Способ диагностики осложнений высокоактивной антиретровирусной терапии у детей с ВИЧ-инфекцией

(51) 01 33/483 (2006.01) 01 33/48 (2006.01) 01 33/49 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ прогнозирования (выявления) побочных эффектов антиретровирусной терапии у ВИЧинфицированных детей по изменению характера образования фации, изменению ее основных структурных компонентов, появлению аномальных образований и нарушению характера взаимодействия жидкой и плотной фаз исследуемой среды. Поставленная цель достигается тем, что,исследуя тезиограммы плазмы крови ВИЧинфицированных детей,получающих антиретровирусную терапию, выраженные побочные эффекты и необходимость патогенетической коррекции нарушений липидного обмена диагностируется при наличии плотных аморфных центральных областей, не содержащих трещин и имеющих творожистые гидрофобные включения,нарушений водно-солевого обмена и нефропатии при наличии крупных конкреций в краевой зоне и наличия почти прозрачных центральной или промежуточных зон, нарушения в белковом обмене,фосфорно-кальциевом обмене и наличия интоксикационного синдрома - при обнаружении грубых поперечных складчатых структур или,структур в виде петель, пчелиных сот, жгута в краевой зоне и отсутствия трещин в центральной зоне тезиограммы.(72) Тусупбекова Майда Масхаповна Кизатова Сауле Танзиловна Понамарева Ольга Анатольевна Клюев Дмитрий Анатольевич Тукбекова Бибигуль Толеубаевна(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Карагандинский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Республики Казахстан(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ОСЛОЖНЕНИЙ ВЫСОКОАКТИВНОЙ АНТИРЕТРОВИРУСНОЙ ТЕРАПИИ У ДЕТЕЙ С ВИЧ-ИНФЕКЦИЕЙ(57) Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, инфекционным болезням, биохимии. В предлагаемом способе впервые демонстрируется возможность использования принципа самоорганизации плазмы крови для Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, инфекционным болезням, биохимии и может применяться для прогнозирования побочных эффектов высокоактивной антиретровирусной терапии у детей с ВИЧ-инфекцией. Антиретровирусная терапия является эффективной этиотропной терапией ВИЧинфицированных детей. Известно, что наиболее тяжелыми побочными эффектами препаратов антиретровирусной терапии у ВИЧинфицированных детей являются нарушения углеводного и липидного обменов, лактоацидоз и остеопения. Наибольшее число побочных эффектов дают ингибиторы протеазы ВИЧ - ритонавир,невирапин и др. В настоящее время существуют способы прогнозирования (выявления) побочных эффектов высокоактивной антиретровирусной терапии у ВИЧинфицированных детей по определению биохимических показателей в плазме крови определение уровня холестерина, триглицеридов,глюкозы, липо-протеидов низкой плотности,амилазы ( ,,( .,,.,... 200976(10)1017-21). Недостатками этих методов является требование к забору достаточно большого объема крови(исследование показателей липидного и углеводного обменов), большое число ложноотрицательных результатов (определение лактата в крови). Задача изобретения разработка простого,дешевого и информативного способа прогнозирования побочных эффектов антиретровирусной терапии у ВИЧинфицированных детей. В предлагаемом способе впервые демонстрируется возможность использования принципа самоорганизации плазмы крови для прогнозирования (выявления) побочных эффектов антиретровирусной терапии у ВИЧинфицированных детей по изменению характера образования фации, изменению ее основных структурных компонентов, появлению аномальных образований и нарушению характера взаимодействия жидкой и плотной фаз исследуемой среды. Способ отличается тем,что,исследуя тезиограммы плазмы крови ВИЧ-инфицированных детей, получающих антиретровирусную терапию в виде комбинаций препаратов (стандартных схем лечения,содержащих нуклеозидные и ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы ВИЧ и ингибиторы протеазы ВИЧ),выраженные побочные эффекты и необходимость патогенетической коррекции нарушений липидного 2 обмена диагностируется при наличии плотных аморфных центральных областей, не содержащих трещин и имеющих творожистые гидрофобные включения, нарушений водно-солевого обмена и нефропатии - при наличии крупных конкреций в краевой зоне и наличия почти прозрачных центральной или промежуточных зон, нарушения в белковом обмене, фосфорно-кальциевом обмене и наличия интоксикационного синдрома - при обнаружении грубых поперечных складчатых структур или, структур в виде петель, пчелиных сот, жгута в краевой зоне и отсутствия трещин в центральной зоне тезиограммы. Способ осуществляется следующим образом. На обезжиренную твердую подложку (предметное стекло), расположенную строго горизонтально,наносят каплю плазмы крови объемом 0,5-1,0 мл,при этом диаметр капли составляет 15-25 мм. Каплю высушивают в стандартных условиях при минимальной подвижности окружающего воздуха. В процессе высыхания необходимо сохранять неподвижность капли. Продолжительность периода высыхания (до момента анализа структуры) составляет 18-24 ч. Полученные пленки (фации) предварительно изучают невооруженным глазом или с помощью лупы. Для более детального изучения и анализа структуры полученные фации рекомендуется изучать в проходящем свете при увеличении. В данном случае этот эффект достигался сканированием фаций и изучением полученных изображений на компьютере в системе 5.0 при частоте монитора не менее 85 Гц,области экрана не менее, чем 1024 на 768 точек и цветовой палитре(32 бита). В качестве параметров описания применялся следующий набор критериев Наличие и четкость зон краевая,промежуточная и центральнаяХарактер линий растрескивания форма,симметричность, четкость, густотаНаличие и характер аморфных областей мелкие, средние, крупные. Термин аморфные области использован для обозначения отдельностей, не содержащих конкреций.Наличие, расположение, размеры и количество конкреций Наличие,расположение и характер патологических структур (структуры типа листа,жгута, бляшкообразные структуры, штриховые трещины и т.д.). В настоящем исследовании использовалась плазма крови 10 здоровых детей (контрольная группа), 3 ВИЧ-инфицированных детей, не получающих антиретровирусную терапию, и 9 ВИЧинфицированных детей,получающих антиретровирусную терапию. Средняя длительность этиотропной терапии составила 12 месяцев. Во всех тезиограммах контрольной группы выявлялись две концентрические зоны краевая и центральная. Картина краевой зоны представлена равномерным радиально-аркадным растрескиванием. Центральная зона характеризуется равномерным радиальным растрескиванием, общая картина фации симметричная. Порядок ветвления трещин в пределах трх, отсутствие аморфных областей либо наличие мелких аморфных участков в краевой зоне, густота трещин высокая или очень высокая, во всех тезиограммах отмечается большое количество конкреций маленького или очень маленького размера. Эти данные соответствуют литературным описаниям тезиограмм здоровых лиц. Тезиографическая картина плазмы крови ВИЧинфицированных детей до назначения антиретровирусной терапии характеризуется наличием двух концентрических зон краевой и центральной. Картина краевой зоны представлена равномерным грубым радиально-аркадным растрескиванием. Центральная зона характеризуется равномерным радиальным растрескиванием, общая картина фации симметричная. В центре центральной зоны наблюдается аморфная гидрофобная зона. Густота трещин в центральной зоне высокая, во всех тезиограммах отмечается большое количество конкреций среднего размера в центральной зоне и конкреций большого размера в краевой. Таким образом, тезиографическая картина плазмы крови у ВИЧ-инфицированных детей до назначения антиретровируснои терапии не имеет принципиальных различий от тезиографической картины здоровых детей. У ВИЧ-инфицированных детей, получающих высокоактивную анти-ретровирусную терапию наблюдаются следующие варианты изменения теограмм плазмы крови. Пример 1. Ребенок Катя Ш. возраст 8 лет. Наблюдается с 2 лет с клиническим диагнозом ВИЧ-инфекция,клиническая стадия. ПГЛ. Дефицитная анемия легкой степени тяжести. Задержка речевого развития. Данные изменения в тезиографической картине характеризуются значительными нарушениями в липидном обмене (грубые ячеистые структуры и аморфная плотная центральная зона), а также возможно наличие гиперкаль-циемии. Нарушения белково-липидных взаимодействий может быть результатом изменения рН крови (наличие метаболического ацидоза). Гиперлипи-демия,гиперкальциемия и лактоацидоз являются известными побочными эффектами ингибиторов протеазы ВИЧ, которые получает ребенок (лопинавирритонавир). Данные изменения могут рассматриваться как показания к необходимой патогенетической(метаболической) коррекций нарушений, вызванных антиретровирусной терапией. Пример 2. Дамир Ш., возраст 5 лет. Наблюдается с 5 месяцев лет с клиническим диагнозом ВИЧинфекцияклиническая стадия. Рецидивирующие инфекции верхних дыхательных путей. Задержка физического развития. Резидуальная энцефалопатия. Задержка психо-речевого развития. Вторичная миокардиодистрофия. Хронические герпетические инфекции (ЦМВИ, ВПГ) латентное течение. Диагноз ВИЧ-инфекция верифицирован методом ИФА, иммунобло-тинг и ПЦР. В сыворотке обнаруженык ВИЧ и провирусная ДНК в возрасте 5 месяцев и в 1 год. Получает антиретровирусную терапию в течение 2 лет 1 месяца по схеме видекскалетразиаген,отмечена клиническая и вирусологическая эффективность лечения. Иммунологическое исследование - 4 - 1145 -50, 8 - 1284, 3 2572, 4/ 8 -0,89. Вирусная нагрузка - менее 400 /. Тезиограмма ребенка Дамира Ш. характеризуется следующими особенностями структурирования, различаются три зоны и наблюдается четкая краевая очерчен ность. Краевая зона представлена структурами типа петли и лепестков, в ней имеются конкреции среднего размера, округлой или листовой формы. Промежуточная зона представлена менее плотной зоной с хаотично расположенными трещинами и конкрециями большого размера. Центральная зона представлена довольной плотной аморфной областью с хаотично расположенными немногочисленными трещинами, в центре зоны расположено плотная гидрофобная структура. Данные изменения в тезиографической картине,характеризуются наличием интоксикации (петли и лепестки в краевой зоне), незначительными нарушения в липидном обмене(наличие гидрофобной структуры в центре тезиограммы),незначительными нарушениями в водно-солевой обмене (наличие промежуточной разреженной зоны). Данные изменения могут рассматриваться как незначительные и не требующие назначение патогенетической(метаболической) терапии последствий антиретровирусной терапии или отмены препаратов. Пример 3. Ребенок Ярослав 3. возраст 7 лет,наблюдается с 4 месяцев с клиническим диагнозом ВИЧ-инфекция, клиническая стадия. Рецидивирующие инфекции дыхательных путей. Хронический аденоидит. Хронический двусторонний отит. Хроническая герпетическая инфекция, сиапоаденит. Дефицитная анемия легкой степени тяжести. Задержка физического развития. Задержка психоречевого развития. Диагноз ВИЧ-инфекция верифицирован методом ИФА, иммуноблотинг и ПЦР. В сыворотке обнаруженык ВИЧ и провирусная ДНК в возрасте 4 месяца и в 1 год. Получает антиретровирусную терапию в течение 3 лет 3 месяцев по схеме азитромицинкалетразиаген,отмечена клиническая и вирусологическая эффективность лечения. Иммунологическое исследование - 4 - 737,8 - 1211, 3 - 2087, 4/ 8 -0,61. Вирусная нагрузка - менее 500 /. Диагноз ВИЧ-инфекция верифицирован методом ИФА, иммуноблотинг и ПЦР. В сыворотке обнаруженык ВИЧ и провирусная ДНК в возрасте 2 лет 4 месяца. Получает антиретровирусную терапию в течение 2 лет 1 месяца по схеме азитромицинкалетразиаген, 3 отмечена клиническая и вирусологическая эффективность лечения. Иммунологическое исследование - 4 - 703,8 - 1106, 3 - 1944, 4/ 8 -0,36. Вирусная нагрузка - менее 500 /. Тезиограмма ребенка Екатерины Ш. характеризуется трехзональным строением,нечеткой краевой очерченностью и отсутствием округлой формы тезиограммы. Краевая зона представлена грубыми ячеистыми структурами типа пчелиных сот, в ней имеются многочисленные конкреции среднего и мелкого размера округлой формы. Промежуточная зона четко ограничена от остальных зон, также содержит ячеистые структуры,но более мелкие и нежные, чем в краевой зоне. Центральная зона представлена плотной аморфной областью, не содержащей трещин, с многочисленными творожистыми включениями. Тезиографическая картина крови ребенка Ярослава З. характеризуется двухзональным строением, с четкой краевой очерченностью. В краевой зоне имеются многочисленные грубые поперечные складчатые структуры, по периферии краевой зоны, имеющей фестончатый вид,отмечаются петлевые структуры в виде жгута. Центральная зона представлена не плотной,почти прозрачной аморфной областью, не содержащей трещин. Данные изменения в тезиограмме можно объяснить наличием гиперпротеинемии (грубые поперечные складки краевой зоны), нарушениями в обмене натрия, калия, воды (почти прозрачная центральная зона) и интоксикационным синдромом(петлевые образование в краевой зоне). Подобные изменения могут быть обусловлены повышением интенсивности окислительной деструкции белков плазмы крови, замедлением их элиминации, а также наличием тубулопатии. Заключение при изучении тезиографических показателей крови ВИЧ-инфицированных больных,возникших на фоне высокоактивной антиретровирусной терапии, выявленные метаболические изменения, свидетельствуют о необходимости применения комплексной (антиоксидантной и нефропротекторной) терапии. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ диагностики осложнений высокоактивной антиретровирусной терапии у детей с ВИЧ-инфекцией, включающий определение биохимических показателей в плазме крови,отличающийся тем, что исследуют тезиограммы плазмы крови при наличии плотных аморфных центральных областей, не содержащих трещин и имеющих творожистые гидрофобные включения,диагностируют нарушения липидного обмена при наличии крупных конкреций в краевой зоне и наличии почти прозрачных центральной или промежуточных зон, диагностируют нарушение водно-солевого обмена и нефропатию при обнаружении грубых поперечных складчатых структур или структур в виде петель, пчелиных сот, жгута в краевой зоне и отсутствия трещин в центральной зоне тезиограммы, диагностируют нарушения в белковом обмене, фосфорнокальциевом обмене и интоксикационный синдром.