Способ увеличения приживаемости эксплантов яблони сорта Апорт при введении в культуру тканей

КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Изобретение относится к сельскому хозяйству,в частности - плодоводству, может быть использовано в питомниководстве для размножения отобранных клонов Апорта. Задачей изобретения является увеличение выхода эксплантов яблони сорта Апорт на этапе введения в культуру тканей при клональном микроразмножении за счет снижения ферментативной окислительной деятельности. Технический результат достигается тем, что приживаемость эксплантов увеличивается в 2,8 раза,и не требуется каждодневной пересадки в течение 23 недель из-за того, что растительные почки перед введением в культуру тканей обрабатывали 0,1 яблочным уксусом в течение 1 часа, стерилизовали,вводили в культуру тканей и выдерживали 2 недели при температуре 4 в холодильнике, после чего побеги культивировали при 16 часовом световом режиме и температурой 20-25 на питательной среде Мурасиге-Скуга до активной регенерации эксплантов.(72) Долгих Светлана Георгиевна Исин Магжан Малгеждарович Избасаров Дуйсебай Сайлаубаевич Сагитов Абай Оразович Копжасаров Бакыт Кенжекожаевич(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский институт защиты и карантина растений Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский институт плодоводства и виноградарства(56) Вечерко Н.А., Ромаданова Н.В., Жумабеков Е.Ж. Сохранение биоразнообразия яблони методом культуры тканей /Международная конференция Биология клеток растений(54) СПОСОБ УВЕЛИЧЕНИЯ ПРИЖИВАЕМОСТИ ЭКСПЛАНТОВ ЯБЛОНИ СОРТА АПОРТ ПРИ ВВЕДЕНИИ В КУЛЬТУРУ ТКАНЕЙ Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности плодоводству. Может быть использовано в питомниководстве для размножения отобранных клонов Апорта. Основной сложностью технологии на первом этапе клонального микроразмножения яблони сорта Апорт является ингибирование ростовых процессов экспланта токсическими веществами, выделяемыми им в питательную среду. В результате травмы,полученной эксплантом при изолировании,последний испытывает сильный стресс,активизируются фермент окисляющие фенолы растений. Продукты окисления фенолов хиноны подавляют деление и рост клеток экспланта,наблюдается потемнение растительных тканей и питательной среды. Для снижения окислительной активности ферментов в питательные среды вводят антиоксиданты аскорбиновую кислоту, глютатион,дитиотриэтол,диэтилдитиокарбамат натрия(ДИЕКА), поливинилпорролидол (Муромцев Г.С.,Бутенко Р.Г., Тихоненко Т.И., Прокофьев М.И. Основы сельскохозяйственной биотехнологии.М.ВО.- Агропромиздат.-1990.- с. 221-222). Недостатком данного способа является включение антиоксидантов в состав питательных сред, однако окисление фенолов происходит при механическом изолировании эксплантов и контакте их с кислородом воздуха до их посадки на питательную среду, что снижает приживаемость эксплантов и их регенерацию. Прототипом заявленного способа является способ выращивания яблони сорта Апорт на среде Мурасиге -Скуга с содержанием сока чеснока и ежедневными пересадками в течение 2-3 недель введенных эксплантов на свежую питательную среду для снятия фенольного окисления (Вечерко Н.А., Ромаданова Н.В., Жумабеков Е.Ж. Сохранение биоразнообразия яблони методом культуры тканей /международная конференция Биология клеток растенийи биотехнология.- Звенигород.- 812 сентября 2008 г.- с.70). Недостатком данного способа является высокая трудоемкость и затраты на питательные среды при каждодневной пересадке эксплантов течение 2-3 недель на этапе введения эксплантов в культуру тканей при клональном микроразмножении Апорта. Задачей изобретения является увеличение выхода эксплантов на этапе введения в культуру тканей за счет снижения ферментативной окислительной деятельности. Это достигается тем, что для увеличения выхода эксплантов исходные побеги отобранных клонов сорта яблони Апорт перед стерилизацией замачивались в растворе 0,1 яблочного уксуса в течение 1 часа. Способ осуществляется следующим образом. Растительную ткань стерилизовали сначала мыли мылом с содержанием триклозана (5 раз) и обрабатывали разведенным 110 раствором Белизна в течение 5 минут, после чего 3 раза промывали стерильной водой по 15 мин. каждый раз. Далее из стерильных почек изолировались экспланты и вводились в культуру тканей на питательную среду, содержащую макро и микросоли по Мурасиге-Скуга. Введенные экспланты в культуру тканей выдерживали при температуре 4 в холодильнике в течение двух недель. После хладотерапии экспланты культивировали на данной среде при температуре 20-25 и 16 часовом световом режиме до активной регенерации и формирования микропобегов. Предложенный способ в 2,8 раза эффективнее контроля и не требует каждодневной пересадки в течение 2-3 недель (табл. 1). Таблица 1 Влияние антиоксидантов на приживаемость эксплантов клонов Апорта Антиоксиданты Приживаемость,Клоны Апорта Иссык, старый Иссык, молодой Помсад, 6-8 Помсад, 5-8 сад сад яблочный уксус, 0,175 85 80 87 ДИЕКА, 1 г/л 70 82 75 80 Контроль без 20 35 34 30 обработки Технический результат достигается тем, что приживаемость эксплантов увеличивается в 2,8 раза,и не требуется каждодневной пересадки в течение 23 недель. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ увеличения приживаемости эксплантов яблони сорта Апорт на среде Мурасиге-Скуга при введении в культуру тканей, отличающийся тем,что растительные почки перед введением в культуру тканей обрабатывают 0,1 яблочным уксусом в течение 1 часа, стерилизуют, вводят в культуру тканей и выдерживают 2 недели при температуре 4 в холодильнике, после чего побеги культивируют при 16 часовом световом режиме и температурой 20-25 на питательной среде Мурасиге-Скуга до активной регенерации.