Способ получения гонадотропина, обладающего активностью фолликулостимулирующего гормона из постменопаузной мочи (мочевого концентрата)

Настоящее изобретение относится к мочевому фолликуло стиыулирующему гормону, фармацевтическим конпозицияы,содерФолликулостимулирующий горнон (ФСГ), как известно,пригоден при лечении бесплодия.Препараты,содержащие данный гормон, используются для содействия в протекании беременности с использованием иетодов и дин/й и д) яко/га . Человеческий ФСГ выделен из гипофиза и постклимвктерической мочи человека.Совсем недавно ФСГ получен с использованием методик реномбинантной ДНК.Первый коммерческий доступный продуцтвключающий человеческий ФСГ содержал ЧМГ(например, Пергонал Л/ Сероно),то есть, человеческий иенопеувный гонадотропин, экстрагиром ваннй из постклииактеричесной мочи, представлящей собой смесь ФСГ, лютеинизирующего гормона (ЛГ) и других мочевых белков.Мецду тем были сделаны попытки получить чистые ФСГ- препараты как для научых, так и для терапевтических целей.Продукт Метропин/В / (Сероно) в настоящее время доступный в торговле, представляет собой препарат мочевого ФСГ содержащий другие мочевые белки, однако минимальные количества ЛГ и используется для лечения бесплодия.Приыенение данного продукта особенно благоприятно, когда невелательновводитьеквогенный ЛГ вместес ФСГ например, при синдроце поликистоза яичников (СПЯ).До сих пор введение ФСГ для терапевтических целей ооум ществляли и успешно, исключительно путем внутринншечои инъекции. Поскольку внутриишечные инъекции, как правило,осуществлят врачи или люди из чсла профессиональных медиков,пациенту приходится посещать хирургический кабинет или больницу регулярно с тем, чтобы получить лечение.Это соадает значительное неудобство.Кроме того, время, необходимое для осуществления данного типа введения лекарственных веществ,часто является причиной неудовольствия, выражаемого пациентами в связи с тем, что лечение обычно растягивается на Несколько недель или даже месяцев.Введение путем подкожной инъекции могло бы позволить осуществить самовведение пациентам и, следовательно, повым сить содействие и готовность пациентов в лечении.Подкожнсе введение человеческого менопаувного гонацотро пива (ЧМГ) уже было описано (Накамура Й . и др., Плодовитость и бесплодие, 46(1) отр.46-54, 1986 в связи с лечением женского бесплодия путем пульсирующего введения ЧМГ посредством подкожного перистальтического насоса.Подкожное введение может сопровождаться таким недостаткомкак местная аллергия,вследствие наличия примесей в используемом продукте, и,следовательно, может привести к приостановке лечения.П.Руз (Человеческий фолликулостимулирующий гсрон, дйуйъ гдмйииилаидя .94 д 2 дт 99 аоъ 13119 б 8) описал и охарактеризовал внсокоочищенные препараты гипофиэарных и мочевых ФСГ, полученные из замороженных гипофизов и из поотклимаитерического мочевого концентрата, соответственно. Биологические активности составляют около 14000 международныхединиц активности ФСГ на мг для гипофизарного ФСГ и 780 меж 4082 4дународных единиц активности ФСГ на мг для мочевого ФСГ.Содержание контанинации ЛГ в большинстве активных гипофизарных и мочевых препаратов, как ожидается, соответствует,приблиаительно,0,1 по массе. Методики очстки включают один или более таких способов, как хроматография на диэтиланиноэтилцеллюлозе, гельфильтрация на Сефадекс С 00,гидроксилапатитовая хроыатография, электрофорез в полиакриламидном геле и подобное.Один из наиболее очищенных препаратов ФСГ был описан Донини и др.(Очистка и частичное хиикочфкзическое исследование ФСГ из Нлимактерической Моим, Гонадотропины и Ничниковое развитие (Труды двух рабочих встреч), Е и С Лизингстон Эдинбург и Лондон 1970) и имел биологическую активность 1255,6 Международных единиц ФСГ на мг при контаминации ЛГ до 3,2 ыеждународных единиц ЛГ на мг.В данном слу чае исходным материалом являлся человеческий климактерический гонадотропин (ЧМГ) в виде препарата Пергонал /К /,который как указано выше, представляет собой смесь ФСГ и гормона ЛГ, а также других кочевых белков.Этот результат был достигнут периодической счетной исходного ЧМГ на диэтиламноэтилцеллюлозе с последующий хроматографией на колон не диэтиламиноетилцеллюловы, гельфильтрацией на Сефадекс С 100 и конечной стадией препаративного полианриламидного гельэлектрофореза.Даже более высокие активности были достигнуты Х.ван Холлом и др.(Очмстка и некоторые свойства человеческого мочевого ФСГ и ЛГ, Гонедотропины (ТРУДЫ 1-го международногопутем добавления стадий имунохроматографии и гелЬфильтрации к традиционному методу хроматографическое очистки.Иммуно кроматографию осуществляли с использованием антихориони ческий гонадотропин человека (антиХГЧ)- антителсвнзанныи с Сефарозой для специфической цели удаления активности ЛГ из частичо очщенны фракций ФСГ.Наиболее очищенная фракция ФСГ содершала 4720 международных единиц ФСГ на мг,и контаминация ЛГ составила всего 15 иекдународнык единиц ЛГ на мг, как испытано радиоимуноанализом. Иммунохроматогрефический подход уже описан Донини и др.0 чмстка и Выделение ФСГ И ЛГ из ЧКГ оЙЬ 71 ЪМдсл/ддййка ,б 2 стр.18 б-1981966) , которые еще в 1966 году получили препарат ФСГ ииеющй активность 329,7 международных единиц ФСГ на мг и биологически необнаруживаеме количества контаминации ЛТ. В другом эксперименте были получен активности фракций, составляющие значение 148,3 международных единиц ФСГ на мг и 2,4 мекдународных единиц ЛГ на мг.Поскольку никакого радиоимшуноанализа не было прое ведено относительно препарата с активностью 329,7 мецдуна родных единиц ФСГ на мг, можно предположить по аналогии с результатами Х.ван Хелла (см.выше),что при радкоиммуно анализе (РИА) могут быть обнаружен следовне количества ЛГ. Физиологическая релевантность даже минимальны количеств контаминации ЛГ была показана донини и др. в работе(Новый подход к Биологическому определению Лютеинизируюшего гормона, Жиг дйаглхгшухшщ 58 стр.4 бЗ-42 1968) ,где.предложено новое количественное определение биологичесм