Способ увеличения активности регенерации и размножения яблони сорта Апорт іn vitro

КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Задачей изобретения является увеличение регенерации эксплантов и побегов яблони сорта Апорт при клональном микроразмножении за счет повышения стрессо устойчивости и увеличения коэффициента размножения. Технический результат достигается тем, что регенерация эксплантов и коэффициент размножения увеличились более чем в 2 раза по сравнению с контролем и на 3 побега больше сформировалось на 1 эксплант по сравнению с прототипом из-за того, что дополнительно вводили 10 мг/л аминокислоты пролин и культивировали экслланты на данной среде при температуре 20-25 и 16 часовом световом режиме до активной регенерации и формирования микропобегов размером от 1 см и выше, которые затем пересаживали для размножения на питательную среду, содержащую макро и микросоли по Мурасиге-Скуга, культивировали в течение шести месяцев с последующей пересадкой микропобегов на среду для укоренения.(72) Долгих Светлана Георгиевна Исин Магжан Малгеждарович Избасаров Дуйсебай Сайлаубаевич Сагитов Абай Оразович(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский институт защиты и карантина растений Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский институт плодоводства и виноградарства(54) СПОСОБ УВЕЛИЧЕНИЯ АКТИВНОСТИ РЕГЕНЕРАЦИИ И РАЗМНОЖЕНИЯ ЯБЛОНИ СОРТА АПОРТ(57) Изобретение относится к сельскому хозяйству,в частности - плодоводству и биотехнологии, может быть использовано в питомниководстве для размножения отобранных клонов Апорта. Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности - плодоводству и биотехнологии. Может быть использовано в питомниководстве для размножения отобранных клонов Апорта. Известно, что при введении в культуру тканей эксплант испытывает сильный стресс, в результате травмы, полученной им при изолировании, и это негативно сказывается на регенерации и размножении. Известны адаптационные и защитные действия пролина у высших растений, испытывающих стрессовое влияние внешних абиотических факторов ( .- 1996,- 40.3-4,- .67-81). Однако не известно действие аминокислоты пролин в составе питательной среды на растительные ткани, культивируемые в условиях. Известна питательная среда для микроклонального размножения подвоев яблони,составленная по прописи Мурасиге-Скуга,дополнительно содержащая в качестве стимулятора роста экстракт родиолы,что увеличивает коэффициент размножения (А.С.2111652. А 01 Н 4/00 Заяв.09.08.96. Фардзинова И.М. Питательная среда для микроклонального размножения подвоев яблони). Недостатком данного способа является то, что эта среда не улучшает регенерацию эксплантов на первом этапе клонального микроразмножения, в период ввода их в культуру тканей, когда растение испытывает стресс от механических повреждений. Прототипом заявленного способа является способ размножения яблони в культуре тканей, в которой перед посадкой побегов на питательную среду для получения растений-регенерантов осуществляют субкультивирование в течение 4-6 недель на питательной среде Мурасиге-Скуга при содержании аммония азотнокислого 412-825 мг/л среды (А.с. 1729338 . А 01 Н 4/00 Заяв. 11.04.89 Туровская Н.И. Способ размножения яблони в культуре тканей). Недостатком известного способа является отсутствие данных по влиянию соотношений форм азота 3-4 , входящих в питательную среду на регенерацию и размножение растений. Задачей изобретения является увеличение регенерации эксплантов и побегов яблони сорта Апорт при клональном микроразмножении за счет повышения стрессо устойчивости и увеличения коэффициента размножения. Это достигается тем, что дополнительно вводили 10 мг/л аминокислоты пролин и культивировали экспланты на данной среде при температуре 20-25 и 16 часовом световом режиме до активной регенерации и формирования микропобегов размером от 1 см и выше, которые затем пересаживали для размножения на питательную среду, содержащую макро и микросоли по Мурасиге-Скуга с измененным соотношением форм азота, а именно на этапе регенерации содержание аммония азотнокислого составляло 413 мг/л и калия азотнокислого - 475 мг/л, а на этапе пролиферации аммония азотнокислого 825 мг/л и калия азотнокислого 950 мг/л, после чего культивировали в течение шести месяцев с последующей пересадкой микропобегов на среду для укоренения. Способ осуществляется следующим образом. Стерильные экспланты яблони сорта Апорт вводились в культуру тканей на питательную среду,содержащую макро и микросоли по МурасигеСкуга мезоинозит -100 мг/л, тиамин - 1 мг/л,никотиновая кислота - 0,5 мг/л, пиридоксин - 0,5 мг/л,аскорбиновая кислота 2 мг/л,6 бензиламинопурин - 0,5 мг/л, сахароза - 3- г/л, агар 6,5 г /л, затем дополнительно вносили 10 мг/л аминокислоты пролин. Введенные экспланты культивировали на данной среде при температуре 20-25 и 16 часовом световом режиме до активной регенерации с добавлением аммония азотнокислого- 413 мг/л и калия азотнокислого - 475 мг/л, и после формирования микропобегов их пересаживали на свежую питательную среду каждые две недели. После формирования микропобегов размером от 1 см и выше их пересаживали на питательную среду для размножения, содержащую макро- и микросоли по Мурасиге-Скуга за исключением аммония азотнокислого -825 мг/л и калия азотнокислого - 950 мг/л, мезоинозит -100 мг/л, тиамин - 1 мг/л,никотиновая кислота - 0,5 мг/л, пиридоксин - 0,5 мг/л,аскорбиновая кислота 1 мг/л,6 бензиламинопурин - 1,0 -2,0 мг/л, сахароза - 3- г/л,агар- 6,5 г /л и культивировали в течение шести месяцев, далее пересаживали на среду для укоренения (таблица). Таблица Влияние аминокислоты пролин и концентрации азотсодержащих соединений на активность регенерации и размножения АпортаКлон Апорта Длина побега через 2 месяца Коэффициент размножения к 6 культивирования, см пассажу 43-413 мг/л 43 -825 мг/л 3 - 950 мг/л 3 - 475 мг/л пролин 10 мг/л 1,5-2,0 115 2,0-2,5 128 1,8-2,0 120 2,5-3,0 122 2,0-2,5 123 Длина побега через 2 месяца Коэффициент размножения к 6 культивирования, см пассажу 43-413 мг/л 43 -825 мг/л 3 - 950 мг/л 3 - 475 мг/л пролин 10 мг/л Контроль без пролина, 431,0-1,5 18 1650 мг/л 3- 1900 мг/л (по прописи Мурасиге- Скуга) Прототип 119 Технический результат достигается тем, что регенерация эксплантов и коэффициент размножения увеличились более чем в 2 раза по сравнению с контролем и на 3 побега больше сформировалось на 1 эксплант по сравнению с прототипом ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ увеличения активности регенерации и размножения яблони рта Апорт,включающий выращивание яблони сорта Апорт на среде Мурасиге - Скуга, отличающийся тем, что дополнительно вводят 10 мг/л аминокислоты пролин и культивируют экспланты на данной среде при температуре 20-25 и 16 часовом световом режиме до активной регенерации и формирования микропобегов размером от 1 см и выше, которые затем пересаживают для размножения на питательную среду, содержащую макро и микросоли по Мурасиге-Скуга, причем на этане регенерации содержание аммония азотнокислого составляло 413 мг/л и калия азотнокислого 475 мг/л,а на этапе пролиферации - соответственно 825 мг/л и 950 мг/л, затем культивируют в течение шести месяцев с последующей пересадкой микропобегов на среду для укоренения.