Способ получения пептидов

2 ИЗОбрСТСНИС ОТНОСИТСЯ К СПОСОбЗМ ПОЛУЧСНИЯ ПСПТИДОВ, ОбЛЗДЯЮЩИХ ПРОТИ воопухолевой активностью и может быть использовано в медицине.ч Известен способ получения пептидов из человеческой сыворотки (1). По этому способу лимфобластоидная фракция опухолевых клеток извлекается из периферической кровеносной системы человека, которая пересаживается в брюшную полость мышей. Животных кормят обычным способом в течение 3 недель. За это время в брюшной полости мышей идет интенсивное развитие раковых клеток. Последние выделяются и подвергаются ферментативному гидролизу трипсином. Полученную фракцию промывают, вновь суспендируют в той же среде и получают суспензию, содержащую 1 х 105 клеток в мл. Полученную суспензию инкубируют при 37 С в течение 3-х дней. При этом получают пептидный препарат, обладаюЩий противоопухолевой активностью, который может подавлять рост макрофаговых моноцитов, тонзилярные опухолевые клетки, лейкемические клетки.Недостатком данного способа является многостадийность и длительность процесса получения препарата, который составляет 24-27 дней. Кроме того, расЩепление осуществляется ферментом трипсином, что увеличивает стоимость и,наконец, используются опухолевые клетки человека, т.е. сырье для получения препарата очень дефицитно и дорогостоящее.Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта.Поставленная цель достигается тем, что в способе получения пептидов из животного сырья, обладающих противоопухолевой активностью, согласно изобретению в качестве сырья используют пух и перо, проводят гидролиз О,3-0,5 раствором аммиака при соотношении 110-11 при температуре 15 О-155 С в течение 35-4 часов с последующей обработкой гидролизата ацетоном в соотношении 14-5,со ответственно.Изобретение иллюстрируется следующими примерамиПример 1. В автоклав из нержавеющей стали загружают сухое перо в количестве 60 г., заливают 600 мл 0,5 водного раствора аммиака (весовое соотношение сырье раствор аммиака равно 110). Герметически закрывают реактор,включают электрический обогрев, перемешивание и ведут гидролиз в течение 4 часов при температуре 150 С. В этих условиях гидролиз идет на 99. По окончании реакции гидролизат остужают и центрифугируют при 3 тыс. оборотах3 вают до 1/3 объема в вакууме при 30 мл (для сокращения расхода реагента) и до бавлении 5-7 капель н-октанола. К сгущенному экстракту добавляют 748 мл ацетона (15 по объему). Через 30 мнут отделяют выделившийся осадок декантацией,высушивают в вакуум-сушильном шкафу до удаления растворителя и измельчают. Получают аморфный порошок желтого цвета со специфическим запахом, хорошо растворимый в воде, нерастворимый в спирте, эфире, хлороформе, ацетоне. Выход 34,83 г или 5805 А.Пример 2. 60 г пера заливают 660 мл 0,3 раствора аммиака в весовом соотношении сьтрье раствор аммиака равном 111. Герметически закрывают автоклав, включают мешалку, электрический обогрев и проводят реакцию в течение 4 часов при температуре 150 С. Гидролиз в этих условиях идет на 98, к упаренному по примеру 1 фильтрату добавляют ацетон в сооношении 12 по объему и далее перерабатывают, как указано в примере 1.Получают аморфный порошок желтого цвета с характерным запахом, растворимый в воде, но не растворимый в органических растворителях. Выход 6,47 г или 10,78. Химический состав продукта представлен в таблице 3.Пример 3. 60 г пера загружают В автоклав из нержавеющей стали, заливают 600 мл 0,5 раствора ЫН 4 ОН, весовое соотношение сырье раствор 1 ЧН 4 ОН равно 110. Реакцию проводят в течение 4 часов в условиях примера 1. Охлажденньтй гидролизат центрифугируют при 3 тыс оборотах в минуту, образовавшийся фильтрат осаждают ацетоном в соотношении 13 по объему. В течение 30 мин. выпадает осадок, который сушат в вакуумсушильном шкафу. Образовавшийся порошок желтого цвета, хорошо растворим в воде, имеет специфический запах. Выход 25,49 г или 42,48. Его химический состав представлен в таблице 3.Пример 4. 60 г пера загружают в автоклав и добавляют 600 мл 0,5 раствора аммиака, весовое соотношение сьтрье раствор аммиака равно 110. Реакцию проводят в течение 3,5 часов при температуре 155 С и непрерывном перемецшвании. Полученный гидролизат остужатот и Центрнфугируют. Фильтрат упаривают до 13 первоначального объема, а затем осаждают ацетоном в соотношении, равном 14. Осадок сушат в вакуумсушильном шкафу. Полученный продукт-сьтпучий порошок, желтого цвета со специфическим запахом, нерастворимый в органических растворителях, но хорошо растворимый в воде. Выход - 32,46 г или 54,10. Хи мический состав продукта представлен в таблице 3.ЫН 4 ОН весовое соотношение сырье раствор ЫН 4 ОН равно 110. Герметически закрывают автоклав, включают электрический обогрев, перемешивание и проводят реакцию в течение 4 часов при температуре 150 оС. В описанных условиях гидролиз идет на 99. Остуженный гидролизат центрифугируют при 2,8 тыс. оборотов в минуту. Фильтрат упаривают до 1/3 первоначального объема в вакууме. К упаренному экстракту добавляют ацетон в количестве 16. Образовавшийся осадок отделяют декантацией высушивают в вакуумсушильном шкафу и измельчают. Получают аморфный порошок со специфическим запахом, желтого Цвета, хорошо растворимый в воде, но нерастворимый в органических растворителях. Выход 35,39 г или 5898. Химический состав препарата представлен в таблице 3. Таблица 1 Результаты гидролиза пера в зависимости от температуры при соотношенииТемпература гид- Степень гидролиза Окраска гидроИспользование низкой температуры при гидролизе пера приводит к неполному гидролизу, увеличение температуры до 160 оС приводит к частичному осмопению свободных аминокислот, при этом Цвет гидролизата коричневый. Наиболееблагоприятная температура для реакции 150-155 С.Таблица 2 Результаты исследования гидролиза пера в зависимости от времени реакции при соотношении сырье 0,5 раствор аммиака, равном 110ИССЛСДОВЗПИЯ результатов ГИДрОЛИЗЗ пера В ЗВВИСИМОСТИ ОТ ВрСМСНИ ГИДРОлиза ПОКЗЗЫВЗЮТ, ЧТО ОПТИМЗЛЬНЫМ ЯВЛЯСТСЯ 4 часа, ПрИ ЭТОМ наблюдается МНК симальный выход продукта - 57,92. Таблица 3Химический состав и выход продукта при разном соотношении ацетонтидролизат. Условия гидролиза температура - 150 Ссоотношение сырье 0,5 раствор аммиака равно 1610 в течение 4 Часов.