Антибактериальный комплекс для санации спермы быков и свиней

(51) 61 19/02 (2006.01) 61 31/00 (2006.01) 61 31/7036 (2006.01) 61 31/04 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ хозяйственных субъектах, станциях искусственного осеменения животных. Задачей изобретения является разработка нового эффективного антибактериального комплекса для санации спермы сельскохозяйственных животных преимущественно быков и хряков, который одновременно обеспечивает увеличение сроков хранения спермы, повышение е оплодотворяющей способности и рождение нормальных телят и поросят. Для достижения указанной цели предложен новый антибактериальный комплекс, состоящий из следующих ингредиентов (на 100 мл среды для разбавления спермы) цефотаксим, мг - 5-20 гентамицин, мг - 8-16 олендомицин фосфат, мг -100-200. Разработан новый антибактериальный комплекс для санации спермы сельскохозяйственных животных, ингредиенты которых действуют синергидно против микрофлоры спермы, что позволяет добиться эффективности санации эякулятов до 96-97 и повысить оплодотворяемость коров на - 12,5, свиноматок на -11,1.(72) Рустенов Амангельды Елеугалиева Нурлыгул Жанболатовна Олексеевич Елена Амангельдиевна(73) Республиканское государственное казенное предприятие Южно-Казахстанский государственный университет им. М.Ауезова Министерства образования и науки Республики Казахстан(54) АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫЙ КОМПЛЕКС ДЛЯ САНАЦИИ СПЕРМЫ БЫКОВ И СВИНЕЙ(57) Изобретение относится к скотоводству и свиноводству,в частности технологии воспроизводства и искусственного осеменения крупного рогатого скота и свиней и может найти применение в скотоводческих и свиноводческих Изобретение относится к скотоводству и свиноводству,в частности,технологии воспроизводства и искусственного осеменения крупного рогатого скота и свиней и может найти применение в скотоводческих и свиноводческих хозяйственных субъектах, станциях искусственного осеменения животных. Наиболее близким аналогом к разработанному комплексу является Спермосан-3 (ГОСТ 2263677 Инструкция. Искусственное осеменение коров и телок. М. 1988 г. с.24) для санации спермы сельскохозяйственных животных, в том числе быков и хряков, содержащий в своем составе на 100 мл среды для разбавления спермы пенициллин, тыс ЕД - 75-95 стрептомицин, тыс. ЕД - 75-95 стрептоцид, г - 0,15-0,20. Недостатком известного Спермосан-3 является повышенная резистентность микроорганизмов к входящим в его состав антибиотикам, которая возникла в результате их длительного и бессистемного применения при кормлении и лечении животных. Спермосан-3 не бактерициден по отношению ко многим видам микроорганизмов(синегнойная палочка, протей, некоторые виды кишечной палочки и др.), так часто встречаемых в сперме быков и хряков. Осеменение коров и свиноматок спермой, загрязненной микрофлорой,вызывает снижение жизнеспособности сперматозоидов, различные патологии половых органов самок после искусственного осеменения,гибель эмбрионов, плодов и рождение мертвых или слаборазвитых телят и поросят, их гибель в первые дни после рождения. Задачей изобретения является создание антибактериального комплекса для санации спермы сельскохозяйственных животных, преимущественно быков и хряков,который одновременно обеспечивает увеличение сроков хранения спермы,повышение ее оплодотворяющей способности и рождение здоровых телят и поросят. Поставленная задача решается тем, что новый антибактериальный комплекс на основе антибиотиков, согласно изобретению, содержит в качестве антибиотиков цефотаксим, гентамицин и олендомицин фосфат, при следующем соотношении(на 100 мл среды для разбавления спермы) цефотаксим, мг - 5-20 гентамицин, мг - 8-16 олендомицин фосфат, мг - 100-200 Указанные концентрации определены на основании проведенных экспериментов со спермой быков и хряков (таблицы 1-8). Таблица 1. Влияние различных доз цефотаксима на переживаемость спермы быков в среде ГЦЖ Активность сперматозоидов в баллах по суткам хранения Примечание КХ - контроль со Спермосаном -3 КХХ - контроль без антибиотиков В разбавитель глюкозо-цитрато-желточный(ГЦЖ) и лактозно-глицерино-желточный (ЛГЖ) добавляли цефотаксим из расчета 5 10 20 30 40 и 50 мг на 100 мл среды. В качестве контроля служили те же среды со Спермосаном-3. Согласно данным, представленным в таблицах 1 и 2,цефотаксим увеличивает переживаемость сперматозоидов быков в довольно широком диапазоне концентраций от 5 до 40 мг в 100 мл среды. Наиболее высокая переживаемость сперматозоидов наблюдается при добавлении 10 и 20 мг цефотаксима на 100 мл среды. Эти концентрации цефотаксима увеличивают активность и переживаемость сперматозоидов соответственно в среде ГЦЖ на 28,6 и на 18,6 по сравнению со Спермосаном-3. Аналогичное увеличение показателей происходит и в среде ЛГЖ у криоконсервированных клеток. Абсолютный показатель переживаемости (АПП) повышается при добавлении 10 мг цефотаксима на 100 мл среды на 27,5, 5 мг - на 16,7 и 20 мг - на 15,4. Таблица 2. Влияние различных доз цефотаксима на переживаемость замороженнооттаянной спермы быков в среде ЛГЖ Кол-во Активность сперматозоидов в баллах по часам хранения АПП антибиотика,0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Ед мг/100 мл среды 5 5,4 3,5 3,0 2,5 1,7 1,5 1,1 0,8 0,5 0,2 17,40,08 10 5,4 3,6 3,1 2,7 2,0 1,8 1,3 1,0 0,8 0,2 19,00,06 20 5,4 3,5 3,0 2,6 1,6 1,4 1,1 0,7 0,5 0,2 17,20,06 30 5,4 3,4 3,0 2,5 1,6 1,4 1,0 0,7 0,4 0,2 16,80,07 40 5,4 3,4 2,9 2,5 1,5 1,4 1,0 0,5 0,4 0,2 16,40,06 50 5,4 3,4 2,9 2,5 1,4 1,0 0,6 0,4 0,2 15,00,06 Кх 5,4 3,4 2,9 2,4 1,4 1,2 0,8 0,2 14,90,09 Кхх 5,4 3,3 2,7 2,2 1,4 0,8 0,2 13,20,05 Примечание КХ - контроль со Спермосаном -3 КХХ - контроль без антибиотиков Таблица 3. Влияние различных доз гентамицина на переживаемость спермы быков в среде ГЦЖ Кол-во Активность сперматозоидов в баллах по часам хранения антибиотика,0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 мг/100 мл среды 20 8,2 7,5 7,1 6,5 5,2 4,2 3,0 1,9 0,8 0,5 40 8,2 7,5 7,2 6,6 5,4 4,6 3,2 2,1 0,8 0,5 60 8,2 7,5 7,1 6,7 5,4 4,5 3,1 1,3 0,6 0,5 80 8,2 7,2 6,4 6,2 5,2 4,2 2,8 1,8 0,8 0,5 100 8,2 7,2 6,3 5,8 4,8 4,2 2,4 0,8 0,5 200 8,2 7,2 6,2 5,4 4,5 3,4 2,6 1,5 0,5 Кх 8,2 7,2 6,2 5,4 4,4 3,3 2,4 1,5 0,5 Кхх 8,2 7,2 6,1 4,9 3,8 2,2 0,5 Примечание КХ - контроль со Спермосаном -3 КХХ - контроль без антибиотиков Влияние различных доз гентамицина на переживаемость спермы быков в среде ГЦЖ представлено в таблице 3. Препарат в очень большом диапазоне концентрации (20 и 200 мг) безвреден для жизнеспособности сперматозоидов в концентрации от 20 до 80 мг на 100 мл среды ГЦЖ повышает АПП на 12,1-20,1. Таблица 4. Влияние различных доз олендомицина фосфата на переживаемость спермы быков в среде ГЦЖ Активность сперматозоидов в баллах по часам хранения Кол-во антибиотика,0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 мг/100 мл среды 20 8,2 7,5 7,1 6,5 5,2 4,2 3,0 1,8 0,6 0,5 40 8,2 7,5 7,2 6,6 5,4 4,6 3,2 1,9 0,8 0,5 60 8,2 7,5 7,1 6,7 5,4 4,5 3,1 1,1 0,6 0,5 80 8,2 7,2 6,4 6,2 5,2 4,2 2,8 1,0 0,6 0,5 100 8,2 7,2 6,3 5,8 4,8 4,0 2,1 0,6 0,5 200 8,2 7,2 6,2 5,4 4,5 3,4 1,9 0,8 0,5 Кх 8,2 7,2 6,2 5,4 4,4 3,0 1,1 0,6 0,5 Кхх 8,2 7,2 6,1 4,9 3,8 2,6 0,5 Примечание КХ - контроль со Спермосаном -3 КХХ - контроль без антибиотиков Влияние различных доз олендомицина фосфата на АПП спермы быков представлено в таблице 4. Антибиотик в концентрации от 20 мг до 80 мг безвреден для спермы. Добавление антибиотика к сперме в дозе от 30 до 50 мг на 100 мл среды увеличивает АПП на 12,8-18,4 по сравнению со Спермосаном-3. Результаты подбора оптимального соотношения компонентов нового антибактериального комплекса показали, что сперма, сохраняемая в среде ГЦЖ при температуре 2 - 4 С, переживает на 27,6-44,9 дольше по сравнению со Спермосаном-3,соответственно увеличивается АПП криоконсервированной (-196 С) спермы на 11,548,9. Положительный эффект наблюдается при сочетании компонентов в широком диапазоне их концентраций цефотаксим - 5-20 мг гентамицин - 8-16 мг олендомицин фосфата - 100 мг. Наиболее высокую переживаемость сперматозоидов в среде ГЦЖ - 144,9, а в ЛГЖ 148,9 от контроля со Спермосаном-3 обеспечивает следующее сочетание компонентов на 100 мл среды цефотаксима - 10 мг,гентамицина - 8 мг,олендомицина фосфата - 100 мг. Было проведено сравнительное испытание известного комплекса, Спермосан-3 и нового антибактериального комплекса,содержащего оптимальное количество компонентов цефотаксима Таблица 5 Влияние различных соотношений компонентов нового антибактериального комплекса на переживаемость спермы быков в средах ГЦЖ и ЛГЖ Кол-во Активность сперматозоидов в среде ГЦЖ, в баллах по антибиотика, мг/ суткам хранения 100 мл среды 0 2 4 6 8 10 11 12 13 14 15 16 17 Ц Г ОФ 5 8 100 8,5 7,2 7,0 6,3 5,1 4,6 4,2 3,7 2,3 1,4 1,0 0,5 10 8 100 8,5 7,2 7,0 6,7 5,4 5,0 4,5 4,2 3,8 3,1 2,2 1,7 0,9 20 8 100 8,5 7,1 6,9 6,3 5,1 4,7 4,3 3,8 3,2 2,5 1,4 1,0 0,5 10 16 100 8,5 7,1 6,9 6,4 5,2 4,8 4,3 3,8 3,3 2,6 1,4 1,0 0,5 20 16 100 8,5 7,1 6,9 6,2 5,0 4,6 4,4 3,7 3,3 2,5 1,2 0,3 0,5 10 8 200 8,5 7,2 7,0 6,3 5,1 4,5 4,5 3,9 3,1 2,7 1,0 0,5 20 16 200 8,5 7,1 7,0 6,1 5,0 4,3 4,0 3,3 2,7 2,2 0,9 0,5 Кх 8,5 6,1 5,1 5,0 4,1 3,2 3,0 2,0 1,3 1,0 0,5 КХХ 8,5 6,0 5,1 4,4 4,0 3,0 2,1 1,1 0,8 0,2 Кол-во Активность сперматозоидов в среде ЛГЖ в баллах по часам антибиотика,хранения мг/100 мл среды Ц Г ОФ 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Таблица 6 Эффективность санирования спермы быков стандартным Спермосаном -3 или новым антимикробным комплексом (число проб-процент) Степень бактериальной загрязненности (микробное число) Стерильно До 50 микробных тел/мл До 100 микробных тел/мл До 200 микробных тел/мл 4 Новый комплексХ ГЦЖ ЛГЖ 32-91,6 1-2,84 1-2,84 1-2,84 Новый комплексХХ ГЦЖ ЛГЖ 33-95,1 1-2,82 1-2,82 Степень бактериальной Спермосан-3 Новый комплексХ Новый комплексХХ загрязненности (микробное ГЦЖ ЛГЖ ГЦЖ ЛГЖ ГЦЖ ЛГЖ число) До 300 микробных тел/мл 3-8,2 5-14,5 До 400 микробных тел/мл 3-8,2 3-8,2 До 500 микробных тел/мл 4-10,9 3-8,2 Свыше 500 микробных тел/мл 3-8,2 2-5,3 Итого 35-100 35-100 35-100 35-100 35-100 35-100 Примечание Х-цефотаксим -10 мг, гентамицина -8 мг, олендомицин фосфат -100 мг-цефотаксим -20 мг, гентамицин -16 мг, олендомицин фосфата -200 мг. Исследована эффективность санирования спермы и оплодотворяемость коров, осемененных спермой, разбавленной средами ГЦЖ и ЛГЖ с добавлением Спермосана-3 или нового антибактериального комплекса (табл. 6). В среднем в 1 мл неразбавленной спермы содержится 3127 микробных тел. В результате применения нового Антибактериального комплекса установлено снижение микробной загрязненности спермы в разбавленной ГЦЖ - с 6,5 раза, а в ЛГЖ - 8,3 раза по сравнению со Спермосаном-3 (табл 6). Это свидетельствует о том, что цефотаксим и гентамицин действуют синергидно против микрофлоры спермы, а также то, что они как химические вещества не ведут к инактивирующему взаимодействию и могут быть вполне использованы вместе для деконтоминации микрофлоры спермы быков -производителей. Установлено, что присутствие их в растворе совместно в течение 24 часов абсолютно не изменяет активности гентамицина и дает снижение активности цефотаксима на 5-10, то есть так же,как в контроле (цефотаксим без гентамицина). Таблица 7 Оплодотворяемость коров, осемененных спермой, замороженной в лактозно-глицерино-желточной среде с новым антибактериальным комплексом Показатели Осеменено коров, гол. Оплодотворилось, гол. Оплодотворяемость,Результат к контролю,Оплодотворяемость коров,осемененных спермой, замороженной в лактозно-желточной среде с новым антибактериальным комплексом,представлена в таблице 7. Как видно из таблицы,санирование спермы быков - производителей новым антибактериальным комплексом положительно влияет на процессы плодотворного осеменения. Сперма, санированная новым антибактериальным комплексом 148 107 72,3 12,5 Оплодотворяемость коров, осемененных спермой,замороженной в лактозно - глицерино - желточной среде с новым антибактериальным комплексом,была на 12,5 выше, чем в контроле со Спермосаном -3. Все полученные телята были вполне здоровыми. Таблица 8 Оплодотворяемость свиноматок, осемененных спермой в среде ГХЦС-8 с новым антибактериальным комплексом Показатели Осеменено свиноматок, гол. Оплодотворилось, гол. Оплодотворяемость,Результат к контролю,При добавлении нового антибактериального комплекса к среде ГХЦС-8 (глюкозо-хелатоцитратно-сульфатная) и осеменении свиноматок, их оплодотворяемость выше на 11,1, по сравнению со Спермосаном-3. Все полученные поросята были вполне жизнеспособными. Применение предлагаемого антибактериального комплекса обеспечивает снижение бактериальной загрязненности и увеличение срока хранения спермы, повышение оплодотворяемости коров и Сперма, санированная новым антибактериальным комплексом 71 58 81,7 11,1 свиноматок по сравнению с использованием Спермосана-3. Таким образом, на основании проведенных работ создан антибактериальный комплекс для санации спермы быков - производителей и хряковпроизводителей, уменьшающий бактериальную загрязненность разбавленной спермы,увеличивающий сроки ее хранения и повышающий оплодотворяемость коров и свиноматок. 5 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Антибактериальный комплекс для санации спермы быков и свиней на основе антибиотиков,отличающийся тем, что содержит в качестве антибиотиков цефотаксим,гентамицин и олендомицин фосфат при следующем соотношении(мг на 100 мл среды для разбавления спермы) цефотаксим 5-20 гентамицин 8-16 олендомицин фосфат 100-200.