Штамм вируса инфекционной бурсальной болезни кур av-0239, используемый для изготовления живой сухой вакцины против инфекционной бурсальной болезни кур

(51) 12 7/00 (2006.01) 61 39/12 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и может быть использовано при изготовлении вакцины против инфекционной бурсальной болезни птиц. Технический результат,обспечиваемый изобретением, выражается в получении штамма вируса инфекционной бурсальной болезни кур,пригодного для изготовления слабореактогенной,иммунологически эфективной живой сухой вакцины. Штамм вируса инфекционной бурсальной болезни кур -0239 АПФ-2011 КазНИВИ депонирован в лаборатории генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научноисследовательский ветеринарный институт,используемый для изготовления живой сухой вакцины против инфекционной бурсальной болезни кур.(72) Кутумбетов Леспек Бекболатович Мырзахметова Балжан Шайзадаевна Даутпаева Зауреш Жумагановна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(54) ШТАММ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОЙ БУРСАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ КУР -0239,ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ЖИВОЙ СУХОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОЙ БУРСАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ КУР Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и может быть использовано при изготовлении вакцины против инфекционной бурсальной болезни птиц. Известен штамм вируса инфекционной бурсальной болезни кур БГ, культивируемый в развивающихся куриных эмбрионах, используемый для изготовления вакцины против инфекционной бурсальной болезни кур. Патент Российской Федерации 2127602, кл. А 61 39/12, С 12 7/00,1999. Недостатком известного штамма вируса является то, что он обладает повышенный реактогенностью по отношению к цыплятам. Задачей изобретения является получение штамма вируса инфекционной бурсальной болезни кур,способного репродуцироваться в развивающихся куринных эмбрионах и обладающего пониженный реактогенностью с сахранением высокой иммунногенности. Технический результат,обспечиваемый изобретением, выражается в получении штамма вируса инфекционной бурсальной болезни кур,пригодного для изготовления слабореактогенной,иммунологически эфективной живой сухой вакцины. Штамм вируса инфекционной бурсальной болезни кур -0239 АПФ-2011 КазНИВИ депонирован в лаборатории генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научноисследовательский ветеринарный институт,используемый для изготовления живой сухой вакцины против инфекционной бурсальной болезни кур. Штамм вируса инфекционной бурсальной болезни кур -0239 АПФ-2011 КазНИВИ Штамм получен из слабо вирулентного вируса инфекционной бурсальной болезни кур,выделенного из фабрициевой бурсы курицы,доставленной из птице фабрика Алматинской области, путем последовательного пассирования в развивающий куриных эмбрионах и фибробласт куриных эмбрионах (РКЭ и ФКЭ). Полученный штамм характеризуется следующими признаками. Назначение штамма штамм вируса инфекционной бурсальной болезни кур -0239 АПФ-2011 КазНИВИ не обладает патогенностью по отношению к птице при различных местах заражения, активно репродуцируется в РКЭ и ФКЭ. Штамм вируса обладает высокой иммуногенной эффективностью и используется для изготовления сухой живой вакцины. Штамм вируса -0239 АПФ-2011 КазНИВИ получают путем репродукции в РКЭ 7-9 суточный возраста и культуре клеток ФКЭ. Морфологические признаки. Размер вирионов в пределах 60-65 нм. Культуральные свойства. Штамм вируса инфекционной бурсальной болезни кур 0239 АПФ-2011 КазНИВИ репродуцируется в РКЭ 7-9 суточный возраста и культуре клеток ФКЭ,накапливается в титрах 105,00-106,0 ЭИД 50/г,вызывающие 50 инфекционной эффект в РКЭ и 2 цитопатический в культуре клеток. Штамм вируса инфекционной бурсальной болезни кур -0239 АПФ-2011 КазНИВИ репродуцируется в РКЭ и культуре клеток ФКЭ без дополнительных адаптационных пассажей и накапливается в максимальных титрах на 4-5 сутки после инфицирования. Антигенные свойства. Штамм вируса инфекционной бурсальной болезни кур -0239 АПФ-2011 КазНИВИ в репродуктивном виде в организме иммунизированной птицы стимулирует образование вируснейтрализующих,комплементсвязывающих и преципитирующих антител в титрах 2,1,0,3 2, 51 2, 30,5 2,соответственно. Патогенные свойства Штамм вируса инфекционной бурсальной болезни кур -0239 АПФ-2011 КазНИВИ не обладает патогенностью по отношению к воспримчивой птице при аэрогенном,алиментарном, внутримышечном методах. Иммуногенные свойства Штамм вируса инфекционной бурсальной болезни кур -0239 АПФ-2011 КазНИВИ, репродуцированный в РКЭ или культуре клеток ФКЭ в дозе от 1000 ЭИД 50/г/ТЦД 50/см 3 обладает способностью стимулировать напряженный иммунитет у птиц(кур), привитых подкожным внутримышечным,энтеральным способами. Стабильность свойств при пассировании Основные иммуннобиологические свойства штамма вируса инфекционной бурсальной болезни кур 0239 АПФ-2011 КазНИВИ при пассировании в РКЭ и культуре клеток ФКЭ сохраняются на протяжении не менее 10 пассажей. Сохраняемость. Штамм вируса инфекционной бурсальной болезни кур -0239 АПФ-2011 КазНИВИ в виде тканевой и культуральной суспензий не снижает свою биологическую активность в течение 10 суток при температуре 41 С, 12 мес - при температуре минус 40 С. Пример 1. Для приготовления сухой живой вакцины против вируса инфекционной бурсальной болезни кур в начале готовят биомассу вируса инфекционной бурсальной болезни кур из штамма-0239 путем репродукции его в РКЭ или культуре клеток ФКЭ. Для этого РКЭ заражают в желточный мешок штаммом вируса инфекционной бурсальной болезни кур А-0239 АПФ-2011 КазНИВИ в дозе 103-104 ЭИД 50/см 3. За РКЭ наблюдают ежедневно в течение 4 сутки. Павшие РКЭ бракуют, а выжившые через 96-120 ч охлаждают при температуре минус 4-8 С в течение 24 часов. По истеченио указанного времени РКЭ выскрывают ассептически,собирают эмбрионы,удалив конечности и голову. Тело эмбрионов размельчают до гомогенной массы с помощью гомогенизатора, разбавляют фосфатно-буферным раствором до 10 концентрации по объму,фильтруют через 4-х слойной марлевой фильтр и центрифигуруют при 3000 д в теченя. Полученную недосадочную жидкость подвергают контролю на стерильность по ГОСТ 28085 и биологическую активность титрованием в РКЭ 6-7 суточного возраста. При соответствии полученной суспензии вируса по стерильности требованием ГОСТ 28085 и наличии титра вируса в ней не ниже 105,0 ЭИД 50/см 3,разливают в стерильных условиях во флаконы по 1,0-0,4 см 3, предварительно стабилизировав смешиванием в равных объмных пропорциях с защитной средой, содержащей сахарозу - 8,пептон - 6 и желатин - 2, и замораживают при температуре минус 50 С и ниже в течение не менее 12 часов, а затем подвергают сублимации с помощью специальной установки, создающей в камере вакуум менее 100 мм.рт.ст, и температуру конденсатора ниже минус 70 С. Сублимацию проводят до достижения остаточной влажности в препарате менее 5. Высушенную таким образом суспензию вируса, после герметизации тары(фасовки) специальными резиновыми пробками и закатывании аллюминиевыми колпачками,используют в качестве живой сухой вакцины против инфекционной бурсальной болезни кур (ИББК). Для получения культуральной вакцины из штамма -0239 вируса в дозе 0,01-0,05 ТЦД 50/см 3 заражают культуру клеток ФКЭ, выращенную в 1,5 литровых плоских матрасах с использованием питательной среды Игла, содержащей 10 сыворотки крови крупного рогатого скота. Культуру клеток инкубируют при температуре 37,00,5 С в течении 4-5 суток с однократный заменой питательной среды через 2 суток. Ежедневно монослой клеток микроскопируют и при развитии ЦПД в 80. По истечению указанного времени культуру клеток в матрасах с питательной средой замораживают при температуре минус 40 С и использованием механического встряхивания. Размороженную культуральную суспензию, ИББК стабилизируют защитной средой, 6 пептона, 8 сахароза, 2 желатина, путм смешивания в ровных объмных пропорциях. Смесь проверяют на стерильность по ГОСТ 29085 и титр репродуктивного вируса ИББК в культуре ФКЭ,приготовленный в пенициллиновых флаконах. Стерильную суспензию с титром вируса не ниже разливают в пенициллиновые 105,0 ЭИД 50/см 3 флаконы по 1 -4 см 3 замораживают при температуре минус 50 С и ниже и подвергают сублимационную высушиванию. Флаконы с сухой массой герметизируют и после стандартизации иммунобиологических свойств, используют в качестве вакцины. Хранят сухую вакцину при температуре 2-8 С. Вакцину подвергают стандартизации по стерильности согласно требованиям ГОСТ 28085 на безвредность. Для проверки безвредности вакцину в трх флаконах растворяют физиологическим раствором хлорида натрия объединямый в одном флоконе и без дополнительного разведение инокулируют внутримышечно 10 цыплятам 30 суточного возраста в дозе по 0,5 см 3. За цыплятами наблюдают в течение 10 суток. У всех привытых цыплят не должны развиваться какие-либо патологии местного и общего характера в течение всего периода наблюдения. Для проверки иммуногенности вакцину в дозе по 0,005 см 3 вводят внутримышечно 20 цыплятам 30 суточного возраста. Столько же цыплят аналогичного возраста оставляют в контроле без прививки вакциной. Через 21 сутки у всех 20 голов цыплят,подвергнутых вакцинации и всех 20 цыплят,находящихся в контроле собирают кровь, получают из нее сыворотку. Сыворотку инактивируют в течение 30 мин при температуре 56 С и используют в реакции диффузионный преципитации в агарном геле. Реакцию ставят против антивируса ИББК. Вакцина считается иммуногенной, если в сыворотке крови привитых цыплят будут выявлены антитела в титре не ниже 32. при отсутствии таких антител в сыворотке крови контрольных птиц. Имеющиеся иммунобиологические свойства штамма -0239 АПФ-2011 КазНИВИ вируса инфекционной бурсальной болезни кур позволяют производить высокоиммуногенную, безвредную,живую сухую вакцину, применение которой на практике позволит эффективно регулировать эпизоотическую ситуацию по инфекционной бурсальной болезни кур среди промышленного и приусадебного разведения. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм вируса инфекционной бурсальной болезни кур -0239 АПФ-2011 КазНИВИ,депонирован в лаборатории генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научноисследовательский ветеринарный институт,используемый для изготовления живой сухой вакцины против инфекционной бурсальной болезни кур.