Фармацевтическая композиция Паклитаксел – Келун Казфарм и способ ее получения

(51) 07 305/14 (2006.01) 61 31/00 (2006.01) 61 47/44 (2006.01) 61 47/10 (2006.01) 61 47/12 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ касторовое масла 35 и безводная лимонная кислота, обеспечивающийсреды от 3.0 до 5.0. Паклитаксел является антимитогеном растительного происхождения, который действует на микротрубочковый аппарат клетки. Стимулирует сборку микротрубочек из димеров тубулина и стабилизирует микротрубочки за счет подавления деполимеризации. Такая стабильность препятствует нормальной динамической реорганизации сети микротрубочек, которая имеет важной значений для клеточных функций на этапе интерфазы и митоза. Кроме того, паклитаксел индуцирует повреждение групп или пучков микротрубочек в течение всего клеточного цикла и множественных звезд микротрубочек во время митоза. Преимущество данного изобретения является повышение стабильности и эффективности композиции, а также удобства применении (не требует дополнительного растворения).(54) ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ПАКЛИТАКСЕЛ - КЕЛУН КАЗФАРМ И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ(57) Область использования изобретение относится к области медицины, а именно фармацевтической композиции, содержащий производные таксанов и обладающей противоопухолевыми свойствами, а также к способу ее получения. Сущность изобретения композиция включает активное вещество - паклитаксел, выбранное из группы таксанов, вспомогательные вещества, как этанол безводный,полиоксиэтилированное Данное изобретение относится к области медицины, а именно к фармацевтической композиции, содержащей производные таксанов,которые обладают противоопухолевой активностью. Паклитаксел принадлежит к классу таксанов химиотерапевтических лекарственных средств,который широко использовался в течение многих лет для лечения рака молочной железы и яичников или немелкоклеточной карциномы легких. Наряду с огромным потенциалом, который паклитаксел показал как противоопухолевое лекарственное средство,клинические проблемы с растворимостью,токсичностью,плохой биодоступностью и развитием лекарственной резистентности,достаточно сильны, так, что очевидна потребность в разработке производных паклитаксела с лучшей терапевтической эффективностью и меньшей токсичностью. Паклитаксел (таксол) доступен в качестве раствора для внутривенных инфузий с носителем,содержащим кремофор , который, как было показано, вызывает токсические эффекты, такие как опасная для жизни анафилаксия. Такая композиция паклитаксела,содержащая кремофор/этанол,оседает до разбавления с жидкостью для инфузий, и фибриновый осадок формируется в различных композициях за время хранения в течение длительного периода времени ( и др.,патент США 5504102). На уровне техники известен инъекционный препарат,содержащий таксол и полиэтоксилированное касторовое масло, для поддержания оптимального значения , в составе препарата содержится кислота, в частности лимонная кислота. Препарат имеет значениеменее 8,1 и отличается повышенной стабильностью. Способ приготовления представленного препарата предусматривает смешивание касторового масла,используемого в качестве носителя, с кислотой и последующее добавление таксола (Патент ЕР 1384474 А 1). В патенте 6306894 ВА раскрывает способ получения фармацевтической композиции паклитаксела. В патенте фармацевтическую препаративную форму паклитаксела и полиоксиэтилированного касторового масла подкисляли до величиныменее 8,1, точнее, 5-7. В препаративную форму, используемую для лечения рака, вводили этанол. Способ получения препарата предусматривает стадию смешивания кислоты с материалом носителя, например,полиэтоксилированным касторовом маслом, с образованием раствора носителя, в котором затем добавляют паклитаксел в количестве,обеспечивающемменее 8,1, предпочтительно 5-7. Этанол вводили в паклитаксел перед смешиванием с раствором носителя. В качестве подкисляющего агента использовали безводную лимонную кислоту. В патентных заявках 94/12030 и 94/12031 раскрываются фармацевтические композиции,содержащие паклитаксел и 2 полиоксиэтилированное касторовое масло, такое как, которые стабилизированы путем регулированиякомпозиции до величины менее 8,1. Для регулирования величиныприменяют неорганические кислоты, например хлористоводородную кислоту, серную кислоту, азотную кислоту или низкомолекулярные органические кислоты, преимущественно уксусную кислоту и лимонную кислоту. Стабилизирующее действие кислот показано путем сравнения с остальными идентичными композициями. Содержание таксола в композиции, включающей, но не содержащей кислоты ( 9,1), составляет 86,7 через 7 дней при температуре 40 С. Напротив,содержание таксола в композиции,которой добавлением лимонной кислоты доводят до значения 6,2, составляет 96,6 через 7 дней. Содержание таксола в композиции,которой добавлением уксусной кислоты доводят до значения 6,7, составляет 97,5 через 7 дней. Настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям и используется для лечения рака. Препарат является ингибитором митоза и специфически связывается с бетатубулином микротрубочек, нарушая процесс деполимеризации этого ключевого протеина, что приводит к накоплению в клетке аномальных пучков нефункционирующих микротрубочек и нарушает процесс митоза. В настоящем изобретении фармацевтическая композиция включает активное вещество паклитаксел, вспомогательные вещества как,безводная лимонная кислота,полиоксиэтилированное касторовое масло и этанол безводный. Цель изобретения - получить улучшенную фармацевтическую композицию для лечения рака яичников,рака молочной железы,немелкоклеточного рака легкого, плоскоклеточного рака головы и шеи, переходноклеточного рака мочевого пузыря, рака пищевода, лейкоза, саркома Капоши у больных СПИД-ом. Данное изобретение направлено на получение концентрата для приготовления раствора для инфузий 30 мг/5 мл,60 мг/10 мл, 100 мг/16,7 мл, который пригоден для применения в парентеральных растворах для инфузий. Цель изобретения включает несколько этапов- создание концентрата для приготовления раствора для инфузий, пригодной для инъекций в парентеральные растворы для инфузий,включающий подкисляющий агент - лимонная кислота безводная,полиоксиэтилированное касторовое масла 35, безводный этанол, и активное вещество - паклитаксел. способ изготовления указанной фармацевтической композиции,включающий следующие стадии а) растворение полиоксиэтилированного касторового масла 35 в этаноле безводном б) добавление безводной лимонной кислоты и нагревание при температуре от 45 С до 55 С градуса в) добавление субстанции паклитаксела и перемешивание в течении 10 минут до полного растворения.- фармацевтический концентрат, содержит менее чем 30 мг/5 мл,60 мг/10 мл,100 мг/16,7 мл паклитаксела, помимо этого содержит безводную лимонную кислоту,этанола безводного,полиэтоксилированного касторового масла 35.- создание флакона из бесцветного стекла, с резиновой пробкой, закрепленной с помощью алюминиевого колпачка с пластмассовой съемной крышкой синего цвета. Способ получения заявленной композиции Для получения концентрата паклитаксела в резервуар (емкость) наливают этанол безводный(10 от общего объема), растворяют в нем полиоксиэтилированное касторовое масло в определенном количестве (таблица 1). Остатки полиоксиэтилированного касторового масла промывают этанолом безводным (50 от общего объема) и наливают в общий резервуар. В общую емкость добавляют установленное количество безводной лимонной кислоты и подогревают при температуре от 45 С до 55 С градуса и добавляют соответствующую массу субстанции паклитаксела и перемешивают до полного растворения. Полученную композицию проверяют на спецификацию качества. Спецификация качества лекарственного препарата Паклитаксел - Келун Казфарм показана в таблице 2. Если полученный концентрат отвечает всем требованиям качества,тогда,полученный концентрат,фильтруют,заполняют его во флаконы и добавляет азот для стабильности. Пример 1 Исследования проводили на двух видах лабораторных животных. Животные распределялись по группам случайным образом. В качестве критерия приемлемой рандомизации считали отсутствие внешних признаков заболевания и гомогенность групп по массе тела (10). Информация об экспериментальных животных предоставлена в таблице 3. Для изучения острой токсичности исследуемые лекарственные препараты вводили внутривенно в максимально допустим объеме для каждого вида животных 2 мл - для крыс массой 100-190 г, для мышей - 0,5 мл на 20-24 г. Из животных каждого вида были сформированы однородные по массе тела группы по 6 особей в каждой (таблица 4). Наблюдение за общим состоянием, поведением,двигательной активностью животных велось в течение двух недель. В первый день после введения препарата животные находились под непрерывным наблюдением. На протяжении всего экспериментального периода наблюдали за состоянием шерстного покрова и слизистых оболочек животных,характером выделений, поведенческими реакциями,регистрировали массу тела. О негативном влиянии введенных образцов судили по смертности,клиническим симптомом интоксикации (общее состояние животных, особенности поведения,интенсивность двигательной активности, реакции на звуковые и световые раздражители, состояние кожного и волосяного покрова, окраска слизистых оболочек), динамике массы тела, потреблению кормов и воды, консистенции фекальных масс. Для всех количественных данных вычисляли групповое среднее арифметическое. Полученные результаты были обработаны с помощью прикладных программ . Пример 2 При исследовании острой токсичности препарата Паклитаксел - Келун - Казфарм на мышах в дозе 11 мг/кг отмечен 50,0 падеж животных (в пересчете на паклитаксел). В связи с 50,0 смертности мышей доза вводимого препарата была уменьшена до 9,5 мг/кг, падеж животных составил 16,6. Животные пали в течение недели после введения препарата. При введении препарата мышам в дозе 7,5 мг/кг падеж среди животных отсутствовал. Сразу после введения препарата наблюдались симптомы интоксикации - вялость и снижение двигательной активности. Показатель ЛД 50 препарата Паклитаксел - Келун Казфарм концентрат для приготовления раствора для инфузий 30 мг/5 мг, 60 мг/10 мл, 100 мг/16,7 мл производства ТОО -(Келун Казфарм), Республики Казахстан составил 10,3 мг/кг в пересчете на палитаксел. Пример 3 Для изучения безопасности препарата сравнения Паклитаксел концентрат для приготовления раствора для инфузий 30 мг/5 мл производства РУП Белмедпрепараты Республики Беларусь, вводили в дозах 11 мг/кг, 9,5 мг/кг и 7,5 мг/кг в пересчете на активное соединение - паклитаксел. При введении дозы 11 мг/кг препарата Паклитаксел отмечен 83,3 падеж животных, в дозе 9,5 мг/кг - 33,3 и дозе 7,5 мг/кг - 16,6. ЛД 50 препарата Паклитаксел концентрат для приготовления раствора для инфузий 30 мг/5 мл (РУП Белмедпрепараты Республики Беларусь) составляет 8,4 мг/кг в пересчете на активное соединение. Согласно международной Системе классификации опасности и маркировки химической продукции (СГС) (ООН, Нью-ЙоркЖенева, 2005 г) препарат может быть отнесен кклассу - умереннотоксичные препараты. При проведении исследования препарата Паклитаксел - Келун - Казфарм на крысах в дозе 15 мг/кг падеж наступал сразу после введения. Смертность составила 100,0. При уменьшении дозы вводимого препарата до 10 мг/кг падеж животных составил 50,0. Животные пали в течение часа после введения препарата. После введения препаратов было отмечено незначительное снижение двигательной активности, появление вялости, снижение аппетита и потребление воды. Дальнейшее снижение дозы паклитаксела до 5 мг/кг вызвало 16,6 падеж крыс. В течение всего эксперимента наблюдали динамику массы тела животных. 3 Общее состояние выживших подопытных животных было удовлетворительным. Через сутки поведенческие реакции восстановились. Реакция на тактильные, болевые, звуковые и световые раздражители, состояние волосяного и кожного покрова,окраска слизистых были без патологических изменений. На основании полученных экспериментальных данных по острой токсичности показатель ЛД 50 препарата Паклитаксел - Келун - Казфарм концентрат для приготовления раствора для инфузий 30 мг/5 мл, 60 мг/10 мл, 100 мг/16,7 мл производства ТОО-(Келун Казфарм) Республики Казахстан, составил 8,6 мг/кг в пересчете на активное соединение паклитаксела. При изучении безопасности на лабораторных крысах исследуемый препарат сравнения Паклитаксел концентрат для приготовления раствора для инфузий 30 мг/5 мл (РУП Белмедпрепараты Республики Беларусь) вводили в дозах 15 мг/кг, 10 мг/кг и 5 мг/кг в пересчете на активное соединение - паклитаксел. При введении дозы 15 мг/кг препарата Паклитаксел концентрат для приготовления раствора для инфузий 30 мг/5 мл наблюдался 100 падеж животных, в дозе 10 мг/кг 66,6 и в дозе 5 мг/кг - 33,3. Показатель ЛД 50 для Паклитаксела концентрат для приготовления раствора для инфузий 30 мг/5 мл составил 7 мг/кг в пересчете на активное соединение. Согласно международной Системе классификации опасности и маркировки химической продукции (СГС) (ООН, Нью-ЙоркЖенева, 2005 г) данные препараты могут относиться кклассу - умереннотоксичные препараты(табл. 5) Полученные результаты по острой токсичности при внутривенном введении препаратов представлены в таблице 6. Результаты исследований острой токсичности при однократном внутрижелудочном введении тестируемых препаратов представлены в таблице 6. Динамика массы тела животных подопытных групп, которым вводились изучаемые препараты,представлена в таблицах 7-8. После окончания эксперимента животные были подвергнуты эвтаназии. Анализируя данные,полученные при исследовании безопасности лекарственного препарата Паклитаксел - Келун - Казфарм концентрат для приготовления раствора для инфузий 30 мг/5 мл , 60 мг/10 мл и 100 мг/16,7 мл на лабораторных животных ЛД 50 не более 10 мг/кг. Полученные экспериментальные данные для препарата Паклитаксел - Келун - Казфарм в соответствии с международной Системой классификации опасности и маркировки химической продукции (СГС) (ООН, Нью-ЙоркЖенева, 2005 г) препарат может быть отнесен кклассу токсичности умереннотоксичные препараты. Полученные данные на двух видах экспериментальных животных позволяют сделать заключение об отсутствии видоспецифичности токсического действия. На основании экспериментальных исследований установлено,что лекарственный препарат Паклитаксел - Келун - Казфарм концентрат для приготовления раствора для инфузий 30 мг/5 мл,60 мг/10 мл и 100 мг/16,7 мл (ТОО(Келун - Казфарм), Республики Казахстан) проявляет сопоставимую токсичность относительно препарата сравнения Паклитаксел концентрат для приготовления раствора для инфузий 30 мг/5 мл (РУП Белмедпрепараты Республики Беларусь). Таблица 1 Фармацевтическая композиция Паклитаксел-Келун-Казфарм Наименование сырья Паклитаксел Лимонная кислота безводная Полиоксиэтилированное касторовое масла 35 Этанол безводный Израсходованное количества сырья в 0,645 0,215 56,574 42,565 Таблица 2 Спецификация качества лекарственного средства Паклитаксел-Келун-Казфарм Показатели качества Описание Идентификация Нормы отклонений Прозрачная, бесцветная или слегка желтоватого цвета жидкость На хроматограмме испытуемого раствора, полученной при количественном определении, время удерживания основного пика должно совпадать с временем удерживания пика паклитаксела на хроматограмме раствора сравнения Препарат должен быть прозрачным по сравнению с водой Извлекаемый объем Вода Родственные примеси- сумма примесей Этанол Бактериальные эндотоксины Стерильность Количественное определение- паклитаксела Условия хранения Срок хранения Фармакологическое действие Нормы отклонений для инъекций Р Окраска препарата должна быть не интенсивнее окраски раствора сравнения 3 От 3.0 до 5.0 Не менее 5.0 мл (для дозировки 30 мг/5 мл) Не менее 10.0 мл (для дозировки 60 мг/10 мл) Не менее 16.7 мл (для дозировки 100 мг/16.7 мл) Не более 0.5 Не более 0.5 Не более 0.5 Не более 0.5 Не более 0.1 Не более 2.0 От 45.0 до 55.0 Не более 0.67 ЭЕ/мг Должен быть стерильным От 27.0 до 33.0 мг (для дозировки 30 мг/5 мл) От 54.0 до 66.0 мг (для дозировки 60 мг/10 мл) От 90.0 до 110.0 мг (для дозировки 100 мг/16.7 мл) В защищенном от света месте при температуре не выше 25 С Хранить в недоступном для детей месте 2 года Противоопухолевое средство Таблица 3 Экспериментальные животные Вид Порода Пол Вес Общее количеств Половозрелые крысы Белые беспородные Самцы и самки 180-220 г 120 Половозрелые мыши Белые беспородные Самцы и самки 20-24 г 108 Таблица 4 Группы экспериментальных животных Номер группы Мыши Группа 1 Группа 2 Группа 3 Группа 4 Группа 5 Группа 6 Группа 7 Крысы Группа 1 Группа 2 Группа 3 Группа 4 Группа 5 Группа 6 Группа 7 Количество Название препарата животных Паклитаксел - Келун - Казфарм 6 6 6 6 6 6 6 Контрольная группа Паклитаксел - Т Паклитаксел -Паклитаксел - Т Паклитаксел -Паклитаксел - Т Паклитаксел Контрольная группа Паклитаксел - Т Паклитаксел -Паклитаксел - Т Паклитаксел -Паклитаксел - Т Паклитаксел Таблица 5 Степень токсичности лекарственных средств (пои ) Степень токсичности 1-градации степеней токсичности при внутривенном пути введения определяются посредством умножения значений стандартных доз для оценки токсичности препарата при пероральном пути введения на коэффициент 0,1. Таблица 6 Смертность экспериментальных животныхДоза, путь введения Паклитаксел - Т Мыши 11 мг/кг 9,5 мг/кг 7,5 мг/кг Крысы 15 мг/кг 10 мг/кг 5 мг/кг Паклитаксел -Мыши 11 мг/кг 9,5 мг/кг 7,5 мг/кг Крысы 15 мг/кг 10 мг/кг 5 мг/кг Динамика массы тела экспериментальных мышей Дозы, путь введения Контрольная группа Паклитаксел Паклитаксел - Т 11 мг/кг Паклитаксел 11 мг/кг Паклитаксел - Т 9,5 мг/кг Паклитаксел -9,5 мг/кг Паклитаксел - Т 7,5 мг/кг Паклитаксел -7,5 мг/кг Динамика массы (г), сутки после начала опыта Прирост Фон Через 24 часа Через 7 дней Через 14 дней массы тела, г 21,81,3 22,52,1 25,71,8 28,11,8 6,3 20,10,4 Таблица 8 Динамика массы тела экспериментальных крыс Дозы, путь введения Контрольная группа Паклитаксел ПаклитакселТ 10 мг/кг Паклитаксел -10 мг/кг Паклитаксел - Т 5 мг/кг Паклитаксел -5 мг/кг Динамика массы (г), сутки после начала опыта Прирост Фон Через 24 часа Через 7 дней Через 14 дней массы тела, г 204,12,9 205,73,7 214,26,4 223,26,5 19,1 211,63,4 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1.Фармацевтическая композиция, включающая активное вещество, выбранное из группы таксанов,полиоксиэтилированное касторовое масло 35,этанол безводный, отличающаяся тем, что содержит безводную лимонную кислоту,обеспечивающую рН среды в пределах от 3.0 до 5.0. 2. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что содержит активное вещество - Паклитаксел 3. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что количество этанола безводного составляет 60 от общего объема. 4. Композиция по п.1-3, отличающаяся тем, что она представляет собой концентрат для приготовления раствора для инфузий 5. Способ получения фармацевтической композиции,включающий растворение полиоксиэтилированного касторового масла 35 в этаноле безводном с добавлением безводной лимонной кислоты, отличающийся тем, что полученную смесь нагревают при температуре от 45 С до 55 С, добавляют субстанцию Паклитаксела и перемешивают в течении 10 минут до полного растворения