Штамм вируса оспы птиц “кп-4″ № 0275 (казниви), используемый для изготовления вакцинного препарата

(51) 12 7/00 (2006.01) 61 39/00 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ чего изготавливаемый из такой биомассы культурального вируса вакцинный препарат содержит сравнительно малое количество иммунизирующих доз в единице объема. Задачей изобретения является получение штамма вируса оспы птиц, пригодного для получения активной биомассы культурального вируса позволяющей изготавливать вакцину с высокой биологической активностью. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в получении штамма вируса оспы птиц, пригодного для изготовления эффективной и повышенным количеством иммунизирующих в единице объема живой сухой вакцины против оспы. Штамм вируса оспы птиц КП-40275(КазНИВИ),используемый для накопления биомассы возбудителя получают путем репродукции его в первичной монослойной культуре фибробластов, свободных от патогенных микроорганизмов куриных эмбрионов. Указанный штамм вируса оспы птиц депонирован в лаборатории Музей культур микроорганизмов Товарищества с ограниченной ответственностью Научно - исследовательский институт ветеринарии.(72) Кутумбетов Леспек Бекболатович Кульбаева Камила Рустемовна(56) Гуненков В.В., Чистова З.Я., Кузнецов Г.Д, и др. Свойства сухой культуральной вакцины ВГНКИ против оспы птиц. Ветеринария, 1991, с. 22-24(54) ШТАММ ВИРУСА ОСПЫ ПТИЦ КП-40275 (КАЗНИВИ), ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИННОГО ПРЕПАРАТА(57) Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и может быть использовано при изготовлении биопрепаратов для профилактики оспы птиц. Известен аттенуированный штамм К вируса оспы птиц, применяемый для изготовления вакцины против оспы птиц Гуненков В.В, Чистова З.Я.,Кузнецов Г.Д. и др. Свойства сухой культуральной вакцины ВГНКИ против оспы птиц//Ветеринария. 1991. - 6. - с. 22-24. Недостатком данного штамма вируса является то, что он недостаточно активно репродуцируется в культуре фибробластов эмбрионов кур и вследствие 21220 Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и может быть использовано при изготовлении биопрепаратов для профилактики оспы птиц. Известен аттенуированный штамм К вируса оспы птиц, применяемый для изготовления вакцины против оспы птиц Гуненков В.В, Чистова З.Я.,Кузнецов Г.Д. и др. Свойства сухой культуральной вакцины ВГНКИ против оспы птиц//Ветеринария.1991. - 6. - с. 22-24. Недостатом данного штамма вируса является то,что он недостаточно активно репродуцируется в культуре фибробластов эмбрионов кур и вследствие чего изготавливаемый из такой биомассы культурального вируса вакцинный препарат содержит сравнительно малое количество иммунизирующих доз в единице объема. Задачей изобретения является получение штамма вируса оспы птиц, пригодного для получения активной биомассы культурального вируса позволяющей изготавливать вакцину с высокой биологической активностью. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в получении штамма вируса оспы птиц, пригодного для изготовления эффективной и повышенным количеством иммунизирующих в единице объема живой сухой вакцины против оспы. Штамм вируса оспы птиц КГТ-40275(КазНИВИ),используемый для накопления биомассы возбудителя получают путем репродукции его в первичной монослойной культуре фибробластов, свободных от патогенных микроорганизмов куриных эмбрионов. Указанный штамм вируса оспы птиц депонирован в лаборатории Музей культур микроорганизмов Товарищества с ограниченной ответственностью Научно- исследовательский институт ветеринарии. Штамм вируса оспы птиц КП -40275(КазНИВИ) Штамм получен из лабораторного куриного вируса оспы выделенного от больной курицы с клиническими признаками заболевания и аттенуированного множественными пассажами в культуре клеток путем селекции крупнобляшечных клонов и адаптации в культуре фибробластов,приготовленных из свободных от патогенной микрофлоры эмбрионов кур. Полученный штамм характеризуется следующими признаками. Назначение штамма штамм вируса оспы птиц КП-40275 (КазНИВИ) не патогенен по отношению к естественно восприимчивой птице и обладает высокой репродуктивностью в культуре фибробластов куриных эмбрионов,которая способствует накоплению вирионов вируса в повышенных концентрациях в единице объема культуральной суспензии. Высокие концентрации вируса в культуральной суспензии обуславливают возможность получения из них вакцинных препаратов с высокими иммунобиологическими 2 параметрами и повышенным содержанием иммунизирующих доз в единице объема. Состав среды и условия культивирования для получения монослойной культуры клеток фибробластов куриных эмбрионов используют ростовую среду содержащую 90 среды ИГЛАМЕМ и 10 сыворотки крови крупного рогатого скота, для культивирования вируса на этой культуре клеток в составе данной среды уменьшают концентрацию сыворотки крови до 5. Культивирование фибробластов и вируса в них осуществляют при температуре 37-38 С. Морфологические признаки. Вирус оспы птиц относится к семейству , роду ,имеет липопротеидную оболочку, размер вирионов вируса в пределах 390 х 280 х 200 нм. Штамм вируса оспы птиц КП-4 0275(КазНИВИ) обладает морфологическими признаками, свойственными для возбудителя оспы птиц рода , семейства . Культуральные свойства. Штамм вируса оспы птиц КП-40275 (КазНИВИ) репродуцируется и накапливается в первичной культуре фибробластов свободных от патогенной микрофлоры эмбрионов кур в титре 104,5 ИД 50/0,01 см 3 и выше (инфекционная доза, вызывающая в месте внутрикожного введения узелковое поражение у 50 не иммунных к оспе кур старше 2-х месячного возраста). В указанных титрах штамм КП-40275 (КазНИВИ) в фибробластах накапливается после двукратного последовательного пассирования в них и при использовании множественности заражения вирусом равной 0,001-0,005 ИД 50/кл. Цитопатогенное действие вируса в монослое зараженных фибробластов куриных эмбрионов проявляется через 36 ч после инфицирования и охватывает более 80 его площади в период между 48 и 72 ч. Антигенные свойства. Штамм вируса оспы птиц КП-40275 (КазНИВИ) в организме привитых кур стимулирует образование вируснейтрализующих (2-5 2) и преципитирующих (1-3 2) антител. Патогенные свойства. Штамм вируса оспы птиц КП-40275 (КазНИВИ) не патогенный. У привитых внутрикожно путем прокола перепонки крыла двуигольным инъектором цыплят старше 30 суточного возраста не иммунных к оспе вызывает образование в месте инъекции оспенных узелков,которые проявляются на 7-9 сутки и заживают без каких либо последствий через 3-5 суток. Иммуногенные свойства. Штамм вируса оспы птиц КП-4(КазНИВИ) репродуцированный в культуре фибробластов куриных эмбрионов в дозе от 100 ИД 50 при внутрикожном введении путем прокола перепонки крыла у цыплят старше 30-суточного возраста вызывает напряженный иммунитет, который формируется на 7 сутки и продолжается в течение не менее 12 месяцев. Привитая птица полностью не восприимчива к вирулентному вирусу. Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штамма вируса оспы птиц КП-40275 (КазНИВИ) при 21220 культивировании в культуре фибробластов эмбрионов кур сохраняются в течение не менее 10 последовательных пасажей (срок наблюдения). Сохраняемость. Штамм вируса оспы птиц КП 40275 (КазНИВИ) в культуральной суспензии сохраняет свою исходную биологическую активность при температуре 41 С в течение 30 суток (срок наблюдения), при минус 18-20 С - 3 месяцев, а при минус 40 С - 6 месяцев (срок наблюдения). Лиофилизированный в смеси со стабилизирующей средой, содержащей пептон 4,сахарозу 5 и желатин 0,5-1,0, сохраняет биологическую активность при температуре 41 С в течение не менее 12 месяцев. Пример. Для приготовления вакцины против оспы птиц штамм 0275 КП-40275(КазНИВИ) репродуцируют в монослойной культуре фибробластов свободных от патогенной микрофлоры эмбрионов кур,выращенных стационарным способом в среде ИГЛА-,содержащей 10 сыворотки крови крупного рогатого скота. Для инфицирования используют клетки с полным плотным монослоем без каких либо дегенеративных изменений, полученным в течение 24-30 ч культивирования после первичной трипсинизации и высева фибробластов в сосуды. В культуральную жидкость монослойной культуры клеток в сосудах вносят заражающую вирусную суспензию в объеме, содержащем вирус в дозе 0,001-0,005 ИД 50/Кл и продолжают инкубировать культуру клеток в сосудах в течение до появления цитопатогенного действия, обычно этот срок составлял 24-30 ч. Из сосудов с зараженной культурой клеток удаляют ростовую питательную среду и вносят поддерживающую, содержащую в составе среду ИГЛА- и 5 сыворотки крови крупного рогатого скота. Культуру клеток с вирусом после замены питательной среды инкубируют при той же температуре еще в течение 42-60 ч, до развития цитопатогенного действия вируса в не менее чем 80 площади монослоя клеток. В период максимального развития цитопатогенного действия вируса культуру клеток в сосудах подвергают замораживанию при температуре минус 40 С в течение не менее чем 3 ч. Затем содержимое сосудов размораживают при комнатной температуре или при температуре 37 С при периодическом механическом встряхивании. Содержимое нескольких аналогичных сосудов объединяют и полученную культуральную суспензию подвергают испытанию на стерильность и биологическую активность. При отсутствии посторонних контаминантов микробиологического, микологического характера и наличии титра вируса в суспензии не ниже 104,0 ИД 50/0,01 см 3 биомассу вируса стабилизируют защитной средой, содержащей 4 пептона, 4 сахарозы и 1,0 желатина, путем смешивания их в равных объемных пропорциях. Полученную жидкую массу разливают во флаконы пенициллиновые или ампулы в дозе по 2,0 см 3 и подвергают сублимационному высушиванию. Полученную таким образом сухую форму вируса со стабилизатором используют в качестве вакцинного препарата и подвергают испытанию на иммунобиологические показатели. Испытанию подвергают три партии культурального вируса оспы птиц КП-40275(КазНИВИ) с титрами 105,0, 104,5 105,25 ИД 50/0,01 см 3,полученных при разных сериях культивирования. Образцы вакцины, приготовленные из этих вирусов,представляют собой таблеткообразную мелкопористую однородную сухую массу светлокремового цвета, которую заключают во флаконы. При проверке на стерильность микробиологические и микологические контаминанты не выявляются. Титр вируса в препарате, при титровании на цыплятах 30 суточного возраста, не иммунных к оспе птиц,составляют 104,50, 104,25 и 104,75 ИД 50/0,01 см 3. Цыплята, привитые внутрикожно вакциной из всех трех серий в дозе 100 ИД 50/гол и выше, при контрольном заражении вирулентным вирусом в дозе 1000 ИД 50/гол через 10-14 суток после вакцинации, оказываются полностью устойчивыми. У всех контрольных (не вакцинированные) цыплят в месте введения вирулентного вируса на 6-8 сутки образовываются оспенные узелки диаметром 1,52,0 см. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм вируса оспы птиц КП-40275(Музей культур микроорганизмов Товарищества с ограниченной ответственностью Научноисследовательский институт ветеринарии),используемый для изготовления вакцинного препарата.