Способ получения гербицида 51262

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности, к способу получения гербицидов, а именно - нового соединения,именуемого.как вещество В 51262,которое проявляет гербицидную активность и способность тормозить рост растений.Цель изобретения -получение нового более эффективного гербицидаСтруктура вещества Ю 51262 не выяснена в достаточной мере. Оно имеет следующие характеристикимаксимум поглощения выше 220 нм вводном растворе ИК-спектр для таблеткиКВг представлен на фиг. 2. Л Д ЯМР-спектр (ж, ррш) замерен на400 Мгц в тяжелой воде с использова нием тетраметилсилана в качестве внешнего эталона, (см.фиг.3)дЦветовые реакции полопительные для реакций с серной кислотой, анисальдегидом (серной кислотойи перманганатом каля).тонкослойная хроматография значение Ед 0,3 на пластине силикагеля Р 5715 (фирма Мерк Ко, проявление смесью 50102 по-объему этилацетата,изопропанола и воды.Способ полученя гербицида В 51262 заключается в следующем, Штамм актиномцета Зстерсощусеа Ьуатоасорйсиа(РЕКМВ-958)АПК 63584 культивируют в кидкой питательной среде при перемешивании и аэрации. Птателъная среда содержит источники углерода, азота, минеральные.соли. В качестве источника углерода могут быть использованы глюкоза, мальтора,сахароза, маннит мелассы, глицерин,декстрин, крахмал, соевое масло- и хлопковое масло из источников азота карахисовая, хлопковая мука,рыбная мука, экстракт кукурузы, пептон, мясной экстракт, прессованные дрожжи, дрожжевой экстракт, нитрат натрия, аммонняили сульфат аммония,из солей - хлористый натрий, фосфаты, карбонат кальцмя и, при необходимости, соли металлов в виде микроэлементов. В процессе культивирования в жидкой среде можно использовать противовспениватели, такие как силиконовое, растительное масла или подходящие ПАВ.Культивирование проводят при нейтральной рН и температуре 24-38 С,наиболее предпочтительно при температуре около 28 С.Продуцирование вещества Ю 51262 в процессе культивирования контролируют путем оценки ннгибирующей активности культуральной кидкостн по отношению к чувствительным видам растений, таким как Вкавайса Кара (Ь) уаг. Кошасзцпа(Комацуна).Наибольший вьосод вещества 1 Р 51262 наблюдается после культивирования в течение 60-120 ч. Однако этот период моет колебаться в зависимости от условий и методов культивирования,может быть приемлемым болеекороткий или более длительный период каждого. конкретного случая путем экспериментирования, с использованием подходя-А щмх методов контроля.Вещество Р 51262 растворимо в воде, выделяется, главным образом, в культуральную жидкость, н моет быть выделено путем удаления сухого вещества, включая ммцели, например фильтрованем, предпочтительно с нспольэованиен фильтровальных средств,таких как диатоммт или центрифугированием. Оно может быть затем выделено из отделенной жидкой части традиционимн методами на основе его специфических физико-химческих свойств н с последующей очисткой при необходимости..Вещество Ю 51262 отделяют от други продуктов с помощью адсорбента,либо адсорбированием примесей, либо адсорбированнем вещества Р 51262,либо адсорбнрованмем того и другого отдельно или вместе с последующим эпированмем вещества В 51262. Может использоваться широкий ассортимент адсорбентов в частности активированный угольсмолоподо 6 ные адс 0 Р 73 бенты, такие как Амберлит (зарегистрированный товарный знак) ХАВ-2,ХАВ-4 или ХАН-7 (производства фирмы Ром энд Хаас). и днайон (зарегистрированный товарный знак) НР 10,НР 20, СНР 20 Р или НР 50 (производства фирмы Мицубиси кеикл индастриз) Присутствующие в жидкой части приесн могут быть удалены пропусканием содержащего вещество Ю 51262 раствора через слой или колонку с одним или несколькими упомянутыми адсорбентами или адсорбированием вещества И 51262 на одном или несколькии адсорбентвх с последующим его элюированнем подходящим элюентом в частности смесью метанола ацетона или бутанола с водой.Полученное вещество В 51262 может быть дополнительно очищено различны ми средствами, например распредели тельнойхроматографией вколоике сислользоваиием целюлозного продукта, такого как Авицел (зарегистриро ванный товарный знак продукции фирмы АСХИ кемикл индастриз) или Сефадекс ЪН-20 (зарегистрированный товарнй знак продукциифирмы Фарма чдция, Швеция). Примеси, присутствующие в жидкой части, содержащей веще ство Р 51262, могут быть также уда лены ЗДСОРОИРОВЗНИЕМ ИХ на РЗЗЛИЧННкатионообме иных смолах (сильных или слабыи),таких какдауэкс 50 И(зарегистрнрованный товарный знак продукции фирмы дау кемикп)нли Амберлит 1 КС-50(зарегистрирований товарный знак продукции.фириы Ром энд Хаас) или же на анионобменной смоле, такой как дауэкс 1 или Диайон И А 10. дальнейшая очистка вещества РЗ 1262может быть осуществлена с помощью хроматографии с нспользованем силкагеля (при необходимости).Вещество Р 51262 проявляет гербицидную активность, а также способность тормозить рост растений. под гербицидной активностью имеется в виду то, что вещество подавляет рост растений и может, в конечном счете,привести к ни гибел. С другой стороны, под способностью тормозить рост растений имеется в- виду то, что вещество тормозит или подавляет рост растений, не давая таких признаков гербицидной активности, которые проявлялись бы в некрозе или гибели растений. Реакция растения на вещество(проявление гербицидиого эффекта ИЛИ ЭЦЭЕКТЗ торможения РОСТЗ) ОЛЕБ лется в зависимости от метода нанесения или применения, концентрации вещества В 51262 н чувствительности обработанного растения к веществу. Соединение проявляет гербицидную активность по отношению к различным сорнякам н применимо перед и после всходов. Гербицид может быть нанесен на листву растений. Вещество может тормозить рост растений, не вызывая их гибели. Оно пригодно для предотвращеня полегания рисовыи растений благодаря укорочению соломы рисового растения, для уменьшения продолительиости или частоты скашивания, пасынковании или обрезки благодаря торможению роста травянистыи и садовых растений, для обеспечения карликовости цветущих растений и т.п.Вещество Р 51262 может быть ирпользовано самостоятельно или в смеси с носителем й 7 илидобавками. Композиция может быть представлена в различных видах, например, может быть составлена в виде дуста, крупного порошка, гранул, микрогранул,смачиваемого порошка, водорастворимого порошка или жидкого препарата. Необязательно использовать совершенно чистую форму вещества Ю 51262, В СВЯЗИ С ЧЕМ ОЧНСТКЗ МОПЗТ бЫТЬ при остановлена на любой стадии, а результирующее сырое вещество может быть употреблено в качестве активного ингредиента композиции. Используемые в такой композиции носители могут быть синтетическим. или природным, органическим или неорганическим веществом, и их смешивают с соединением для облегчения храненя, транспортировки и обращения с активныи ингредиентом или же для того, чтобььспособствоватьмиг-ч раци активного ингредиента в расте 1 ние. В качестве твердым носителей могут быть использованы глина, тальк,диатомит, каолин, бентонит, карбонат кальция, гипс, синтетически осадеиный кремиезем, аттапульгит, цеолит или пемза, такие синтетические и натуральные смолы, как кумароновая смола, алкиднце смолы, полихлорвннил,сложиозфирная или ксантановая камедь,такие воски как карнаубский воск илиПарафинъ И дРУГИе органические мате 1147риалы, такие как ореховая скорлупа(например, грецдих и други орехов) или соевый порошок. В качестве жидких носителей используют воду и спирты,такие как метанол, этанол, изопропа нол или этиленгликоль.Композиция может содержать поверхностно-актнвное вещество (ПАВ), способствующее диспергированю, смачива-ч нию или распределено композиции. Анн онные ПАВ вводят в виде натриевой ицинаты натрия, натриевой, аммонмевой и аминовой соли полиЬкснэтиленалкил арилэфирсульфатов или полиоксиэтиленалкилэфирсульфатов или свободных кислот или солей попиоксизтиленалкиларилэфирфосфатов или полиоксиэтиленалкнлфосфатов, Из катионных ПАВ используют высшие алифатические амины н конденсаты окиси этилена с такими аминами как хлориды четвертичного ам н мония Ыалкияаминацетаты и М-алкил амноксиды. из амфотерных ПАВ испольИз неиоиогенныиПАВ вводят глицеридные и сахарозные сложне эфиры жирных кислот, конденсаты окиси этилена с высшим алифатическим спиртам,конденсаты окиси этилена с алкилфенолами или алкилнафтолами амды или этонсилированные амиды внсшх лирик кислот, высше пирнокислотные сложне эфиры сорбита или этоксилированныи сорбитов высшие жирнокислотне сложные эфиры глицеринборатов или этоксилированныи гпицеринборатов. И СОПОПИМЗРЫ ОКНСИ ЭТНПСНЗ С ОКНСБЮПРОПШТВНЗ о КОЬШОЗНЦИН МОГУТ СОДЕРЖЗТЬ защитНЪЗ КОЛЛОНДЗЛЬННО вещества, такие- как желатин, гумиарабикжазеин, поливинловы спирт или карбоксиметилщеллюлозу или загустители, такие как полфосфат натрия или бентонит. для расширена применимости и экономии трудовыкзатрат композиция может быть скомбинироваиа с фунгицидами, инсектицидами, другим гербицидами, регуляторами роста растений или удобрениямиИспользуемый штамм актиномцета идентифицирован по краткому определению бактерий Берги М., Мир, 1980,т. 2, Ассопошусееа.штамму присвоен Ю 8 АпК 63584. Он депонирован в инсти 6туте ферментационных исследований Агенства промышленной науки и техники Цинмстерства международной торговли и промышленности, Япония, где ему присвоен номер РЕВМ Р-8004, и повторно депонирован в Институте ферментационных исследований с присвоением номера РЕКИ ВР 958. 1 Штамм имеет следующие характернстики.Морфологические и культуральные признаки. . . Вегетативные гы штамма ЗАЫК 53584 растут хорошо, с ветвленем, на средах 15 Р при 28 С в течене 14 сут. При микроскопическом изучении на воздУшныи гифах наблщдаются простые ветвления. Цепочки спор представляют собой в основном замжнутую спираль.бородавчато-складчатая. Не наблюдается специальыи органов, таких как склероции фратментированные вегеративные гифи или спорангии.Воздупный мицелий увлажняется и чернеет в процессе культивированя. Растворими пигмент не продуцирует. В табл. 1 представлена характеристика роста н колонии штамма, полученных после кулътишнрования.в течение 14 ч при 28 С, на различны стандартныхФизиологические свойства Гидролнзует крахмал. Разжижает желатин. Восстанавливает нитрат. Молоки не коагулирует. Молоко лептоннзирует. Растет при температуре (среда 1) 11-д 6 С. Оптимальная температу ра роста (среда 1) 2 д 38 С. Растет на среде 1, содержащей 7 МаС 1, при содержании 102 роста нет. Разлагает казеин н тирозин. Не разлагает ксантин. Меланондный пигмент на средах 1, 3, 4 не образует. Меланоидного пигмента (среда 3) нет. Выработки меланондного пигмента (среда 4) нет. Используемые среды рсреда 1 агар на дролжевом и солодовом зкстрактах (15 Р 2) Среда 2 тритонодролке экстрактовыи бульон (18 1) Среда 3 пептоно-дролжевкстрактовый агар с железом (18 6) Среда 4 тирознновы агар (13 7). Использование нсточнков углероданэучалн применяя безальноагаровут Ь среду прндхэма-Готлиба после инкуба 714 сут. Поскольку утаим БАНК 63584 может расти, н базальной среде без введения дополнительного источникауглерода, довольно трудно точно опи. сать его способность использовать нс ТОЧНИКЪ УГЛЕРОДЗ. НИЖЕ ПОКЗЗ 8 НВ СТЕПЕНЬотносительного нспользоваииянсточнкон углерода.Вкачестве контроля использовали базальную среду, обозначено знаком. Отношене к источникам углерода В-глюкоза В-ФруктозаСтенки клеток штамма Зсгерсошусев Ьузговсорйсцв БАНК 63584 содержат ЪЪдиаминолимелтовую кислоту й глиции.-шусеввр. штамм ЗАНК 63584 ннокулнруют в четыре колбы Эрленмайера по 500 ми, каждая из которыи содержит 80 мл среды, имеющей следуюши состав, мас.2СВ 4 д 2, изготовля емый фирмой ниссанВода до рн 7,2Затем штамм культиируют на качалопри 220 об/мин в течение 72 чпри2 мп полученной культуры засева-. ют в 130 колб Зрленмайера по 500201,каждая из которых содержит 80 мл описанной среды, и культивируют на качалке при 220 об/мин в течение 96 ч при 28 С. Полученные купьтуральные бульоны н смывки.смешивают, в объеме 11,4 л, смешивают и добавляют 1 кг целита 545 (товарнй знак на продукцию фирмы Джона Юноши продактс - смесь фильтруют с получением 11 л фильтрата, имеющего рн 7,1. Затем фильтрат пропускают через хро 1147матографическую колонку, заполненную 3 кг активированного угля (продукт ПРОИЗВОДСТВЗ Фирм Веко пьюр кемиклз нндастриз) для дсорбирования вещества Р 51262. Колонку промывают 4,5 л деионзованной воды, а затем целевое вещество здюируют 15 л 1 О 1 ного (по объему) водного ацетона. 16 л активного элюата конденсируют упариванем при пониенном давлеии а затем лн 0 Фнэуют с получеием 61 г сырого порошка, содерпащего Целевое вещество В 51262. Полученный сырой порошок может быть использован как таковой для агрохимического употребления. ПЗатем сырой порошок адсорбируютиа хроматографической колонке, содерпащей 500 мл Авицела, который прелвврнтелно уравновешен ацето ШЦТРИЛОМ. ПОСЛЕ ЭТОГО КОЛОНКУ 3 ЛЮНРУ.ют 2 л ацетоннтрила, 3 лтраюи 972 ного (по объему) водного ацетонтри ла н 6 л 851-ного (по объему) ацетонтрнлз Злюат собирают фракциями по 1 л капдая. Установлено, что депевое вещество Р 51262 присутствует во фракцнк с 6-й по 9-ю. Эти фракции объединяют, конденсиРУЮТ Упернванемфипизуют с получением 4,6 г порошка. Порошок растворяют в небольшом количестве 502-ного (по объему) вод ного метанола и адсорбируют на Сефа-26 дексе ЬН-20 в колонке, которуюпред-7(по объему) водим метанолом. Колонку злюируют, используя 501-ыи (по объему) водыи метанол, злмат собирают фракциями по 15 мл. Фракции Р 36-50 содерат целевое вещество Р 51262, ни собирают, объединяют,конденсируют упариванием при поименном давленн и вновь пропускают че- д рез ту же колонку с Сефадексом ЬИ-20. Элированные фракци собн рашт и лиофилизуют, получают 334 г образца вещества Р 51262 чистотой около 702.300 мл этого образца адсорбируют в колонке с силикагелем, которую предварительно уравновешивают смесью 101 по объему хлороформа н метавола. Целевое вещество элюируют снесью 61 по объему хлороформа и мета-. нола и злюат собирают фракцияни ПО 15 мл. Фракции Р 22-60 собнраттд