Способ оценки адаптационной изменчивости холерных вибрионов

(51) 61 39/106 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ изменчивости видовых свойств первичных культур холерных вибрионов в зависимости от объектов выделения и степени выделяемости. Результат достигается путем исследования у идентифицированных культур холерных вибрионов 1 и О 1 серогрупп культуральноморфологических, серологических, токсигенных,гемолитических свойств, чувствительности к антибиотикам и отношения к биоварам. По культурально-морфологическим, серологическим,биовароспецифическим признакам определяют наличие типичных и атипичных свойств. По токсигенным и гемолитическим свойствам определяют эпидемическую значимость. По чувствительности к антибиотикам дополнительно определяют происхождение штаммов (местные или завозные). В завершение по всем показателям проводят ранжирование, строят графики и путем сравнения их определяют направление адаптационной изменчивости по трем уровням (1 уровень - низкий, 2 -средний, 3 - высокий). Способ с положительным результатом апробирован на 560 штаммах холерных вибрионов 1 серогруппы и на 341 штамме холерных вибрионов 1 серогруппы и может быть использован для изучения изменчивости холерных вибрионов в специализированных лабораториях особоопасных инфекций, а также может быть применен для изучения и других микроорганизмов.(73) Республиканское государственное казенное предприятие Казахский научный центр карантинных и зоонозных инфекций им. Масгута Айкимбаева Министерства здравоохранения Республики Казахстан(56) Милютин В.Н., Дрожевкина М.С., Ломов Ю.М. и др. Механизмы и диапазон изменчивости холерных вибрионов. - Ростов-на-Дону Ростов,книж. изд., 1981, 174 с. Хайтович А.Б., Ильичев Ю.А., Подмогильный В.А., Пидченко Н.Н. Особенности биологических свойств холерных вибрионов 01 серогруппы, выделенных на территории Украины в 2002 году // МатериалыРос.науч.-практ.конф. по проблеме Холера. Ростов -н/Д., 2003, с. 150-152(54) СПОСОБ ОЦЕНКИ АДАПТАЦИОННОЙ ИЗМЕНЧИВОСТИ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ(57) Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии и может быть использовано для оценки и прогнозирования эпидемической ситуации в регионах распространения холеры. Разработан способ,который путем идентификации холерных вибрионов и изучения выраженности их атипичных свойств дает возможность определения уровня адаптационной Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии и может быть использовано для оценки и прогнозирования эпидемической ситуации в регионах распространения холеры. Известен способ оценки изменчивости холерных вибрионов, включающий изучение отдельных показателей на всех уровнях идентификации(Милютин В. Н., Дрожевкина М. С, Ломов Ю. М. и др. Механизмы и диапазон изменчивости холерных вибрионов. - Ростов-на-Дону Ростов, книж. изд.,1981. - 174 с Хайтович А.Б., Ильичев Ю.А.,Подмогильный В.А., Пидченко Н.Н. Особенности биологических свойств холерных вибрионов 01 серогруппы, выделенных на территории Украины в 2002 году // МатериалыРос. науч.-практ. конф. по проблеме Холера (4-5 июня 2003 г. Ростов-наДону). - Ростов-н/Д, 2003. - с. 150-152.). Недостатком известного способа является фрагментационная оценка показателей изменчивости без группового ранжирования. Задачей предлагаемого изобретения является выявление степени атипичности первичных культур холерных вибрионов в различных экологических нишах. Технический результат возможность определения уровня адаптационной изменчивости видовых свойств первичных культур холерных вибрионов в зависимости от объектов выделения и степени выделяемости. Технический результат достигается путем исследования у идентифицированных культур холерных вибрионов О 1 и 1 серогрупп культурально-морфологических,серологических,токсигенных,гемолитических свойств,чувствительности к антибиотикам и отношения к биоварам. По культурально-морфологическим,серологическим, биовароспецифическим признакам определяют наличие типичных и атипичных свойств. По токсигенным и гемолитическим свойствам определяют эпидемическую значимость. По чувствительности к антибиотикам дополнительно определяют происхождение штаммов (местные или завозные). В завершение по всем показателям проводят ранжирование, строят графики и путем сравнения их определяют направление адаптационной изменчивости по трем уровням (1 уровеньнизкий, 2 -средний, 3 высокий). Способ осуществляется следующим образом. Изменчивость холерных вибрионов изучают по следующим признакам морфологии колоний,агглютинативности типовой и вариантоспецифическими сыворотками,чувствительности к фагам холерному и Эльтор. При культурально-морфологической характеристике на плотной питательной среде без ингибитора (на щелочном агаре) к типичной морфологии относят гладкие дисковидные,прозрачные и полупрозрачные с ровными краями и гладкой поверхностью (1-1,5 мм в диаметре) колонии холерного вибриона. При типичном росте в 1 пептонной воде (или бульоне) через 6-8 часов отмечают равномерное помутнение и образование нежной пленки. Холерные вибрионы 01 серогруппы в зависимости от их агглютинабельности сывороткамииделят на 3 серовара,и . При агглютинабельности сывороткойдо титра или полтитра серовар определяют как , при агглютинабельности сывороткойдо титра или полтитра серовар определяют как , при одновременной агглютинабельности обеими сыворотками идентифицируют серовар. При выявлении агглютинативных свойств культур используют развернутую реакцию агглютинации с холерными сыворотками О, Огава, Инаба,по типу Райта. После определения принадлежности к 01 серогруппе идентифицируют варианты биовара классический или Эльтор. При определении биоварной принадлежности холерных вибрионов 01 серогруппы изучают на наличиечувствительности к фагам холерному и Эльтор, чувствительности к полимиксину, реакции гемагглютинации эрироцитов курицы или морской свинки, наличие ацетилметилкарбинола в реакции Фогес-Проскауэра. Фаги С и Эльтор используют для дифференциации биовараи. Холерный фаг классический С применяют для выявления холерных вибрионов классического биовара. Холерный фаг Эльтор необходим для диагностики биовара Эльтор. Отношение к холерным фагам С (классический) и Эльтор определяют по методу Грациа..и 0139 дают положительную реакцию Фогес-Проскауэра, .отрицательную. Эпидемическую значимость штаммов определят методом выявления гемолитической активности в пробе Грейга, чувствительность к фагам ХДФ-3,4,5,пробу на кроликах-сосунках. Идентификацию холерных вибрионов 1 серогруппы проводят по выявлению типичных культурально-морфологических,биохимических признаков родавидапри отсутствии агглютинабельности холерными диагностическими сыворотками - О, , , , 0139. Холерные вибрионы 01 типируют по отношению к фагам ДАР, а культуры 1 серогруппы фагами ТЭПВ. Существует 19 фаговаров 01 серогруппы и 7 фаговаровО 1. Чувствительность к антибиотикам (тетрациклин,левомицетин,ципрофлоксацин,гентамицин,полимиксин) культур холерных вибрионов определяют диско-диффузионным методом,методом серийных разведений в жидкой питательной среде (агар Хоттингера, рН 7,2-7,4, 1 пептонная вода, рН 7,2). При оценке антибиотикограмм используют паспортные данные и результаты изучения антибактериальной активности штаммов в лаборатории холеры КНЦКЗИ им. М. Айкимбаева. Анализируют чувствительность холерных вибрионов к 3 препаратам полимиксину,тетрациклину, левомицетину. Далее по показателям устойчивости к антибиотикам выделяемые штаммы распределяют по уровням и при сравнении графических кривых выявляют сходство и различия антибиотикочувствительности штаммов из разных регионов. К атипичным относят колонии холерного вибриона на плотной питательной среде мутные, с мутным центром, пигментированные, с неровными краями и шероховатой поверхностью. Наличие неполной агглютинации всеми холерными сыворотками титра),частичной агглютинации со всеми типовыми сыворотками либо частичной одновременной агглютинации с типовыми сыворотками и сывороткойрасценивают как атипичные агглютинативные свойства. Для штаммов биовара Эльтор атипичным фаголизабельным свойством по отношению к классическому бактериофагу С являлось наличие лизиса в любой дозе, к бактериофагу Эльтор неполный лизис (ниже ДРТ) либо полная резистентность штаммов. Культуры, обладающие гемолитической активностью,относят к эпидемически неопасным,нетоксигенным. Культуры,проявляющие отсутствие гемолитической активности,относят к эпидемически опасным, токсигенным. При наличии у нетоксигенных штаммов холерных вибрионов 1 серогруппы и культур 1 серогруппы совпадений по чувствительности к различным антибиотикам их относят к холерным вибрионам местного происхождения, а при отсутствии таких совпадений у токсигенных штаммов их относят к числу холерных вибрионов завозного происхождения. По чувствительности к различным антибиотикам их относят к холерным вибрионам местного происхождения, а при отсутствии таких совпадений у токсигенных штаммов их относят к числу холерных вибрионов После завершения полной идентификации штаммов переходят непосредственно к проведению самого способа. Суть предлагаемого способа заключается в составлении вариационных рядов показателей фенотипической изменчивости,которые сравниваются между собой. В ходе предварительного анализа прослеживают уровни проявлений свойств на разных территориях(высокий, средний и низкий). Показатели всех изучаемых признаков распределяют по трем уровням путем ранжирования, которое применяют при статистической обработке в биологических и медицинских исследованиях). Затем строят графики полученных уровней для каждой группы штаммов с последующим сравнением напряженности изменчивости по комплексу признаков. Для сравнения используют относительные показатели признаков. В каждом вариационном ряду делением максимального показателя на три получают пограничное значение,которое определяет конкретную градацию уровней. В дальнейшем изложении третий уровень соответствует высоким показателям, второй - средним и первыйнизким значениям. При отсутствии признака уровень считают нулевым. Показатели (ранги) уровней систематизируют в таблицах по группам штаммов,выделенных на разных территориях. Складывая показатели уровней по строкам таблицы,определяют сумму рангов уровней изменчивости для каждой области, затем строят для нее графики,отражающие интенсивность изменчивости для каждой группы штаммов по всему комплексу признаков. Сравнение этих графиков позволяет выявить популяции штаммов со сходным или противоположным направлением фенотипической изменчивости. Примеры осуществления способа Пример 1. Изучение адаптационной изменчивости холерных вибрионовО 1 серогруппы,изолированных на территории Казахстана за 1998-2003 гг. У холерных вибрионов 1 серогруппы,изолированных на территории Казахстана за 19982003 гг., выявлена неоднородность популяции по ферментации маннозы в аэробных условиях,чувствительности к холерным фагам ХДФ-5, С и Эльтор. Появление у микроорганизмов 1 серогруппы трех последних признаков, характерных для представителей О 1 серогруппы, может указывать на появление общих свойств с культурами О 1 серогруппы. С другой стороны,ускоренная ферментация маннозы в аэробных условиях,предположительно связанная с повышенной способностью продуцировать щелочь,отмечается только у вибрионов 1 серогруппы. Следует отметить, что все изучаемые культуры 01 серогруппы изолированы от людей. Их изменчивость может отражать особенности адаптации их в макроорганизме. Возникла необходимость изучения направленности изменчивости и тенденции возникновения общих свойств с 01 серогруппой. По территориальной выделяемости штаммов колебания относительных показателей отмечаются в пределах от 2,6 до 36,1 от общего количества по республике (Фиг. 1). В упорядоченном ряду в порядке убывания значения расположились в трехступенчатом порядке. При этом четко обозначились три уровня высокий соответствует Кызылординской области,среднийМангистауской, КЖО и ЗКО, низкий Атырауской, Алматинской областям и г. Алматы. Для вычленения уровней необходимо определить пограничное значение. Оно равно частному от деления максимального значения показателя (в данном случае 36,1) на три (12). Отсюда чувствительных к фагу ХДФ-5 относятся к третьему уровню, Атырауская область - ко второму (рисунок 3). При сравнении чувствительности к фагу Эльтор Мангистауская, ЮКО и Кызылординская области оказались на третьем уровне изменчивости, ЗКО - на втором. Чувствительность к фагу С обнаружена лишь в Кызылординской и Мангистауской областях,что позволяет отнести их к третьему уровню. Ввиду отсутствия подобных штаммов во всех прочих областях они отнесены к нулевому уровню. Все показатели и полученные уровни внесены в таблицу для проведения корреляционного анализа. Представляет интерес характер изменчивости по указанным признакам по мере возрастания выделяемости, так как он может отражать направление селекции вибрионов О 1 серогруппы в условиях макроорганизма. Таблица 1 Частота выделения холерных вибрионов поп О 1 серогруппы от людей и уровни их изменчивости Кызылординская 36,1 3 45,5 3 Мангистауская 23,2 2 11,4 1 ЮКО 16,4 2 23,2 2 ЗКО 14,1 2 0 0 Атырауская 4,7 1 25,0 2 Алматинская 2,9 1 20,0 2 г. Алматы 2,6 1 0 0 Условные обозначения Уфм - ускоренная ферментация маннозы Для сравнения общей изменчивости суммированы значения уровней по признакам изменчивости на каждой территории. Предельное значение равно 12 (Кызылординская область). Графическое изображение уровней отражает направление изменчивости исследуемых групп штаммов и дает возможность их сравнения (рисунок 5). Так, по рисунку наглядно видно, что максимальна изменчивость по всем четырем исследованным признакам в Кызылординской, по трем в Мангистауской областях. Все изложенное позволяет высказать предположение, что при учащении пассирования вибрионов 1 серогруппы через организм человека увеличивается частота выделения штаммов, проявляющих чувствительность ко всем трем фагам. Иными словами приобретение этих свойств обеспечивает им большую выживаемость в условиях макроорганизма. Пример 2 Изучение адаптационной изменчивости токсигенных и нетоксигенных холерных вибрионов О 1 серогруппы Проведен анализ изменчивости холерных вибрионов 01 серогруппы, изолированных в 1998 4 Число штаммов Уфм Уровень значения от 0 до 12 относятся к первому уровню, от 12 до 24 - ко второму, выше 24 - к третьему. Таким образом,по признаку частоты выделяемости культур территории распределились по уровням в следующей последовательности Кызылординская - наиболее высокий третий,Мангистауская, ЮКО и ЗКО -второй, Атырауская,Алматинская области и г. Алматы - первый. Аналогичным образом определяются уровни изменчивости по отдельным признакам. По частоте выделения культур с ускоренной ферментацией маннозы в аэробных условиях Кызылординская область отнесена к территории третьего,Атырауская, ЮКО и Алматинская области ко второму, Мангистауская к первому уровню (рисунок 2). ЮКО, ЗКО, Мангистауская и Кызылординская области по частоте выделения культур, 3 3 3 2 0 0 0 2003 гг. в зависимости от степени их эпидемической значимости. Среди эпидемически значимых холерных вибрионов О 1 серогруппы биовара Эльтор чаще отмечается чувствительность к фагу С, чем среди эпидемически неопасных. В то же время резистентностью к фагу Эльтор значительно чаще обладают нетоксигенные штаммы. Самая высокая степень чувствительности к фагу С и, одновременно, низкий уровень изменчивости по морфологии колоний,агглютинативным признакам и резистентности к фагу Эльтор отмечаются у клинических токсигенных штаммов. Разделение относительных показателей изменчивости на уровни в каждой группе выявило совпадение направлений изменчивости по чувствительности к фагу С и резистентности к фагу Эльтор у токсигенных штаммов от людей и ООС и нетоксигенных в тех же группах (таблица 2). По атипичности агглютинативных свойств совпадают уровни у нетоксигенных культур от людей и токсигенных штаммов из ООС. Таблица 2 Распределение изменчивости культур по уровням Объекты Атипичная морфология колоний 1 1 Атипичные Чувствитель РезистентСумма агглютинатив ность к фагу ность к фагу уровней ные свойства С Эльтор 1 3 2 7 3 1 3 8 Общий диапазон изменчивости возрастает в следующем порядке культуры эпидемически значимые от людей - нетоксигенные от людей нетоксигенные из ООС - токсигенные из ООС. При этом в последней группе возрастание выражено более резко. Следовательно,менее всего изменчивости подвержены холерные вибрионы в условиях макроорганизма.(соответствующий максимальной сумме уровней,равной 11) отмечен у токсигенных штаммов,изолированных из ООС. При сравнительном анализе направлений изменчивости групп штаммов максимальный уровень атипичности свойств проявлялся среди изолятов из сточных вод, затем из водоемов и из смывов в эпидочагах (таблица 3). Таблица 3 Распределение токсигенных культур из различных ООС по уровням изменчивости Водоемы Сточные воды Очаги Атипичная морфология колоний 0 3 3 Атипичные Чувствительность Резистентность к Сумма агглютинативные к фагу С фагу Эльтор уровней свойства 3 1 3 7 1 3 1 8 0 3 0 6 Группа эпидемически значимых изолятов из ООС разнородна по изменчивости. Обращает на себя внимание тот факт, что характер изменчивости штаммов из сточных вод и смывов в очагах совпадает по атипичности морфологии колоний и чувствительности к фагу С. Изменчивость токсигенных штаммов из водоемов резко отличается от этих групп и имеет четко противоположный характер, который аналогичен проявлению атипичных свойств нетоксигенных культур, изолированных от людей (таблица 3). По агглютинативным свойствам и резистентности к фагу Эльтор изменчивость токсигенных культур из разных ООС возрастает в направлении смывы в эпидочагах сточные воды водоемы, по способности лизироваться фагом С и морфологии колоний убывает. Следует отметить, что подобная тенденция направленности отмечается при сравнении всех токсигенных и нетоксигенных штаммов. Общий уровень изменчивости плавно возрастает в следующем порядке культуры из очагов - из водоемов -из сточных вод. Для выявления особенностей адаптационной изменчивости холерных вибрионов прослежены кривые показателей по 6 группам штаммов (рисунок 8). При этом четко видно, что ход кривых уровней направлений изменчивости по указанным признакам совпадает у токсигенных культур, изолированных из водоемов и нетоксигенных от людей, а также у эпидемически значимых штаммов, выделенных из сточных вод и эпидочагов. Кривая изменчивости токсигенных изолятов от людей, за исключением признака атипичности морфологии колоний, также совпадает с атипичностью культур из сточных вод и смывов с очагов. Конфигурация изменчивости нетоксигенных штаммов из ООС, за исключением признака атипичности морфологии колоний,приближается к кривым токсигенных культур,изолированных из водоемов и нетоксигенных от людей. В целом, графики кривых изменчивости токсигенных культур от людей и нетоксигенных из ООС являются зеркальными отражениями друг друга,то есть прямо противоположны. Если сопоставить все это с тем, что последние кривые соответствуют двум разным формам холерных вибрионов паразитической и сапрофитической,то,возможно,их разнонаправленность не случайна. Кривые, отражающие изменчивость холерогенных штаммов в макроорганизме и нехолерогенных в ООС,свидетельствуют о хорошей адаптации этих групп микроорганизмов к естественной для них среде обитания, тогда как остальные являются результатом пребывания вибрионов в дискомфортных для них условиях, вызывающим увеличение изменчивости приспособительного характера. Заключение. Результаты исследования дают основания говорить о разнонаправленности изменчивости токсигенных и нетоксигенных холерных вибрионов. Конкретные материалы, полученные при анализе направлений изменчивости холерных вибрионов 01 серогруппы, изолированных в 1998-2003 гг., в зависимости от степени их эпидемической 5 значимости, наглядно демонстрируют эти отличия,расширяют представление оприспособительных возможностях вибрионов в различных экологических условиях. В целом же анализ направлений изменчивости расширяет, на наш взгляд, возможности проведения комплексного сравнительного изучения свойств микроорганизмов и рекомендуется для использования в научных исследованиях. Пример 3 Анализ устойчивости к антибиотикам холерных вибрионов. Чувствительность к антибиотикам была исследована у штаммов разных серогрупп по территориям выделения (фиг. 9, 10). Совпадения характера диаграмм антибиотикоустойчивости вибрионов разных серорупп в Кызылординской и Атырауской областях дает основание для предположения об эндемичности этих штаммов, характеризующихся устойчивостью к обоим антибиотикам с незначительным преобладанием тетрациклинорезистентности. Кроме того, по четкому различию в диаграммах лекарственной устойчивости вибрионов, изолированных в Мангистауской области,ЮКО и г. Алматы можно предположить различия в их происхождении. При анализе популяционной изменчивости холерных вибрионов обнаружены отличия в проявлении фенотипических свойств в зависимости от эпидемической значимости культур. Учитывая особую значимость антибиотикограммы в характеристике штаммов, было проведено сравнение резистентности холерных вибрионов к антибиотикам в зависимости от их гемолитической активности (фиг. 11). Среди всех штаммов 1 независимо от их гемолитической активности и гемолизположительных 01 серогруппы отношение к трем антибиотикам для каждой территории имеет однотипный характер. Отличие антибиотикограммы токсигенных вибрионов Эльтор может отражать иное происхождение данной группы штаммов. Показатели антибиотикограммы холерных вибрионов из ООС независимо от их гемолитической активности были идентичны (рисунок 12). По характеру проявления лекарственной устойчивости сходство с ними отмечается у клинических вибрионов,обладающих гемолитической активностью. В то же время резистентность гемолизотрицательных клинических штаммов на разных терриориях явно отличается от нетоксигенных эндемичных, что может указывать на разное происхождение штаммов. С целью детализации антибиотикограмм проведено сравнение показателей по областям с учетом гемолитической активности штаммов (рисунок 13). Обращает на себя внимание тот факт, что гемолизотрицательные и гемолизпозитивные штаммы в Кызылординской области имеют идентичную резистентность к антибиотикам. Следовательно, можно предположить, что данная группа штаммов имеет местное происхождение. Явные различия антибиотикоустойчивости в зависимости от гемолитической активности имеют культуры,изолированные в Мангистауской,Атырауской областях и г. Алматы. Токсигенные штаммы в г. Алматы являются результатом завозов инфекции из других стран(Турция,Пакистан). В силу того,что антибиотикограммы токсигенных штаммов в Мангистауской и Атырауской областях отличаются от противоположной группы, можно предположить, что они также являются результатом заноса. Различия резистентности штаммов дают основание предположить, что токсигенные штаммы 01 серогруппы в изученных регионах представляют собой разные клоны холерных вибрионов, отличающиеся от циркулирующих в данных местностях нетоксигенных холерных вибрионов. Таким образом, при наличии у нетоксигенных штаммов холерных вибрионов 01 серогруппы и культур 1 серогруппы совпадений по чувствительности к различным антибиотикам их относят к холерным вибрионам местного происхождения, а при отсутствии таких совпадений у токсигенных штаммов их относят к числу холерных вибрионов завозного происхождения. Таблица 4 Уровни резистентности к антибиотикам гемолизнегативных штаммов О 1 серогруппы Области Мангистауская Кызылординская ЮКО Атырауская г. Алматы Таблица 5 Уровни резистентности к антибиотикам гемолизпозитивных штаммов 01 серогруппы Области Полимиксин Тетрациклин Левомицетин Сумма уровней Таким образом, на территории Казахстана отмечается выделение холерных вибрионов с различными показателями резистентности к антибиотикам. В Мангистауской, Кызылординской и Атырауской областях определена высокая частота выделения нетоксигенных холерных вибрионов,обладающих устойчивостью к тетрациклину и левомицетину (Фиг. 14, 15). Таблица 6 Резистентность к антибиотикам культур 1 серогруппы по областям Мангистауская Кызылординская ЮКО Атырауская ЗКО г. Алматы Алматинская Среди холерных вибрионов, изолируемых в ЗКО,преимущественное большинство составляют штаммы чувствительные к обоим антибиотикам(рисунок 16). На территории Алматинской области и г. Алматы местные штаммы обладают чувствительностью к тетрациклину и левомицетину(рисунок 15, 16). В то же время токсигенные завозные штаммы в г. Алматы отличаются высоким уровнем резистентности к тетрациклину и левомицетину (рисунок 14). Особое внимание следует обратить на характеристику холерных вибрионов,изолированных в ЮКО. Для культурО 1 серогруппы в этом регионе характерны низкие показатели резистентности к тетрациклину и левомицетину (рисунок 16).У нетоксигенных штаммов 01 серогруппы отмечены высокие показатели устойчивости к тетрациклину (фиг. 15). Токсигенные культуры 01 серогруппы в ЮКО отличаются чувствительностью к обоим антибиотикам и это позволяет предположить их завозное происхождение (рисунок 14). Таким образом, в ЮКО культуры холерных вибрионов нетоксигенные и токсигенные 01 серогруппы, а также вибрионыО 1 серогруппы по чувствительности к антибиотикам имели отличия между собой. Анализ характеристик холерных вибрионов,изолированных на территории Казахстана показал высокие значения популяционной изменчивости вибрионов и их резистентности к антибиотикам,которые осложняют проведение эффективного лабораторного исследования. Выявленные различия в резистентности холерных вибрионов,в зависимости от территориальной приуроченности штаммов и их эпидемической значимости означают как необходимость динамичного отслеживания этих признаков у вновь выделяемых культур, так и сложности лечения больных, инфицированных антибиотикоустойчивыми штаммами. Способ технически прост в исполнении,экономичен,дает возможность оценки изменчивости в групповом аспекте для выявления закономерностей адаптации популяций холерных вибрионов в сторону ее усиления патогенности и предпосылок появления эпидемически опасных штаммов и прогнозирования эпидемической ситуации. Способ оценки адаптационной изменчивости холерных вибрионов позволяет выявлять ее уровни на разных территориях, а также в любых других совокупностях и сравнивать степень их выраженности. Предлагаемый способ может быть пригоден для изучения разных уровней изменчивости других микроорганизмов. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ оценки адаптационной изменчивости холерных вибрионов, включающий изучение отдельных признаков вибрионов на всех уровнях идентификации, отличающийся тем, что с учетом всего комплекса показателей адаптационной изменчивости проводят ранжирование групповых показателей и при наличии гладких дисковидных,прозрачных и полупрозрачных колоний холерного вибриона с ровными краями и гладкой поверхностью (1-1,5 мм в диаметре) на плотной питательной среде без ингибитора (на щелочном агаре) их относят к типичной морфологии, а при 7 наличии мутных, с мутным центром, пигментацией,с неровными краями и шероховатой поверхностью на той же питательной среде их относят к колониям с атипичной морфологией, при наличии полной агглютинации холерных вибрионов 01 серогруппы групповой и типовыми сыворотками их относят к типичным представителям этой серогруппы, а при неполной агглютинации всеми или одной диагностическими сыворотками, а также при одновременной агглютинации типовыми сыворотками в сочетании с сывороткойих относят к атипичным представителям этой серогруппы, при наличии у холерных вибрионов 01 серогруппы биовара Эльтор чувствительности к фагу Эльтор в дозе рабочего титра (ДРТ) их относят к типичным представителям биовара Эльтор, при наличии у этих вибрионов лизиса фагом Эльтор в дозе ниже ДРТ или наличии лизиса фагом С(классическим) их относят к атипичным, при наличии у холерных вибрионов гемолитической активности в пробе Грейга их относят к эпидемически неопасным,нетоксигенным(нехолерогенным), при отсутствии гемолитической активности их относят к эпидемически опасным,токсигенным (холерогенным), при наличии у 1 серогруппы агглютинабельности сыворотками О, , лизиса фагами Эльтор, С (классическим), ХДФ 3,4,5 их относят к атипичным, у типичных представителей этой группы отсутствует агглютинабельность сыворотками О, Огава и Инаба,0, чувствительность к фагам Эльтор, С и ХДФ 3,4,5, полученные показатели всех вариантов атипичных свойств в обеих серогруппах исчисляют в процентах, выбирают максимальные показатели,делят их на 3 равные части с выявлением пограничных значений от 0 до 1, от 1 до 2, от 2 до 3 его уровня и каждое из этих значений относят к уровню атипичности и при наличии культур холерных вибрионов с признаками (показателями) третьей группы их относят к штаммам с высокой степенью атипичности, при наличии холерных вибрионов второй группы их относят к штаммам со средней степенью атипичности и при наличии холерных вибринов с показателями третьей группы их относят к штаммам со слабой степенью атипичности, которую выражают графически, и при этом четко выявляются сходство и различия в проявлении адаптации разных популяций холерных вибрионов в разных экологических нишах. Фиг.1. Частота выделяемости культур вибрионов поп О 1 серогруппы Фиг.2. Частота выделения культур с ускоренной ферментацией маннозы в аэробных условиях Фиг. 5. Графики уровней изменчивости по комплексу признаков а -ускоренная ферментация маннозы, б чувствительность к фагу ХДФ-5, в - чувствительность к фагу С, г - чувствительность к фагу Эльтор Области 1-Кызылординская, 2-Мангистауская, 3-ЮКО, 4 ЗКО, 5-Атырауская, 6-Алматинская Фиг. 6. Изменчивость холерных вибрионов О 1 серогруппы 1- токсигенные, 2 - нетоксигенные, а атипичностъ морфологии колоний, б - атипичностъ агглютинативных свойств, в - чувствительность к фагу С, г - резистентность к фагу Элыпор Фиг. 7. Изменчивость токсигенных холерных вибрионов О 1 серогруппы, изолированных из различных объектов окружающей среды а - атипичность морфологии колоний, б - атипичностъ агглютинативных свойств, в - чувствительность к фагу С, г - резистентностъ к фагу Эльтор Фиг. 8. Уровни адаптационной изменчивости холерных вибрионов а - атипичностъ морфологии колоний,б - атипичность агглютинативных свойств, в - чувствительность к фагу С, г - резистентностъ к фагу Эльтор 1 - токсигенные штаммы, выделенные от людей, 2 - нетоксигенные штаммы, выделенные от людей, 3 токсигенные штаммы, выделенные из водоемов, 4 - токсигенные штаммы, выделенные из сточных вод, 5 токсигенные штаммы, выделенные из объектов внешней среды в очагах, б - нетоксигенные штаммы,выделенные из ООС Фиг. 9. Резистентность к антибиотикам культурО 1 серогруппы по областям 1 - Мангистауская, 2 - Кызылординская, 3 - ЮКО, 4 - Атырауская, 5 -ЗКО, 6 - г. Алматы, 7 Алматинская, Костанайская, Восточно-Казахстанская (ВКО) и Жамбылская. Фиг. 10. Резистентность к антибиотикам культур поп 01 серогруппы по областям 1 - Мангистауская, 2 - Кызылординская, 3 - ЮКО, 4 - Атырауская, 5 - ЗКО, 6 - г. Алматы, 7 Алматинская. Фиг. 13 Устойчивость к антибиотикам культур О 1 серогруппы с различной гемолитической активностью а - гемолизотрицательные, б - гемолизположительные. Области 1 - Мангисекая, 2 Кызылординская, 3- ЮКО, 4 - Атырауская, 5 - ЗКО, 6 - г. Алматы, 7 - Алматинская, Костанайская, ВКО и Жамбылская. Фиг. 14. Уровни резистентности к антибиотикам холерных вибрионов, изолированных по областям ММангистауская, К - Кызылординская, А - Атырауская, Ю - ЮКО, Ал - г. Алматы. Фиг. 15. Уровни резистентности к антибиотикам холерных вибрионов, изолированных по областям М Мангистауская, К - Кызылординская, А-Атырауская, Ю - ЮКО, 3 - ЗКО, Ал - г. Алматы, Ао - Алматинская область. Фиг. 16. Уровни резистентности к антибиотикам холерных вибрионов, изолированных по областям М Мангистауская, К - Кызылординская, А - Атырауская, Ю - ЮКО, 3 - ЗКО, Ал - г. Алматы, АоАлматинская область.