Вакцина против мыта лошадей “Акынтай”

(51) 61 39/09 (2006.01) 61 39/02 (2006.01) 61 31/04 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ безвредной и высокоэффективной вакцины против указанной инфекции. Вакцина против мыта лошадей, включающая мытный антиген, содержащий дополнительно антибиотики широкого спектра действия бициллин 5, сульфадимезин, триметоприм, и полиоксидоний в качестве адъюванта и иммуномодулирующего средства,при следующем соотношении компонентов, в 1 л антиген из штамма 1,8-2,01010 КОЕ бициллин-5 30-40 млн ЕД сульфадимезин 1800-2000 мг триметоприм 300-400 мг полиоксидоний 80-120 мг дистиллированная вода до 1 литра.(72) Каратаев Болат Шайзадаевич Намет Айдар Мырзахметулы Бижанов Алим Байжанович(54) ВАКЦИНА ПРОТИВ МЫТА ЛОШАДЕЙ АКЫНТАЙ Изобретение относится к области ветеринарии, в частности, к профилактике и терапии мыта лошадей. Известна вакцина против мыта лошадей,включающая мытный антиген, Т-активин и бициллин Патент РК 3681, кл. А 61 39/00, 1996. Недостатком известной вакцины является то, что в связи со снятием с производства отдельных компонентов препарата,дальнейшее ее изготовление не представляется возможным. Задачей изобретения является получение вакцины против мыта лошадей, с использованием новых, современных компонентов, позволяющих повысить иммуногенность,ускорить сроки выздоровления и исключить поствакцинальные осложнения. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в получении стабильной,безвредной и высокоэффективной вакцины против указанной инфекции. Вакцина против мыта лошадей, включающая мытный антиген, содержащий дополнительно антибиотики широкого спектра действия бициллин 5, сульфадимезин, триметоприм, и полиоксидоний в качестве адъюванта и иммуномодулирующего средства,при следующем соотношении компонентов, в 1 л антиген из штамма 1,8-2,01010 КОЕ бициллин-5 30-40 млн ЕД сульфадимезин 1800-2000 мг триметоприм 300-400 мг полиоксидоний 80-120 мг дистиллированная вода до 1 литра. Штамм бактерий,используемый для изготовления инактивированной вакцины против мыта лошадей, депонирован в лаборатории ТОО Аынтай и обладает следующими свойствами. Штамм бактерийКультуральные свойства. На П с добавлением 10 сыворотки крови и 1 глюкозы образует мелкие, округлой формы, росинчатые,прозрачные,гладкие,вязкой консистенции,сливающиеся колонии трудно снимаемые петлей. При просмотре на свет прозрачные с голубоватым оттенком, при хранении в течение 2-4 сут колонии становятся серовато-белыми, прозрачными, но сохраняют гладкие очертания. На МПБ с добавлением 10 сыворотки крови и 1 глюкозы присреды 7,4 дает рост в виде помутнения среды с образованием небольшого осадка на дне пробирки, при хранении в течение 35 сут бульон просветляется с образованием обильного сероватого осадка. Биохимические свойства. Обладает слабовыраженными биохимическими свойствами,не растет в МПБ с 40 желчи, не изменяет молоко с метиленовой синью, не свертывает молоко, не редуцирует лакмус, не ферментирует сорбит,маннит, глицерин, арабинозу, рафинозу, лактозу, не разжижает желатину, а разлагает глюкозу, сахарозу и мальтозу с образованием кислоты без газа. Маркерные признаки. Лизирует эритроциты лошади, белых мышей, слабо лизирует эритроциты 2 кроликов, не лизирует эритроциты золотистых хомячков, не ферментирует лактозу и манит, не продуцирует стрептолизин О,продуцирует гемолизин, лейкоцидии, токсин общего действия и агрессин. Антигенные свойства. Штамм преципитируется специфической стрептококковой сывороткой серологической группы С. Антигенная активность. При парентеральном введении в организм лошади вызывает выработку антител, выявляемых в НГА, титр 12800. Принадлежность к трофической группе. Прототроф. Генетические особенности штамма. Лизирует эритроциты лошади, белых мышей, слабо лизирует эритроциты кроликов, не лизирует эритроциты золотистых хомячков, не ферментирует лактозу и манит,не продуцирует стрептолизин-О,продуцирует гемолизин, лейкоцидин, токсин общего действия и агрессин. Продукт, синтезируемый штаммом - гемолитический токсин. Активность(продуктивность). Лизис эритроцитов лошади и белой мыши. Реактогенность. Обладает умеренно-средней реактогенностью для лошадей. Иммуногенность. При внутримышечном введении в дозе 2106 КОЕ продолжительность напряжения иммунитета у белых мышей составляет 12 мес. Стабильность при пассировании. Основные биологические свойства штамма стабильно сохраняются в течение 2 лет (срок наблюдения). Штамм хранится в темном месте, в лиофильно высушенном состоянии и в стеклянных ампулах под вакуумом при температуре от 4 до 10 С в течение 12 мес или в криозамороженном состоянии в стерильном растворе глицерола при температуре -75-80 С в течение 7 лет. Пример 1. Инактивированную вакцину против мыта лошадей готовят на основе штамма. Для приготовления вакцины против мыта лошадей культуру мытного стрептококка,полученную путем пассажей в МПБ, МПА, агар и бульон Хоттингера, с соблюдением условий стерильности смывают в сборник емкостью 10 000 см 3 (10 л), затем 0,85 раствором хлорида натрия концентрацию микробных клеток доводят до содержания 1 млрд КОЕ для мытных стрептококков в 1 см 3 и сливают в стерильных условиях в 510 литровые бутыли. Инактивацию бактерийных суспензий мытного стрептококка в бутылях с концентрацией 1 млрд КОЕ в 1 см 3 проводят путем автоклавирования при 120 С, в течение 30 минут при 1,2 атмосфер. Полученную инактивированную бактериальную массу, признанную стерильной и безвредной, в стерильных условиях разливают в 10 см 3 пенициллиновые флаконы в объеме 1 см 3 (для 10 доз вакцины), и в 20 см 3 пенициллиновые флаконы в объеме 2 см 3 (для 20 доз вакцины). К 10-20 см 3 пенициллиновым флаконам с инактивированной бактериальной массой добавляют(10 сахарозы и 0,5 желатины), и производят лиофильное высушивание. День окончания лиофилизации считают датой изготовления вакцины. Для приготовления 10 доз вакцины, к антигену(1 млрд КОЕ во флаконе), в виде комплекта добавляют в стерильных условиях 1,5 млн ЕД бициллина-5, 100 мг сульфадимезина, 20 мг триметоприма, 6 мг полиоксидония, плотно закрывают резиновой пробкой и обкатывают алюминиевым колпачком. Пример 2. Инактивированную вакцину против мыта лошадей используют внутримышечно,однократно,при следующем соотношении компонентов антиген из штамма 1,81010 КОЕ бициллин-5 20-25 млн ЕД сульфадимезин 1800 мг триметоприм 300 мг полиоксидоний 80 мг дистиллированная вода до 1 литра. Пример 3. Инактивированную вакцину против мыта лошадей используют внутримышечно,однократно,при следующем соотношении компонентов антиген из штамма 1,91010 КОЕ бициллин-5 25-30 млн ЕД сульфадимезин 1900 мг триметоприм 350 мг полиоксидоний 100 мг дистиллированная вода до 1 литра. Пример 4. Инактивированную вакцину против мыта лошадей используют внутримышечно,однократно,при следующем соотношении компонентов антиген из штамма 21010 КОЕ бициллин-5 30-40 млн ЕД сульфадимезин 2000 мг триметоприм 400 мг полиоксидоний 120 мг дистиллированная вода до 1 литра. Пример 5. Иммуногенную активность вакцины определяют на 1000 белых мышах, подобранных по принципу аналогов, со средним весом 18-20 г,разделенных на 10 групп по 100 голов в каждой, 9 опытных, а 10-я - контрольная. Препараты вводят внутримышечно, однократно,в дозе 0,1 см 3 на голову. На 21, 30 и 60-сутки иммунизированным и контрольным,не иммунизированным,белым мышам вводят вирулентную культурув дозе 3 50. Результаты испытания представлены в таблице 1. Таблица 1 Результаты определения иммуногенной активности вакцины против мыта лошадей на белых мышах Препараты соотношение компонентов в 1 л вакцины,кратность и доза на 1 голову Результат КоличестСрок заражения во проверки белых иммунитета,мышей,Выжило, Пало,дни гол. гол. гол 100 21 98 2 Процент иммунных животных 98 Из таблицы 1 видно, что на 60-е сутки после введения вакцины в 3-ей группе остались в живых 97 белых мышей - 97, в 6 и 9-ой группах получены аналогичные результаты, при 100 гибели мышей в контрольной группе. Пример 6. Для определения терапевтической эффективности вакцины проводят эксперименты на 4 группах белых мышей,предварительно зараженных вирулентной культурой мытного стрептококка. Животных разделяют на четыре группы, три опытных и четвертая - контрольная, по 100 голов в каждой. На 2-е сутки после заражения животным 1 группы вводят препарат по прописи описанной в примере 2, животным 2 группы вводят препарат по прописи описанной в примере 3, а животным 3 группы вводят препарат по прописи описанной в примере 4. Мышам препарат вводят внутримышечно,однократно, в дозе 0,1 см 3. На 2-е и 3-е сутки после введения препарата у мышей восстанавливается аппетит, животные выздоравливают, при гибели всех животных в контрольной группе. Пример 7. Терапевтическую эффективность препарата проверяют в неблагополучном по мыту лошадей хозяйстве. Для отбирают 40 голов жеребят больных мытом, первой группе животных - 20 голов- вводят препарат в терапевтической дозе 10 см 3, а второй контрольной группе 20 голов - препарат не вводят. На 4-5-е сутки после введения препарата у жеребят снижается температура тела до нормы,восстанавливается аппетит,полностью рассасываются отечность подчелюстных лимфатических узлов и животные выздоравливают,тогда как жеребята второй контрольной группы продолжают болеть клинической формой мыта. Пример 8. Напряженность иммунитета после введения вакцины определяют на заведомо здоровых 90 жеребятах. В эксперименте используют 6 групп лошадей, по 15 голов в каждой, три опытных и три контрольных. Вакцину вводят внутримышечно, в область крупа, однократно, в дозе 5,0 см 3. Через 2, 6 и 12 месяцев иммунизированных и контрольных жеребят заражают вирулентной культурой мытного стрептококка в дозе 3 ЛД 50 и учитывают результаты. Результаты испытаний представлены в таблице 2. Таблица 2 Результаты испытания напряженности иммунитета у жеребят иммунизированных вакциной против мыта лошадей Аынтай Вакцина против мыта лошадей При контрольном заражении в 1-й и 3-й группах заболевших животных не регистрируют (100 иммунных животных), а в 5-й опытной группе заболевает мытом в легкой форме 1 животное(93,33 иммунных животных). Тогда как, все животные контрольных групп заболевают клинической формой мыта. Всех заболевших животных лечат этой же вакциной в терапевтической однократной дозе 10 см 3. Использование вакцины против мыта лошадей Аынтай внутримышечно, однократно, в дозе 10 см 3 приводит к полному клиническому выздоровлению жеребят от мыта в течение 45 суток, а в дозе 5 см 3 предохраняет от заражения 4 93,3 привитых животных в течение 12 месяцев, а заболевшие животные переболевают мытом в легкой форме. Предлагаемая вакцина безвредна, не вызывает осложнений вакцинированных животных, обладает высокой активностью. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Вакцина против мыта лошадей, включающая мытный антиген, бициллин и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что используют антиген из штамма, и дополнительно содержит сульфадимезин и триметоприм в качестве антибиотиков широкого спектра действия, 31032 полиоксидоний в качестве адъюванта и иммуномодулирующего средства при следующем соотношении компонентов антиген из штамма 1,8-2,01010 КОЕ бициллин-5 сульфадимезин триметоприм полиоксидоний дистиллированная вода