Способ определения риска развития гипертрофии миокарда левого желудочка у женщин, страдающих артериальной гипертензией на фоне абдоминального ожирения

(51) 01 33/48 (2009.01) 12 1/68 (2009.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Техническим результатом изобретения является повышение надежности и точности ранней диагностики. Это достигается тем, что в заявляемом определения риска развития гипертрофии миокарда левого желудочка у женщин, страдающих артериальной гипертонией на фоне абдоминального ожирения путем забора крови, выделения ДНК,методом полимеразной цепной реакции определения полиморфизма гена с разделением фрагментов амплификации в 10 полиакриламидном геле с последующим выделением генотипов, согласно изобретению,определяют полиморфизм гена АТ 2 Р и при выявлении генотипаилириск развития гипертрофии миокарда левого желудочка считается высоким, а при выявлении генотипа АА риск считают низким.(72) Шалхарова Жанат Ныгметовна Шалхарова Жанар Сайлаубековна Нускабаева Гульназ Оразбековна(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РИСКА РАЗВИТИЯ ГИПЕРТРОФИИ МИОКАРДА ЛЕВОГО ЖЕЛУДОЧКА У ЖЕНЩИН,СТРАДАЮЩИХ АРТЕРИАЛЬНОЙ ГИПЕРТЕНЗИЕЙ НА ФОНЕ АБДОМИНАЛЬНОГО ОЖИРЕНИЯ(57) Изобретение относится к области медицины, в частности к кардиологии, и может быть использовано для ранней диагностики гипертрофии миокарда левого желудочка (ГЛЖ) у женщин,страдающих артериальной гипертензией (АГ) на фоне абдоминального ожирения (АО). 22684 Изобретение относится к области медицины, в частности к кардиологии, и может быть использовано для ранней диагностики гипертрофии миокарда левого желудочка (ГЛЖ) у женщин,страдающих артериальной гипертензией (АГ) на фоне абдоминального ожирения (АО). Существует строгая линейная зависимость между массой миокарда левого желудочка (ММЛЖ) и сердечно-сосудистой смертностью. При сочетании АГ с ожирением риск развития ГЛЖ увеличивается в два раза. Результаты Фрамингемского исследования показывают, что кардиоваскулярная смертность увеличивается в 2,2 раза среди женщин и в 1,7 раза среди мужчин при увеличении массы ЛЖ на каждые 50 г/м 2 поверхности тела. Известен способ электрокардиографической диагностики гипертрофии миокарда левого желудочка у больных артериальной гипертонией с избыточной массой тела, при котором проводят регистрацию и анализ амплитуды зубцов комплекса . При этом при избыточной массе тела гипертрофию миокарда левого желудочка для мужчин диагностируют при 4 более 1,1 мВ или 3 более 2,3 мВ, а для женщин - приболее 0,8 мВ илиболее 1,5 мВ.(Патент РФ 2344754, кл. А 61 В 5/0402, опубл. 2009.01.27) Недостатком данного способа является то, что несмотря на высокую специфичность электрокардиографического метода, он обладает небольшой чувствительностью (2224), а также он не позволяет эффективно его использовать, когда необходимо оценить степень прогностического риска у конкретного больного или при проведении генетических исследований. Известен способ ранней диагностики концентрической гипертрофии миокарда левого желудочка у лиц казахской национальности, при котором осуществляют забор крови, выделяют ДНК,методом полимеразной цепной реакции определяют генотипы гена ангиотензин - превращающего фермента с разделением фрагментов амплификации в 10 полиакриламидном геле с последующим выделением генотипа,определяют полиморфные варианты гена рецептора ангиотензина 1 типа методом полиморфизма длины рестрикционных фрагментов, разделения фрагментов рестрикции в 10 полиакриламидном геле с выделением генотипа АС, при этом концентрическую гипертрофию миокарда левого желудочка у лиц без клинических проявлений сердечно-сосудистых заболеваний и больных эссенциальной гипертензией диагностируют при наличиигенотипа гена ангиотензин превращающего фермента, а у больных почечной гипертензией - при наличии илигенотипа, или АС генотипа, или сочетаний генотипов .(Предпатент РК 12253, кл. 01 33/53, опубл. 15.11.2002, Бюл.11) Недостатком данного способа является то, что его применяют для всех больных казахской национальности с артериальной гипертонией, без разделения по половой принадлежности и данный 2 способ не учитывает наличие абдоминального ожирения. Задачей изобретения является создание способа определения риска развития гипертрофии миокарда левого желудочка у женщин, страдающих артериальной гипертонией на фоне абдоминального ожирения, позволяющего с большой точностью определять состояние органов - мишеней, к числу которых относится миокард левого желудочка,проводить динамическое наблюдение за процессом ремоделирования сердца и осуществлять дифференцированный подход в лечении этих больных. Техническим результатом изобретения является повышение надежности и точности ранней диагностики. Это достигается тем, что в заявляемом способе определения риска развития гипертрофии миокарда левого желудочка у женщин, страдающих артериальной гипертонией на фоне абдоминального ожирения путем забора крови, выделения ДНК,методом полимеразной цепной реакции определения полиморфизма гена с разделением фрагментов амплификации в 10 полиакриламидном геле с последующим выделением генотипов, согласно изобретению, определяют полиморфизм гена АТ 2 Р и при выявлении генотипаилириск развития гипертрофии миокарда левого желудочка считается высоким, а при выявлении генотипа АА риск считают низким. Способ осуществляется следующим образом. У больной с артериальной гипертензией и имеющей абдоминальное ожирение производят забор венозной крови и локтевой вены объемом 1 мл в одноразовые пластиковые пробирки с ЭДТА объемом 0,5 мл. Выделение ДНК из цельной крови осуществляется набором реагентов 200(производство ООО Лаборатория ИзоГен). Супернатант с ДНК затем используют для генотипирования методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием набора реагентов для ПЦР амплификации ДНК(производство ООО Лаборатория ИзоГен). Для определения 1675 полиморфизм гена АТ 2 Р второго типа используют пары специфических олигонуклеотидных праймеров 53 и 5-С-3. Используют готовые для амплификации пробирки, которые содержат в лиофилизированном сухом состоянии ингибированную для горячего стартаДНК полимеразу 1 , дезоксинуклеозодтрифосфаты 200 мкМ и хлорид магния 2,5 мМ, а также оптимизированную буферную систему для проведения стандартной ПЦР амплификации. В пробиркидобавляют по 5 мкл смеси праймеров с конечной концентрацией 0,5 мкМ, 10 мкл ПЦР растворителя и по 5 мкл исследуемой ДНК. Для проведения ПЦР амплификации используютПЦР систему 9700 ( ). 22684 Программа амплификации имеет стандартную схему проведения, температура отжига составляет 55 С 1675 полиморфизм гена АТ 2 Р второго типа. После проведения ПЦР-амплификации продукты реакции подвергают рестрикционному расщеплению рестриктазойв течение двух с половиной часов при температуре инкубации 60 С. Продукты рестрикционного анализа фракционируют в 6-ном полиакриламидном геле в течение 90 мин при напряжении 250 В, окрашивают бромистым этидием и визуализируют в ультрафиолетовом свете. Для определения размера фрагментов ДНК используют маркер с начальной отметкой 50 п.н. При разделении продуктов рекстрикции на продукты 194 .р определяют генотип АА, 61 .генотип, а при -- 194 .р 61 .р При выявлении генотиповили , риск развития ГЛЖ считают высоким. При выявлении генотипа АА у больной, страдающей АГ на фоне абдоминального ожирения риск развития гипертрофии миокарда левого желудочка считают низким. Пример 1. Больная Е., 52 года. Диагноз Артериальная гипертензияст. Абдоминальное ожирениест. Риск 4 (очень высокий). Осл СНФК. Из анамнеза повышение артериального давления (АД) в течение 12 лет, максимальное АД 220/110 мм.рт.ст., у больной типичный клинический вариант течения АГ. Наследственность не отягощена. Объективно при трехкратном измерении АД 170/100, ЧСС 78 в минуту. ИМТ-31,02 ОТ-102. Из б/хим. анализов ОХС - 6,2 ХС ЛПВП - 1,1 ХС ЛПОНП - 0,77 ХС ЛПНП - 4,327 ТГ - 1,7. При определении полиморфного варианта гена ангиотензинпревращающего фермента был выявленгенотип гена АТ 2 Р, что показывает на высокий риск развития гипертрофии миокарда левого желудочка. Показатели эхокардиографии (ЭхоКГ) конечносистолический размер левого желудочка (КСР)2,65 см, конечно-диастолический размер левого желудочка (КДР) - 4,85 см, конечно-систолический объем левого желудочка (КСО) - 63,4 мл, конечнодиастолический объем левого желудочка (КДО) 124,3 мл, ударный объем (УО) -78,7 мл, минутный объем (МО) -3342 мл/мин, фракция выброса (ФВ) 77, дельта- 45, диаметр левого предсердия(Длп) - 3,94 см, диаметр правого желудочка (Дпж) 2,3 см, диаметр аорты (Да) - 3,23 см, толщина межжелудочковой перегородки систола (ТмжпС) 1,42 см, толщина межжелудочковой перегородки диастола (ТмжпД) -1,16 см, толщина задней стенки левого желудочка систола (ТзслжС) - 1,88 см,толщина задней стенки левого желудочка диастола(ТзслжД) - 1,23 см, Е/А-0,86, относительная толщина стенки левого желудочка (ОТСЛЖ) - 0,492,относительная толщина межжелудочковой перегородки (ОТМЖП) - 0,478, относительная толщина задней стенки левого желудочка(ОТЗСЛЖ) - 0,507, масса миокарда левого желудочка (ММЛЖ) - 262,436 г, индекс массы миокарда левого желудочка (ИММЛЖ) - 153,808 г,КДР/ППТ-2,8. Больная принимает энам, тромбоАсс, один раз в месяц принимает фуросемид, но лекарства пьет не регулярно, только при обострении заболевания. Учитывая факт, что лекарства малоэффективны, мы заменили другими препаратами, увеличили дозу и добавили прием -блокаторов. На момент выписки больной были даны рекомендации, а именно непрерывное применение препаратов в течение года. После курса лечения, на повторном ЭхоКГ было обнаружено значительное уменьшение массы миокарда сердца. Пример 2. Больная Ш., 55 лет. Диагноз Артериальная гипертензияст. Риск 2 (низкий). Осл СНФК 0. Из анамнеза повышение АД в течение 8 лет,максимальное АД 150/100 мм.рт.ст., аналогичный клинический вариант течения АГ. Наследственность не отягощена. Объективно при трехкратном измерении АД 140/100, ЧСС 78 в минуту. ИМТ-25,26 ОТ-96. При определении полиморфного варианта гена ангиотензинпревращающего фермента был выявлен АА генотип гена АТ 2 Р, что указывает на малую вероятность развития гипертрофии миокарда левого желудочка. Показатели ЭхоКГ КСР - 2,6 см, КДР - 3,3 см,КСО - 33 мл, КДО 80 мл, УО -47 мл, МО 3120 мл/мин, ФВ - 56, дельта- 28,8, Длп 3,2 см, Дпж - 3,4 см, Да - 3,5 см, ТмжпС - 1,8 см,ТмжпД - 1,6 см, ТзслжС - 2,1 см, ТзслжД - 1,8 см,Е/А-1,1, ОТСЛЖ - 1,03, ОТМЖП - 0,969, ОТЗСЛЖ 1,09, ММЛЖ - 261,819 г, ИММЛЖ - 168,76 г,КДР/ППТ-2,12. Учитывая вышеперечисленные данные, больной было назначено соответствующее лечение гипотензивная терапия (ингибиторы АПФ), лечение осложнений(-блокаторы),препараты для улучшения церебрального кровотока, на момент выписки больной были даны рекомендации,непрерывное применение препаратов, регулярная консультация у врача-кардиолога. Пример 3. Больная Б., 31 года. Диагноз Артериальная гипертензияст. Риск 2 (средний). Осл. СНФК 0. Из анамнеза повышение артериального давления (АД) в течение 1 года, максимальное АД 160/90 мм.рт.ст., у больной типичный клинический вариант течения АГ. Наследственность не отягощена. Объективно при трехкратном измерении АД 140/90, ЧСС 86 в минуту. ИМТ-18,73 ОТ-70. При определении полиморфного варианта гена ангиотензинпревращающего фермента был выявленгенотип гена АТ 2 Р, что указывает на высокий риск развития гипертрофии миокарда левого желудочка. Показатели ЭхоКГ КСР - 2 см, КДР - 4,1 см, КСО 26 мл, КДО - 96 мл, УО -70 мл, МО -2933 мл/мин,ФВ - 70, дельта- 40, Длп - 3,2 см, Дпж -3 см, Да 22684 ОТМЖП - 0,585, ОТЗСЛЖ - 0,634, ММЛЖ 213,718 г, ИММЛЖ- 164,515 г, КДР/ППТ-3,15. Несмотря на соответствующее лечение, у больной после повторного снятия ЭхоКГ не было отмечено уменьшения массы миокарда левого желудочка. Таким образом, заявляемый способ позволяет адекватно оценить наличие или отсутствие гипертрофии миокарда левого желудочка у женщин,страдающих АГ на фоне АО, проводить динамическое наблюдение за конкретной больной,осуществлять дифференцированный подход в лечении этих больных, а также дает возможность использовать полученные данные в эпидемиологических исследованиях. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ определения риска развития гипертрофии миокарда левого желудочка у женщин,страдающих артериальной гипертонией на фоне абдоминального ожирения путем забора крови,выделения ДНК, определения полиморфизма гена методом полимеразной цепной реакции с разделением фрагментов амплификации в 10 полиакриламидном геле с последующим выделением генотипов, отличающийся тем, что определяют полиморфизм гена АТ 2 и при выявлении генотипа А илириск развития гипертрофии миокарда левого желудочка считают высоким, а при выявлении генотипа АА считают низким.