Питательная среда для ускоренного культивирования микобактерий туберкулеза животных

(51) 12 1/04 (2011.01) 12 1/02 (2011.01) 12 1/20 (2011.01) 12 1/38 (2011.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в ускорении роста микобактерии туберкулеза животных. Питательная среда для культивирования микобактерии туберкулеза животных включающая питательную основу, она содержит сухой ферментативный пептон, агар микробиологический,натрий углекислый, картофельный крахмал, кальций хлористый,воду дистиллированную и дополнительно раствор инфезола при следующем соотношении компонентов, мас.сухой ферментативный пептон 0,6-0,8 агар микробиологический 1,3-1,5 натрий углекислый 0,06-0,08 картофельный крахмал 1,56-1,58 кальций хлористый 0,013-0,015 инфезол 14-16(72) Жмаш Аманжол Слмгерейлы Карабекова Сауле Серикбаевна Мухамедиева Маржан Нурлановна Шаймбетова Айнаш ожахметызы(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(56) Предварительный патент РК 14202, кл. 12 1/20, 12 1/32, 2004(54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ УСКОРЕННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА ЖИВОТНЫХ(57) Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и биотехнологии, и может быть использовано для ускоренного культивирования микобактерии туберкулеза животных. Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и биотехнологии, и может быть использовано для ускоренного культивирования микобактерии туберкулеза животных. Известна питательная среда для культивирования микобактерии туберкулеза животных, включающая питательную основу Предварительный патент Республики Казахстан 14202, кл. С 12 1/20, С 12 1/32, 2004 г Недостатком известной питательной среды является е низкая способность к ускоренному росту микобактерии. Задачей изобретения является создание новой питательной среды, позволяющей в короткие сроки вырастить микобактерии туберкулеза. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в ускорении роста микобактерии туберкулеза животных. Питательная среда для культивирования микобактерии туберкулеза животных, включающая питательную основу, она содержит сухой ферментативный пептон, агар микробиологический,натрий углекислый, картофельный крахмал, кальций хлористый, воду дистилированную и дополнительно раствор инфезола при следующем соотношении компонентов, мас. сухой ферментативный пептон 0,6-0,8 агар микробиологический 0,4-2,4 натрий углекислый 0,006-0,008 картофельный крахмал 1,47-1,67 кальций хлористый 0,013-0,015 инфезол 14-16(4 раствор) вода дистиллированная остальное Инфезол - 4 раствор с высокой биологической активностью, в одном литре которого содержится-аланина 4,00 г Глицина 7,00 г-аргинина 4,55 г-аспарагиновой кислоты 2,00 г-глутаминовой кислоты 5,00 г-гистидина 1,35 г-изолейцина 2,10 г-лизина г/х (соответ. 2,00 глизина) 2,50 г-метионина 1,75 г-лейцина 2,75 г-фенилаланина 3,15 г-треонина 1,60 г-триптофана 0,50 г-валина 2,25 г Ксилитола 50,00 г Натрия ацетата 3 Н 2 О 3,40 г Калия хлорида 1,86 г Магния хлорида 6 Н 2 О 0,51 г Натрия гидроокиси 0,60 г Натрия дисульфита (соот. 12,5 мг О 2) 0,02 г Калия 25,0 ммоль Натрия 40,2 ммоль Магния 2,5 ммоль Хлорида 43,6 ммоль Ацетата 25,0 ммоль 2 Значение Рн Титруемая кислотность(в пересчете на значение рН крови) Содержание энергии (общее) 1551,0 кДж/л Общий азот 6,3 г/л Вода для инъекций до 1000 мл Пример 1. Состав питательной среды используют для ускоренного культивирования микобактерии туберкулеза животных при следующем соотношении компонентов сухой ферментативный пептон 0,60 агар микробиологический 0,4 натрий углекислый 0,006 картофельный крахмал 1,47 кальций хлористый 0,013 инфезол 14,00 При этом массовое соотношение стимулятора роста и питательной среды составляет соответственно 121. Рост микобактерии наблюдают на 6 сутки. Пример 2. Состав питательной среды используют для ускоренного культивирования микобактерии туберкулеза животных так же, как и в примере 1, при соотношении компонентов сухой ферментативный пептон 0,70 агар микробиологический 1,40 натрий углекислый 0,007) картофельный крахмал 1,57 кальций хлористый 0,01 инфезол(4 раствор) 15,00 вода дистиллированная остальное При этом массовое соотношение стимулятора роста и питательной среды составляет соответственно 121. Рост микобактерии наблюдают на 4 сутки. Пример 3. Состав питательной среды используют для ускоренного культивирования микобактерии туберкулеза животных так же, как и в примере 1, при соотношении компонентов сухой ферментативный пептон 0,80 агар микробиологический 2,40 натрий углекислый 0,01 картофельный крахмал 1,67 кальций хлористый 0,02 инфезол(4 раствор) 16,00 вода дистиллированная остальное При этом массовое соотношение стимулятора роста и питательной среды составляет соответственно 121. Рост микобактерии наблюдают на 5 сутки, таким образом, наиболее приемлемым является рост микобактерии в примере 2. Пример 4. Для приготовления питательной среды берут 7,0 г сухого ферментативного пептона, 1,4 г агар микробиологический, 0,07 г натрий углекислый, 25309 1,57 г картофельный крахмал, 0014 г кальций хлористый. В колбе все компоненты тщательно перемешивают и добавляют 15,0 см 3 инфезола (4 раствор). Полученную смесь вновь тщательно перемешивают ставят на водяную баню при температуре 80 С, до полного его растворения,затем постепенно добавляют 82,0 см 3 дистиллированной воды и устанавливают рН 7,0-7,2,далее полученную питательную среду стерилизуют при 121 С в течение 15 мин. После чего добавляют стимулятор роста микобактерии в соотношении 121. Полученную незастывщую питательную среду для ускоренного выращивания микобактерии разливают в стерильных условиях в стерильные чашки Петри в объеме, обеспечивающий слой среды 4,0-5,0 мм, дают среде остыть и зафиксироваться. Затем питательную среду для проверки стерильности помешают на 48 ч в термостат при температуре 80 С. Для прижизненной диагностики берут 1,0 см 3 сыворотки животных, реагирующих на туберкулин и 1,0 см 3 стимулятора роста в массовом соотношении 11. Смесь инкубируют в термостате в течение 48 ч при температуре 36-38 С. Для посмертной диагностики берут путем посева лимфатических узлов, внутренних органов и тканей. Отобранный патологический материал просматривают,отмывают стерильной дистиллированной водой, поверхность прижигают нагретым шпателем, отбор пробы проводят из более глубоких слоев, путем вырезания небольших фрагментов тканей или органов, подвергших патологическим изменениям. В ступку насыпают песок и вносят разрезанные ножницами биоматериалы размером 0,2-0,5 см 3,наливают 5,0 раствор щавелевой кислоты и оставляют на 15-20 мин. После чего сливают раствор щавелевой кислоты оставшийся материал размельчают пестиком до однородной массы, затем дважды отмывают в физиологическом растворе и тщательно перемешивают. Из полученной смеси берут 1,0 см 3 суспензии в гепаринизированные стерильные шприцы,затем дополнительно набирают в шприц 1,0 см 3 стимулятора роста микобактерии туберкулеза. Оба компонента вновь тщательно перемешивают и помещают в термостат при температуре 37 С на 48 час. Через 48 ч смесь сыворотки и суспензии от биоматериала со стимулятором роста высевают на питательную среду в объеме 1,0 см 3 шприцом путем розлива по поверхности питательной среды, с тем,чтобы смесь сыворотки стимулятора роста полостью покрывала поверхность питательной среды. После посева чашки Петри со средой и посевным материалом заклеивают скотчем, не переворачивая,помещают в термостат крышками вверх. Посев на питательной среде в чашках Петри выдерживают в термостате при температуре 36-38 С в течение 4 сут. Первичный рост микобактерии туберкулеза появляется через 2 - 5 сут. Используемая питательная среда для ускоренного выращивания микобактерии туберкулеза животных позволит значительно ускорить получение культуры микобактерии более чем в 15 раз. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Питательная среда для ускоренного культивирования микобактерий туберкулеза животных, включающая питательную основу,отличающаяся тем, что она в качестве питательной основы содержит сухой ферментативный пептон,агар микробиологический, натрий углекислый,картофельный крахмал, кальций хлористый, воду дистиллированную и дополнительно инфезол (4 раствор) при следующем соотношении компонентов, мас.