели активности кислой фосфатазы НГ крови в условных ед. средний периметр - 3,28 (увеличен на 31 по сравнению с контролем), средняя площадь - 0,77(увеличена на 52 по сравнению с контролем),средняя оптическая плотность - 0,153 (увеличена на 3 по сравнению с контролем), средняя интегральная оптическая плотность - 11,41 22683 пациента определена гиперинсулинемия. Назначена соответствующая терапия. Пример 2. Больной Ш., 52 лет не работает,госпитализирован в 3 кардиологическое отделение Городского кардиологического центра. Диагноз основной ишемическая болезнь сердца,прогрессирующая стенокардия, нарушение ритма по типу синусовой тахикардии,желудочковая экстрасистолия (28.11.07), НКА, ПИКС (2007). Диагноз сопутствующий АГстепени, риск 4,состояние после ОНМК (2005), дисциркуляторная энцефалопатия , ожирениестепени. Жалобы при поступлении на тяжесть за грудиной, боли в области сердца, одышку при незначительной физической нагрузке, частое повышение артериального давления, головную боль,приступы сердцебиения,слабость,быструю утомляемость. АГ в течение 15 лет, приступы стенокардии - 8 - 10 лет. В 2005 г. перенес ОНМК. Объективно правильного телосложения,повышенного питания. Кожные покровы чистые,теплые на ощупь. Подкожная жировая клетчатка развита чрезмерно. Рост - 170 см, вес - 130 кг, ОТ 132 см, ОБ - 129 см, ОТ/ОБ -1,02, ИМТ - 44, 98 кг/м 2. Отеки нижней трети голеней. Частота дыхательных движений 20 в минуту. Аускультативно дыхание везикулярное, хрипов нет. Границы относительной сердечной тупости расширены влево на 1,0 см. Тоны сердца приглушены, ритм правильный. ЧСС - 90 в минуту,пульс - 90 в минуту. АД на момент осмотра 210/120 мм рт. ст Живот при пальпации мягкий,безболезненный. Пальпация органов брюшной полости затруднена из-за абдоминального жира. Пульсация на периферических артериях не нарушена. Лабораторные показатели Общий анализ крови Эр. - 4,5 х 10 12, г/л , Н 139 г/л,- 7,2 х 10 9 г/л , СОЭ-13 мм/ч. ТГ - 3,82 ммоль/л, ХС - 6,7 ммоль/л, глюкоза 6,3 ммоль/л, инсулин -59,5 мкЕд/мл, индекс НОМА - 16,7 единиц. ЭКГ Ритм синусовый, ЧСС - 87 в минуту. Резкое отклонение электрической оси сердца влево. Блокада задненижнего разветвления левой ножки пучка Гиса. Изменения в диафрагмальном отделе миокарда. Ишемия передней стенки, верхушки. Гипертрофия левого желудочка. ЭХО - КГ Аорта и аортальный клапан уплотнены. Полости левого желудочка и правого предсердия расширены. Гипокинезия передне верхушечного сегмента и задней стенки левого желудочка. Гипертрофия МЖП и ЗСЛЖ. Сократительная функция ЛЖ и ФВ снижены ОА 3,3 см, УО - 75 мл, ФВ - 46 ,- 22 , МЖП - 1,4 см, ТЗСЛЖ - 15 мм. ДЭХО - КГ регургитация на митральном клапане -степени, на трикуспидальном клапане -степени. Признаки умеренной легочной гипертензии. Морфоденситометрические показатели активности щелочной фосфатазы крови в условных ед средний периметр - 5,702 (увеличен на 49 по сравнению с контролем), средняя площадь - 3,013(увеличена на 97 по сравнению с контролем),средняя оптическая плотность - 0,377 (увеличена на 52 по сравнению с контролем), средняя интегральная оптическая плотность - 54,730(увеличена на 207 по сравнению с контролем). Морфоденситометрические показатели активности кислой фосфатазы крови в условных ед средний периметр - 4,701 (увеличен на 62 по сравнению с контролем), средняя площадь - 2,00 (увеличена на 130 по сравнению с контролем), средняя оптическая плотность - 1,478 (увеличен на 67 по сравнению с контролем), средняя интегральная оптическая плотность - 67,03 (увеличен на 295 по сравнению с контролем). У пациента определена гиперинсулинемия. Назначена соответствующая терапия. Для определения эффективности разработанного способа были исследованы две группы больных. Первую группу (37) составили больные ишемической болезнью сердца без метаболических нарушений, с ИМТ 30 кг/ м 2 во вторую группу(35) вошли больные ишемической болезнью сердца с метаболическим синдромом ИМТ 30 кг/ м 2 . В качестве контроля использованы морфоденситометрические показатели крови 20 условно здоровых лиц. Проведена оценка морфометрических (площадь,периметр) и денситометрических(средняя оптическая плотность, интегральная оптическая плотность) параметров гранул щелочной и кислой фосфатаз нейтрофильных лейкоцитов у больных ИБС двух групп и группы контроля (таблица 1). Таблица 1 МОРФОДЕНСИТОМЕТРИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ АКТИВНОСТИ ГРАНУЛ ЩЕЛОЧНОЙ И КИСЛОЙ ФОСФАТАЗ БОЛЬНЫХ ИССЛЕДУЕМЫХ ГРУПП И ГРУППЫ КОНТРОЛЯ (М) Изучаемые параметры,усл. ед. Группы больных ИБС и контроля Кислая фосфатаза Щелочная фосфатаза Больные ИБС Больные Контрольная Больные ИБС Больные Контрольная ГруппаИБСМС группа (20) Группа(ИБСМС группа (20) 22683 Продолжение таблицы 1 Средняя площадь гранул Средний периметр гранул Средняя оптическая плотность гранул Средняя интегральная оптическая плотность гранул Примечание- р 0,005 - по сравнению с данными здоровых лиц, - р 0,01 - по сравнению с данными здоровых лиц При определении показателей значений щелочной фосфатазы максимальная степень активности, наблюдалась вогруппе исследования. В группе больных ИБС без метаболических нарушений мы наблюдали достоверное (р 0,005),по сравнению с показателями здоровых лиц,увеличение значения показателей гранул щелочной фосфатазы среднего периметра - на 14(3,230,08 усл. ед.), средней площади - на 24(1,120,05 усл. ед.), средней интегральной оптической плотности гранул - на 41(14,160,67 усл. ед.),средней оптической плотности гранул - на 17 (0,200,01 усл. ед.), при р 0,01. Определяли рост гранул щелочной фосфатазы у пациентов с ишемической болезнью сердца с метаболическими нарушениями по всем морфометрическим и денситометрическим характеристикам средний периметр гранул в данной группе вырос на 49 (4,210,15 усл. ед.),средняя площадь гранул - на 97 (1,780,11 усл. ед.), средняя оптическая плотность гранул - на 52(0,260,01 усл. ед.), а средняя интегральная оптическая плотность - на 207 (30,772,05 усл. ед.), по сравнению со значениями группы контроля(р 0,005). При определении показателей значений кислой фосфатазы максимальная степень активности, как и в случае с щелочной фосфатазой, наблюдали в группе больных ишемической болезнью с метаболическим синдромом. Определили, что средний периметр гранул в данной группе был на 62 выше, чем показатель значения группы контроля. Средняя площадь гранул щелочной фосфатазы был на 130 выше по сравнению со значением группы контроля. Основные оптические характеристики депозитов продукта реакции также свидетельствовали об активации НГ в группесредняя оптическая плотность гранул щелочной фосфатазы больных ишемической болезнью сопутствующими метаболическими нарушениями на 67 выше аналогичного показателя группы контроля. Средняя интегральная оптическая плотность гранул щелочной фосфатазы больных ишемической болезнью сопутствующими метаболическими нарушениями на 295 выше аналогичного в конрольной группе. Для оценки диагностической ценности,полученных в ходе исследования результатов, мы провели их сопоставление с данными клиниколабораторных тестов наших пациентов. Для решения данного вопроса мы вычисляли коэффициент корреляции с учетом его достоверности. Определена прямая сильная корреляционная связь в двух группах между уровнем инсулина в крови и характеристиками гранул щелочной фосфатазы и кислой фосфатазы. Данный способ диагностики позволяет своевременно выявлять лиц с гиперинсулинемией и инсулинорезистентностью,выявлять больных,составляющих группу риска, а также помогает оценить уровень защитно -приспособительных реакций организма, в том числе, при скрытой инсулинорезистентности и минимальных клинических проявлениях. Применение способа диагностики позволит оценить дальнейший прогноз заболеваний,протекающих с нарушением углеводного и жирового обмена, и может стать критерием правильности выбранной тактики лечения. Способ экономически выгоден, не травматичен,снижает время диагностики,информативен и доступен. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ диагностики гиперинсулинемии у больных с метаболическими нарушениями,включающий проведение исследование крови,отличающийся тем, что из крови делают мазки,которые окрашивают на выявление гранул щелочной и кислой фосфатазы, и с помощью компьютерной морфоденситометрии проводят определение морфоденситометрических показателей значения среднего периметра гранул,средней площади гранул, средней оптической плотности гранул,средней интегральной оптической плотности гранул. Способ по п.1, отличающийся тем, что при определении у больных ишемической болезнью сердца повышение параметров значения среднего периметра гранул, средней площади гранул, средней оптической плотности гранул,средней 5 22683 интегральной оптической плотности гранул щелочной фосфатазы соответственно на 14, на 24, на 17, на 41, а также повышение параметров определения среднего периметра гранул, средней площади гранул, средней оптической плотности гранул,средней интегральной оптической плотности гранул кислой фосфатазы соответственно на 31, на 52, на 3,на 69, по сравнению с такими же значениями условно здоровых лиц диагностируют гиперинсулинемию. Способ по п.1, отличающийся тем, что при определении у больных с ишемической болезнью сердца и метаболическими нарушениями повышение параметров значения среднего периметра гранул, средней площади гранул, средней оптической плотности гранул,средней интегральной оптической плотности гранул щелочной фосфатазы соответственно на 49, на 97, на 52, на 207, а также повышение параметров определения среднего периметра гранул, средней площади гранул, средней оптической плотности гранул,средней интегральной оптической плотности гранул кислой фосфатазы соответственно на 62, на 130, на 67,на 295, по сравнению с такими же значениями этих параметров условно здоровых лиц диагностируют гиперинсулинемию.