Питательная среда для ускоренного культивирования микобактерий туберкулеза животных

(51) 12 1/04 (2010.01) 12 1/02 (2010.01) 12 1/20 (2010.01) 12 1/38 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в ускорении роста микобактерий туберкулеза животных и сокращении срока получения культуральной массы. Питательная среда для культивирования микобактерий туберкулеза животных включающая питательную основу, она содержит сухой ферментативный пептон,агар-агар,натрий углекислый, картофельный крахмал, кальций хлористый,воду дистиллированную и дополнительно стимулятор роста микобактерий при следующем соотношении компонентов, мас. сухой ферментативный пептон 0,4-0,6 агар-агар 0,6-2,6 натрий углекислый 0,014-0,016 картофельный крахмал 1,36-1,38 кальций хлористый 0,011-0,013 стимулятор роста микобактерий 9-11 натрий углекислый, картофельный крахмал, кальций хлористый,воду дистиллированную и дополнительно стимулятор роста микобактерий при следующем соотношении компонентов, мас. сухой ферментативный пептон 0,4-0,6 агар-агар 0,6-2,6 натрий углекислый 0,014-0,016 картофельный крахмал 1,36-1,38 кальций хлористый 0,011 -0,013 стимулятор роста 9-11 вода дистиллированная остальное Стимулятор роста микобактерий туберкулеза животных состоит из сахарозы,натрия двууглекислого, смеси пирувата натрия, спирта ректифицированного и воды дистиллированной. Пример 1. Состав питательной среды используют для ускоренного культивирования микобактерий туберкулеза животных при следующем соотношении компонентов сухой ферментативный пептон 0,4 агар-агар 0,6 натрий углекислый 0,014 картофельный крахмал 1,36 кальций хлористый 0,001(72) Жмаш Аманжол Слмгерейлы Карабекова Сауле Серикбаевна Абдрахманов Ринат Габдуллинович Шаймбетова Айнаш ожахметызы(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(56) Предварительный патент РК 14202, кл. 12 1/20, 12 1/32, 2004(54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ УСКОРЕННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА ЖИВОТНЫХ(57) Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и биотехнологии, и может быть использовано для ускоренного культивирования микобактерий туберкулеза животных. вода дистиллированная остальное. Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и биотехнологии, и может быть использовано для ускоренного культивирования микобактерий туберкулеза животных. Известна питательная среда для культивирования микобактерий туберкулеза животных, включающая питательную основу Предварительный патент Республики Казахстан 14202, кл. С 12 1/20, С 12 1/32, 2004 г Недостатком известной питательной среды является е низкая способность к ускоренному росту микобактерий. Задачей изобретения является создание новой питательной среды, позволяющей в короткие сроки вырастить микобактерий туберкулеза. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в ускорении роста микобактерий туберкулеза животных и сокращения срока получения культуральной массы. Питательная среда для культивирования микобактерий туберкулеза животных, включающая питательную основу, она содержит сухой ферментативный пептон, агар микробиологический, 23984 стимулятор роста микобактерий 9,вода дистиллированная остальное При этом массовое соотношение стимулятора роста и питательной среды составляет соответственно 120. Рост микобактерий наблюдают на 6 сутки. Пример 2. Состав питательной среды используют для ускоренного культивирования микобактерий туберкулеза животных так же, как и в примере 1, при соотношении компонентов сухой ферментативный пептон 0,5 агар-агар 0,7 натрий углекислый 0,016 картофельный крахмал 1,37 кальций хлористый 10 стимулятор роста 10,00 вода дистиллированная остальное При этом массовое соотношение стимулятора роста и питательной среды составляет соответственно 120. Рост микобактерий наблюдают на 4 сутки. Пример 3. Состав питательной среды используют для ускоренного культивирования микобактерий туберкулеза животных так же, как и в примере 1, при соотношении компонентов сухой ферментативный пептон 0,6 агар-агар 0,8 натрий углекислый 0,017 картофельный крахмал 1,38 кальций хлористый 0,013 стимулятор роста микобактерий 11,0 вода дистиллированная остальное При этом массовое соотношение стимулятора роста и питательной среды составляет соответственно 120. Рост микобактерий наблюдают на 5 сутки, таким образом, наиболее приемлемым является рост микобактерий в примере 2. Пример 4. Для приготовления питательной среды берут 5,0 г сухого ферментативного пептона,1,5 г агар-агара, 0,015 г натрий углекислый, 1,37 г картофельный крахмал, 0012 г кальций хлористый. В колбе вес компоненты тщательно перемешивают и добавляют 18,0 см 3 стимулятора роста микобактерий. Полученную смесь вновь тщательно перемешивают ставят на водяную баню при температуре 80 С, до полного его растворения,затем постепенно добавляют 82,0 см 3 дистиллированной воды и устанавливают рН 7,0-7,2,далее полученную питательную среду стерилизуют при 121 С в течение 15 мин. После чего добавляют стимулятор роста микобактерий в соотношении 120. Полученную незастывшую питательную среду для ускоренного выращивании микобактерий разливают в стерильных условиях в стерильные чашки Петри в объеме, обеспечивающий слой среды 4,0-5,0 мм, дают среде остыть и зафиксироваться. Затем питательную среду для проверки стерильности помешают на 48 ч в термостат при температуре 80 С. Для прижизненной диагностики берут 1,0 см сыворотки животных, реагирующих на туберкулин и 1,0 см 3 стимулятора роста в массовом соотношении 11. Смесь инкубируют в термостате в течение 48 ч при температуре 36-38 С. Для посмертной диагностики берут путем посева, лимфатических узлов, внутренних органов и тканей. Отобранный патологический материал просматривают,отмывают стерильной дистиллированной водой, поверхность прижигают нагретым шпателем, отбор пробы проводят из более глубоких слоев, путем вырезания небольших фрагментов тканей или органов, подвергших патологическим изменениям. В ступку насыпают песок и вносят разрезанные ножницами биоматериалы размером 0,2-0,5 см 3 ,наливают 5,0 раствор щавелевой кислоты и оставляют на 15-20 мин. После чего сливают раствор щавелевой кислоты б оставшийся материал размельчают пестиком до однородной массы, затем дважды отмывают в физиологическом растворе и тщательно перемешивают. Из полученной смеси берут 1,0 см 3 суспензии в гепаринизированные стерильные шприцы,затем дополнительно набирают в шприц 1,0 см 3 стимулятора роста микобактерий туберкулеза. Оба компонента вновь тщательно перемешивают и помещают в термостат при температуре 37 С на 48 час. Через 48 ч смесь сыворотки и суспензии от биоматериала со стимулятором роста высевают на питательную среду в объеме 1,0 см 3 шприцом путем розлива по поверхности питательной среды, с тем,чтобы смесь сыворотки стимулятора роста полостью покрывала поверхность питательной среды. После посева чашки Петри со средой и посевным материалом заклеивают скотчем, не переворачивая, помешают в термостат крышками вверх. Посев на питательной среде в чашках Петри выдерживают в термостате при температуре 36-38 С в течение 4 сут. Первичный рост микобактерии туберкулеза появляется через 4-6 сут. Используемая питательная среда для ускоренного выращивания микобактерии туберкулеза животных позволит значительно ускорить получение культуры микобактерий более чем в 15 раз. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Питательная среда для ускоренного культивирования микобактерий туберкулеза животных, включающая питательную основу,отличающаяся тем, что она в качестве питательной основы содержит сухой ферментативный пептон,агар-агар, натрий углекислый, картофельный крахмал,кальций хлористый,воду дистиллированную и дополнительно стимулятор роста микобактерий при следующем соотношении компонентов, мас. 23984 сухой ферментативный пептон агар-агар натрий углекислый картофельный крахмал кальций хлористый стимулятор роста вода дистиллированная