Способ получения жидких пробиотиков для повышения их выживаемости при применении

(51) 61 31/00 (2006.01) 61 35/74 (2006.01) 12 1/20 (2006.01) 61 1/00 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ Сущность изобретения. В состав препарата дополнительно введены защитные компоненты,содержащие сахарозу 5-7 желатин 1,5-2,0 аскорбиновую кислоту 0,08-1,0 хлористый натрий 0,17-0,20 цистеин - 0,015-0,020 или 1-2 пищевых волокон. Техническим результатом является способ получения жидких пробиотиков с дополнительным введением в их состав защитных компонентов,содержащих сахарозу 5-7 желатин 1,5-2,0 аскорбиновую кислоту 0,08-1,0 хлористый натрий 0,17-0,20 цистеин - 0,015-0,020 или 1-2 пищевых волокон, превосходит прототип по устойчивости пробиотических бактерий к низкому значениюи желчи. При этом титр бактерий при 3 практически остается без изменений, а выживаемость в присутствии желчи повышается на 5-4 порядков, соответственно.(76) Саданов Аманкелди Курбанович Гаврилова Нина Николаевна Ратникова Ирина Александровна Бектурганов Нуралы Султанович(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЖИДКИХ ПРОБИОТИКОВ ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ ИХ ВЫЖИВАЕМОСТИ ПРИ ПРИМЕНЕНИИ(57) Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при производстве пробиотиков для медицины и ветеринарии. Задача изобретения - повышение выживаемости пробиотических бактерий при применении. Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для производства пробиотиков для медицины и ветеринарии. Эффективность пробиотиков зависит от многих факторов, одним из которых является их выживаемость при прохождении через верхние отделы желудочно-кишечного тракта. Резистентность бактерийных клеток к реактогенной среде желудка и верхних отделов кишечника является необходимым условием выживания пробиотических микроорганизмов. Разработка готовых форм, способствующих улучшению приживаемости пробиотических штаммов в кишечнике и усилению их функциональной активности является перспективным способом повышения эффективности пробиотических препаратов. Известен способ повышения выживаемости пробиотических бактерий при применении путем адаптации используемых штаммов к низким значениями желчи (Ху ю-, Изучение характеристик жизнеспособности рекомбинантного 393 в искусственных желудочнокишечных средах // . .- 2006.- 6.- С.423426 .Голод Н.А., Лойко Н.Г., Мулюкин .Л. и др. Адаптация молочнокислых бактерий к неблагоприятным для роста условиям // Прикладная биохимия и микробиология. - 2009.-Т.42. - 2. С. 317-335). Недостатком этого способа может быть нестабильность приобрететенных свойств у адаптированных штаммов. Задачей изобретения является повышение выживаемости пробиотических бактерий при применении. Задача изобретения достигается тем, что в жидкий пробиотик добавляют защитные компоненты, содержащие сахарозу 5-7 желатин 1,5-2,0 аскорбиновую кислоту 0,08-1,0 хлористый натрий 0,17-0,20 цистеин - 0,0150,020 или 1-2 пищевых волокон. При этом титр бактерий при 3 практически остается без изменений, а выживаемость в присутствии желчи повышается на 5-4 порядков, соответственно. Сущность изобретения подтверждается следующими примерами. Пример 1. При получении пробиотика плантафермин штаммы молочнокислых бактерий 2 и 27 выращивают в жидкой питательной средев течение 18 ч при 37 С. Затем в жидкий препарат добавляют защитные компоненты, содержащие сахарозу 7 желатин 1,5 аскорбиновую кислоту 0,08 хлористый натрий 0,17 цистеин 0,015 или 1 пищевых волокон. Контролем служит жидкая культура без добавок защитных компонентов. Эффективность защитных компонентов при применении устанавливают по выживаемости культур и их активности после инкубации при низком значении(подкисление культуры соляной кислотой до 3 и инкубация при температуре 37 С в течение часа с последующей нейтрализацией) и в присутствии в питательной среде желчи (добавление в культуры 3 желчи и инкубация при температуре 37 С в течение трех часов) в сравнении с контролем. Количество бактериальных клеток определяют путем высева культур из соответствующих разведений в чашки Петри на твердую питательную среду . Результаты представлены в таблице 1. Таблица 1 Влияние защитных компонентов на устойчивость к 3 и желчи бактерий,входящих в состав пробиотика плантафермин Защитные компоненты Величина титра Величина титра при(исходная), 3, КОЕ/мл КОЕ/мл Контроль 2,0109 1,9109 сахароза -7 желатин -1,5 аскорбиновая 2,9109 2,0109 кислота 0,08 хлористый натрий 0,17 цистеин - 0,015 1 пищевых волокон 4,0108 4,0108 Установлено, что бактерии, входящие в состав препарата плантафермин, устойчивы к рН 3 во всех вариантах опыта. Устойчивость к желчи у культур проявляется в большей степени в присутствии защитной среды, содержащей сахарозу, желатин,аскорбиновую кислоту, хлористый натрий и цистеин. При этом повышение выживаемости культур происходит на 5 порядков по сравнению с контролем. При введении в состав пробиотика пищевых волокон выживаемость культур в присутствии желчи повышается на 4 порядка по сравнению с контролем. Пример 2. Ассоциацию А, состоящую из культур.2 В и 14 д, .Б-3, . ,получают аналогично примеру 1. Результаты после воздействия на жидкий препарат 3 и желчи представлены в таблице 2. Таблица 2 Влияние защитных компонентов на устойчивость ассоциации А к 3 и желчи Защитные среды Величина титра при 3, КОЕ/мл 4,0109 5,0109 Как видно из представленной таблицы,культуры, входящие в состав ассоциации А, также устойчивы к 3 во всех вариантах опыта. К желчи,как и в первом примере, культуры более устойчивы при применении защитной среды, состоящей из сахарозы, желатина, аскорбиновой кислоты,хлористого натрия и цистеина. Таким образом установлено, что исследованные штаммы пробиотических бактерий устойчивы к 3. Устойчивость к желчи у штаммов повышает защитная среда, состоящая из сахарозы, желатина,аскорбиновой кислоты, хлористого натрия и цистеина на 5 порядков, пищевые волокна - на 4 порядка. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения жидких пробиотиков,включающий выращивание активных штаммов молочнокислых, пропионовокислых бактерий в жидкой питательной среде, отличающийся тем, что для повышения выживаемости при применении в их состав дополнительно вводят защитные компоненты, которые содержат сахарозу 5-7,желатин 1,5-2,0, аскорбиновую кислоту 0,08-1,0,хлористый натрий 0,17-0,20, цистеин 0,015-0,020 или 1-2 пищевых волокон.