Способ получения живой сухой ассоциированной вакцины против болезни ньюкасла и инфекционной бурсальной болезни птиц

(51) 61 39/15 (2006.01) 61 39/17 (2006.01) 61 39/295 (2006.01) 61 31/12 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ штаммов вирусов,обладающих высокой иммуногенной эффективностью, и применении технологий, позволяющих получать биомассу штаммов вакцинных вирусов с высоким титром. Способ получения живой сухой ассоциированной вакцины против болезни Ньюкасла и инфекционной бурсальной болезни птиц, включающий накопление биомассы вирусов болезни Ньюкасла и инфекционной бурсальной болезни птиц, смешивание их и стабилизацию защитной средой, а также сублимационное высушивание в качестве активного иммуногена используют биомассу штамма -0017 Ла-Сота КазНИВИ вируса болезни Ньюкасла и штамма 0239 АПФ-2011 КазНИВИ вируса инфекционной бурсальной болезни кур, которые объединяют,стабилизируют защитной средой, содержащей в конечной концентрации 4 сахарозы, 3 пептона,1 желатина, и сублимируют во флаконах в объеме 4,0 см 3.(72) Кутумбетов Леспек Бекболатович Мырзахметова Балжан Шайзадаевна Даутпаева Зауреш Жумагановна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЖИВОЙ СУХОЙ АССОЦИИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ БОЛЕЗНИ НЬЮКАСЛА И ИНФЕКЦИОННОЙ БУРСАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ ПТИЦ(57) Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, а именно к способу получения живой сухой ассоциированной вакцины против болезни Ньюкасла и инфекционной бурсальной болезни птиц. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в использовании Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, а именно к способу получения живой сухой ассоциированной вакцины против болезни Ньюкасла и инфекционной бурсальной болезни птиц. Известен способ получения живой сухой ассоциированной вакцины против болезни Ньюкасла и инфекционной бурсальной болезни птиц, включающий накопление биомассы вирусов болезни Ньюкасла и инфекционной бурсальной болезни птиц, смешивание их и стабилизацию защитной средой, а также сублимационное высушивание Патент Российский Федерации 2443429, кл. А 61 39/15, А 61 39/17, А 61 39/295, А 61 Р 31/12, 2012. Недостатком способа получения ассоциированной вакцины против болезни Ньюкасла и инфекционной бурсальной болезни птиц является низкая иммунологическая эффективность. Задачей изобретения является повышение иммунологической эффективности ассоциированной вакцины против болезни Ньюкасла и инфекционной бурсальной болезни птиц. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в использовании штаммов вирусов,обладающих высокой иммуногенной эффективностью, и применении технологий, позволяющих получать биомассу штаммов вакцинных вирусов с высоким титром. Способ получения ассоциированной вакцины против болезни Ньюкасла и инфекционной бурсальной болезни кур,включающий использование штамма -0017 Ла-Сота КазНИВИ вируса болезни Ньюкасла и штамма -0239 АПФ 2011 КазНИВИ вируса инфекционной бурсальной болезни кур, продукцию биомассы этих штаммов в развивающихся куриных эмбрионах свободных от патогенной микрофлоры, стабилизацию защитной средой, содержащей 4 сахарозы, 3 пептона и 1 желатина, и сублимационное высушивание с последующим заключением в вакуум. Способ осуществляется следующим образом. Штамм -0017 Ла-Сота КазНИВИ вируса болезни Ньюкасла и штамм -0239 АПФ-2011 КазНИВИ вируса инфекционной бурсальной болезни кур, используемые для получения живой сухой ассоциированной вакцины против болезни Ньюкасла и инфекционной бурсальной болезни кур депонированы в лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО КазНИВИ и обладают следующими свойствами. Штамм -0017 Ла-Сота КазНИВИ вируса болезни Ньюкасла Репродуктивные свойства. Штамм -0017 ЛаСота КазНИВИ вируса болезни Ньюкасла репродуцируется в развивающихся куриных эмбрионах 10-11 суточного возраста, полученных от кур, свободных от патогенной микрофлоры, с накоплением специфических гемагглютининов и репродуктивного вируса в аллантоисной жидкости. Гемагглютинин вируса болезни Ньюкасла штамм 2-0017 Ла-Сота КазНИВИ накапливается в максимальных титрах, достигающих 6-9 2 через 72 часа после инокуляции вируса в аллантоисную полость развивающегося куриного эмбриона. Репродуктивный титр вируса болезни Ньюкасла штамм -0017 Ла-Сота КазНИВИ в выше указанный срок после инокуляции вируса в экстраэмбриональной жидкости достигает 108,5109,75 ЭИД 50/см 3. Антигенные свойства. На интранозальное и энтеральное введение репродуктивного вируса болезни Ньюкасла штамм -0017 Ла-Сота КазНИВИ в дозе от 107,0 ЭИД 50/гол в организме птицы от 30 суточного возраста на 21 сутки после инокуляции формируются антигемагглютинины в титрах 6-10 2. Патогенные свойства. Репродуктивный вирус болезни Ньюкасла штамм-0017 Ла-Сота КазНИВИ относится к лентогенному типу возбудителя и не обладает патогенными свойствами по отношению к птице. Иммуногенные свойства. При однократном интраназальном и энтеральном введении штамм-0017 Ла-Сота КазНИВИ вируса болезни Ньюкасла в дозе от 107,0 ЭИД 50/гол в организме птицы от 30 суточного возраста на 21 сутки после инокуляции формируются специфические антигемагглютинины в титрах 6-10 2, которые являются показателем напряженного иммунитета. Птица, имеющая антигемагглютинины в указанных титрах, остается гарантированно защищенной от вирулентного вируса болезни Ньюкасла. Иммунитет, сформированный на введение штамма-0017 Ла-Сота КазНИВИ вируса болезни Ньюкасла продолжается у кур не менее 150 суток-0017 Ла-Сота КазНИВИ вируса болезни Ньюкасла в дозах до 109,0 ЭИД 50/гол безвреден для цыплят от суточного возраста при интраназальном, внутримышечном,подкожном и энтеральном методе введения. Реактогенность. Штамм -0017 Ла-Сота КазНИВИ вируса болезни Ньюкасла в дозах до 109,0 ЭИД 50/гол не реактогенен для цыплят (кур) от суточного возраста при интраназальном,внутримышечном, подкожном и энтеральном методе введения. Реверсибельность. Штамм -0017 Ла-Сота КазНИВИ вируса болезни Ньюкасла при репродукции последовательными пассажами в развивающихся куриных эмбрионах не восстанавливает и не приобретает патогенных свойств по отношению к восприимчивой птице. Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штамма -0017 Ла-Сота КазНИВИ вируса болезни Ньюкасла стабильно сохраняются в течение не менее 10 последовательных пассажей в развивающихся куриных эмбрионах. Сохраняемость. Штамм -0017 Ла-Сота КазНИВИ вируса болезни Ньюкасла в лиофильно высушенном состоянии с защитной средой,содержащей 4 сахарозы, 3 пептона и 1 желатина, в конечных концентрациях, не снижает свою биологическую активность в течение 5 лет при температуре минус 20 С и ниже, 12 месяцев при температуре 4-8 С. В нативном виде вирус сохраняет свои исходные биологические свойства в течение 12 месяцев при температуре минус 20 С и ниже, 30 суток при температуре 4-6 С. Штамм-0239 АПФ-2011 КазНИВИ инфекционной бурсальной болезни птиц Репродуктивные свойства. Штамм -0239 АПФ-2011 КазНИВИ вируса инфекционной бурсальной болезни кур репродуцируется в развивающихся куриных эмбрионах 6-7 суточного возраста, полученных от кур, свободных от патогенной микрофлоры, с развитием патологий в эмбрионе, в котором содержит репродуктивный вирус возбудителя инфекционной бурсальной болезни кур. Репродуктивный титр вируса инфекционной бурсальной болезни кур штамм 0239 АПФ-2011 КазНИВИ на 4-5 сутки после инокуляции вируса в теле эмбриона достигает 105,5106,5 ЭИД 50/см 3. Антигенные свойства. При интраназальном,подкожном и энтеральном введении репродуктивного вируса инфекционной бурсальной болезни кур штамм -0239 АПФ-2011 КазНИВИ в дозе от 102,0 ЭИД 50/гол в организме птицы 30 суточного возраста на 21 сутки после инокуляции формируются специфические вируснейтрализующие антитела в титрах 1,7-2,2 и преципитирующие в титре 3-5 2. Патогенные свойства. Репродуктивный вирус инфекционной бурсальной болезни кур штамм 0239 АПФ-2011 КазНИВИ является аттенуированным и не обладает патогенными свойствами по отношению к птице. Вирус инфекционной бурсальной болезни кур штамм 0239 АПФ-2011 КазНИВИ также не патогенен для лабораторных и сельскохозяйственных животных, а также для человека. Иммуногенные свойства. При однократном окулярном и энтеральном введении штамм -0239 АПФ-2011 КазНИВИ вируса инфекционного ларинготрахеита птиц в дозе от 102,0 ЭИД 50/гол в организме птицы от 30 суточного возраста на 14 сутки после инокуляции формируются специфические вируснейтрализующие антитела в титрах 1,7-2,2 , которые являются показателем напряженного иммунитета. Птица, имеющая антитела в указанных титрах,остается гарантированно защищенной от вирулентного вируса инфекционной бурсальной болезни кур. Иммунитет, сформированный на введение штамма штамм -0239 АПФ-2011 КазНИВИ вируса инфекционной бурсальной болезни кур после ревакцинации продолжается в течение всего периода эксплуатации. Безвредность. Штамм -0239 АПФ-2011 КазНИВИ вируса инфекционной бурсальной болезни кур в дозах до 105,0 ЭИД 50/гол безвреден для кур от 30 суточного возраста при интраназальном,внутримышечном, подкожном и энтеральном методе введения. Реактогенность. Штамм -0239 АПФ-2011 КазНИВИ вируса инфекционной бурсальной болезни кур в дозах до 105,0 ЭИД 50/гол клинически не реактогенен для кур от 20 суточного возраста при интраназальном, внутримышечном, подкожном и энтеральном методах введения. Реверсибельность. Штамм -0239 АПФ-2011 КазНИВИ вируса инфекционной бурсальной болезни кур при репродукции последовательными и перемежающимися пассажами в развивающихся куриных эмбрионах и цыплятах не восстанавливает и не приобретает патогенных свойств по отношению к восприимчивой птице. Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штамма -0239 АПФ-2011 КазНИВИ вируса инфекционной бурсальной болезни кур стабильно сохраняются в течение не менее 10 последовательных пассажей(срок исследования) в развивающихся куриных эмбрионах. Сохраняемость. Штамм -0239 АПФ-2011 КазНИВИ вируса инфекционной бурсальной болезни кур в лиофильно высушенном состоянии с защитной средой, содержащей 4 сахарозы, 3 пептона и 1 желатина, в конечных концентрациях,не снижает свою биологическую активность в течение 5 лет при температуре минус 40 С и ниже,36 месяцев при температуре минус 20 С, 12 месяцев при температуре 4-8 С. В нативном виде вирус сохраняет свои исходные биологические свойства в течение 12 месяцев при температуре минус 40 С и ниже, 30 суток при температуре 4-8 С. Пример 1. Для получения живой сухой ассоциированной вакцины против болезни Ньюкасла и инфекционной бурсальной болезни кур готовят биомассу штамма -0011 Ла-Сота КазНИВИ вируса болезни Ньюкасла и штамма 0239 АПФ-2011 КазНИВИ вируса инфекционной бурсальной болезни кур путем репродукции в развивающихся куриных эмбрионах. Для этого в параллельных или последовательных процессах развивающиеся куриные эмбрионы 6-7 и 10-11 суточного возраста, полученные от кур, свободных от патогенной микрофлоры, заражают в первом случае вирусом инфекционной бурсальной болезни кур в дозе 103,0 ЭИД 50, во втором - болезни Ньюкасла в дозе - 105,0 ЭИД 50 на эмбрион. Вирусы вводят в объемной дозе 0,1-0,3 см 3 в аллантоисную полость. Зараженные эмбрионы инкубируют при температуре 37 С влажности воздуха не ниже 50 с периодической сменой положения вокруг оси. Эмбрионы с вирусом болезни Ньюкасла инкубируют в течение 72 ч., а с вирусом инфекционной бурсальной болезни кур в течение 96 ч. По истечению срока инкубации эмбрионы овоскопируют,отделяют погибших,живых подвергают охлаждению при температуре 4-8 С в течение 12-24 ч. Охлажденные эмбрионы с каждым вирусом вскрывают в отдельности строго соблюдая условия асептики. От эмбрионов с вирусом болезни Ньюкасла в качестве биомассы вируса собирают экстраэмбриональную жидкость, а от эмбрионов с вирусом инфекционной бурсальной болезни кур тело самого эмбриона, удалив голову, конечности и крылья. Экстраэмбриональную жидкость очищают центрифугированием при 5000 в течение 30 минут,осадок удаляют, а надосадочную жидкость замораживают при температуре минус 40 С от 6 часов до использования в приготовлении бивалентной вакцины. Тело эмбриона однократно замораживают при температуре минус 40 С в течение от 12 ч и размораживают при комнатной температуре (22-25 С). Затем ее размельчают с помощью гомогенизатора до получения однородной массы с размерами частиц в диаметре не более 0,010,05 см, разбавляя фосфатно-буферным раствором с 7,2-7,4 до 50 концентрации. Гомогенизированную суспензию отделяют от тканевых частиц центрифугированием при 3000 в течение 30 минут. Очищенную экстраэмбриональную жидкость с вирусом болезни Ньюкасла и надосадочную жидкость гомогената эмбрионов с вирусом инфекционной бурсальной болезни кур стандартизируют по стерильности согласно ГОСТ 28085 и биологической активности путем титрования в развивающихся куриных эмбрионах. При соответствии биомасс вирусов по стерильности требованиям ГОСТ 28085 и наличии титра вируса болезни Ньюкасла не менее 109,0 ЭИД 50/см 3, вируса инфекционной бурсальной болезни кур не менее 105,0 ЭИД 50/см 3 их смешивают в соотношении 11 или 21, соответственно. Полученную смесь тщательно перемешивают,добавляют антибиотики из расчета 50 гентамицина на 1 дм 3 смеси вирусных биомасс. В полученную смесь вирусов в равном объемном соотношении добавляют защитную среду,содержащую 8 сахарозы, 6 пептона и 2 желатина. Для получения 100 см 3 защитной среды берут навеску сахарозы 8 г, пептона 6 г и желатина 2 г. Каждый компонент растворяют дистиллированной водой в отдельной посуде. В 45 см 3 дистиллированной воды, помещенной в первую колбу, растворяют навеску сахарозы, в таком же объеме дистиллированной воды, помещенной во второй колбе, растворяют навеску пептона, в 10 см 3 дистиллированной воды в третьей посуде растворяют навеску желатина. Посуды с растворами закрывают ватно-марлевой пробкой и стерилизуют автоклавированием при режиме текущего пара в течение 45 минут. В асептических условиях растворы смешивают в одной стерильной емкости, общий объем доводят стерильной дистиллированной водой до 100 см 3 и используют для стабилизации смеси биомасс вирусов болезни Ньюкасла и инфекционной бурсальной болезни кур после охлаждения до температуры не выше 25 С. Стабилизированную смесь вирусных биомасс фасуют по 1, 2 и 4 см 3 в специальные флаконы 4 емкостью 5-10 см 3, на горлышки флаконов вставляют резиновые пробки для сублимационной сушки, охлаждают до температуры минус 50 С в течение не менее 12 ч и подвергают сублимационному высушиванию в специальном для этих целей аппарате. По завершению сушки горлышки флаконов с сухой массой закрывают пробками под вакуумом и обкатывают алюминиевыми колпачками. Сублимационно высушенную стабилизированную смесь вирусов болезни Ньюкасла и инфекционной бурсальной болезни кур,после стандартизации иммунобиологических свойств используют в качестве живой сухой ассоциированной вакцины против болезни Ньюкасла и инфекционной бурсальной болезни птиц. Пример 2. Живую сухую ассоциированную вакцину против болезни Ньюкасла и инфекционной бурсальной болезни кур стандартизируют по стерильности, безвредности, титрам вирусов и иммуногенности. Стерильность устанавливают по ГОСТ 28085. Вакцина должна отвечать требованиям стандарта. Безвредность определяют на здоровых цыплятах 25-30 суточного возраста. Для этого готовят среднюю пробу вакцины путем растворения содержимого трех флаконов добавлением стерильной дистиллированной воды в объеме до объема вакцины перед сушкой. Растворенную вакцину во флаконах объединяют в одной емкости и получают среднюю пробу с содержанием концентрированных вирусов болезни Ньюкасла и инфекционной бурсальной болезни кур. Среднюю пробу растворенной вакцины инокулируют глазной пипеткой 10 цыплятам в дозе по 0,1 см 3 интраназально и по 0,05 см 3 - окулярно. За птицей наблюдают в течение 10 суток с регистрацией вероятных патологических изменений в клиническом состоянии. Вакцина считается безвредной, если все 10 цыплят привитых концентрированной вакциной останутся живыми и здоровыми в течение всего срока наблюдения. Допускается развитие у отдельных (1-3) цыплят легкого угнетения с понижением аппетита с 3-х суток после вакцинации, которая продолжается не более 1-2 суток с последующим выздоровлением птицы. Результаты испытания безвредности живой сухой бивалентной вакцины против болезни Ньюкасла и инфекционной бурсальной болезни кур приведены в таблице 1. Как видно из данных таблицы 1, все 10 цыплят,привитые ассоциированной вакциной в завышенной не менее чем 50 кратно дозе по сравнению с полевой иммунизирующей дозой, в течение всего периода наблюдения оставались живыми и здоровыми. Какие либо патологии общего и местного характера в клиническом состоянии привитых цыплят не были обнаружены. Полученные данные свидетельствуют о том, что ассоциированная вакцина является безвредной для птицы при завышенных дозах. Иммуногенность определяют на здоровых цыплятах 30-60 суточного возраста не имеющих в организме специфических антител на вирусы БН и ИББ птиц. Для этой цели используют 60 цыплят,которых делят на 3 группы по 20 голов. Из средней пробы растворенной вакцины готовят соответствующее разведение на физиологическом растворе хлорида натрия, чтобы в единице объема которого содержалась одна иммунизирующая доза препарата. Если во флаконе содержится 1000 прививных доз, то это количество умножают на цифру 0,15, которая является прививным объемом вакцины. Результат умножения составит цифру(10000,15) 150. Исходя из этого объем содержимого одного флакона доводят до 150 см 3 физиологическим раствором хлорида натрия и полученной суспензией иммунизируют цыплят первой и второй групп окулярно-интраназальным методом, закапывая 0,1 см 3 в носовую и 0,05 см 3 в глазную щели. Привитых цыплят содержат в течение 21 сутки отдельно от третьей группы,которая является контрольной. По истечению указанного времени от всех привитых и контрольных цыплят отбирают кровь, из которой получают сыворотку. Наличие иммунитета у птицы устанавливают по титрам гуморальных факторов иммунитета в сыворотке крови привитой птицы или по устойчивости их к вирулентному вирусу болезни Ньюкасла и инфекционной бурсальной болезни птиц. При установлении устойчивости к вирулентным вирусам птицу первой группы в количестве 20 голов и 10 контрольных цыплят из третьей группы заражают вирулентным вирусом болезни Ньюкасла путем инокуляции возбудителя внутримышечно или подкожно в дозе по 104,0 ЛД 50 (летальная доза),цыплят второй группы в количестве 20 голов и оставшихся 10 цыплят контрольной группы заражают вирулентным вирусом инфекционной бурсальной болезни птиц путем инокуляции возбудителя подкожно в дозе по 103,0 ИД 50(инфекционная доза). За зараженной птицей наблюдают ежедневно, регистрируя заболевших и выживших в течение 14 суток. Вакцина считается иммуногенной, если к завершению периода наблюдения в первой и второй группе останутся здоровыми и живыми не менее 80 цыплят, а в каждой контрольной группе заболеют не менее 80 болезнью Ньюкасла и инфекционной бурсальной болезнью птиц,соответственно. Результаты испытания иммуногенности живой сухой ассоциированной вакцины контрольным заражением вирулентными вирусами болезни Ньюкасла и инфекционной бурсальной болезни птиц приведены в таблице 2. Как видно из данных таблицы 2, все 20 цыплят первой группы, зараженные вирулентным вирусом болезни Ньюкасла, и все 20 цыплят второй группы,зараженные вирулентным вирусом инфекционной бурсальной болезни птиц, в течение всего периода наблюдения остались здоровыми и живыми, тогда как вся птица контрольной группы, зараженная параллельно возбудителем болезни Ньюкасла,заболела и пала, а вся птица контрольной группы,зараженная вирусом инфекционной бурсальной болезни птиц, также заболела 100, из которых 4 головы пали. Специфичность болезни Ньюкасла была установлена путем обнаружения специфических гемагглютининов вируса болезни Ньюкасла в мозге и преципитининов вируса инфекционной бурсальной болезни птиц в фабрициевой бурсе павших цыплят. Полученные данные свидетельствуют о достаточной иммуногенной активности живой сухой ассоциированной вакцины против болезни Ньюкасла и инфекционной бурсальной болезни птиц. При оценке напряженности иммунитета по гуморальным факторам иммунитета, в пробах сыворотки крови, собранных от цыплят на 21 сутки после вакцинации,устанавливают титр антигемагглютининов на вирус болезни Ньюкасла с помощью реакции торможения гемагглютинации против 4 ГАЕ этого вируса и титр прецпиитирующих антител на вирус инфекционной бурсальной болезни кур в реакции преципитации,поставленной в агаровом геле. Вакцина считается иммуногенной, если титр антигемагглютининов на вирус болезни Ньюкасла в не менее чем 80 проб сыворотки крови содержатся в титре не ниже 4 2 и титр преципитирующих антител на вирус инфекционной бурсальной болезни кур не менее чем 80 проб сыворотки крови выявляются в титре не ниже 3,0 2. Результаты определения иммуногенности по специфическим антителам на вирусы болезни Ньюкасла и инфекционной бурсальной болезни кур приведены в таблице 3. Как видно из данных таблицы 3, средний титр антигемагглютининов на вирус болезни Ньюкасла в пробах сыворотки крови, собранных на 21 сутки после вакцинации, составил 6,4 2, а средний титр преципитирующих антител на вирус инфекционной бурсальной болезни кур - 3,7 2. Выявленные тиры антител, специфичных вирусу болезни Ньюкасла инфекционной бурсальной болезни кур, свидетельствуют о достаточной иммуногенности ассоциированной живой сухой вакцины против болезни Ньюкасла и инфекционной бурсальной болезни птиц. Применение предлагаемого способа получения ассоциированной живой сухой вакцины против болезни Ньюкасла и инфекционной бурсальной болезни птиц позволит наладить производство этой вакцины и обеспечить потребность ветеринарной службы птицеводческих хозяйств в препарате. Использование ассоциированной вакцины,произведенной согласно данному способу, позволит эффективно с меньшими затратами предотвращать эпизоотические вспышки двух опасных вирусных заболеваний. Таблица 1 Результаты оценки клинической реакции цыплят на введение ассоциированной живой сухой вакцины против болезни Ньюкасла и инфекционной бурсальной болезни птиц в неразведенном виде Использованная птица Вид, возраст Кол-во, гол Цыплята 30-суточные 10 Объемная доза не разведенной вакцины, см 3 0,15 Клиническое состояние птицы Заболело, Местная Пало, гол Выжило, гол гол реакция 0 0 0 10 Таблица 2 Устойчивость цыплят, привитых ассоциированной живой сухой вакциной к вирулентным вирусам болезни Ньюкасла и инфекционной бурсальной болезни птиц Ассоциирован Привитые цыплята Вирулентный вирус Заболело, Пало, гол Выжило, гол ная вакцина Группа,Количество,гол Вид Доза, ЛД 50/ИД 50 против гол БН и ИББ 1 20 БН 104,0 0 0 20 2 20 ИББ 103,0 0 0 20 Контроль 3 10 БН 104,0 10 10 0 4 10 ИББ 103,0 10 4 6 Примечание БН - болезнь Ньюкасла ИББ - инфекционная бурсальная болезнь- мера измерения активности вируса БН- мера измерения активности вируса ИББ. Таблица 3 Титры антител на вирусы БН и ИББ в сыворотке крови цыплят, собранной на 21 сутки после вакцинации ассоциированной живой сухой вакциной Ассоциированная Привитые цыплята вакцина против Возраст, Кол-во,сут. гол. БН и ИББ 30 40 Иммунный статус птицы - титры противовирусных антител в сыворотке крови цыплят, 2 До На 21 сут после прививки БН ИЛТ БН ИББ 0 0 6,4 3,7 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения живой сухой ассоциированной вакцины против болезни Ньюкасла и инфекционной бурсальной болезни птиц, включающий накопление биомассы вирусов болезни Ньюкасла и инфекционной бурсальной болезни кур, смешивание их и стабилизацию защитной средой, а также сублимационное высушивание, отличающийся тем, что в качестве активного иммуногена используют биомассу штамма -0017 Ла-Сота КазНИВИ вируса болезни Ньюкасла и штамма -0239 АПФ-2011 КазНИВИ вируса инфекционной бурсальной болезни кур,которые объединяют, стабилизируют защитной средой, содержащей в конечной концентрации 4 сахарозы, 3 пептона, 1 желатина, и сублимируют во флаконах в объеме по 4,0 см 3.