Комплекс 1-(2-этоксиэтил)-4-(октин-1-ил)-4-ацилоксипиперидина с β-циклодекстрином, обладающий миелостимулирующией активностью

(51) 61 31/445 (2006.01) 61 31/724 (2006.01) 61 37/02 (2006.01) 07 211/14 (2006.01) 07 211/18 (2006.01) 07 211/22 (2006.01) 07 211/34 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Изобретение относится к области фармакологически активных веществ, конкретно к комплексу 1-(2-этоксиэтил)-4-(октин-1-ил)-4 ацилоксипиперидина с -циклодекстрином (-ЦД),обладающему миелостимулирующей активностью. Комплекс 1-(2-этоксиэтил)-4-(октин-1-ил)-4 ацилоксипиперидина с-циклодекстрином предложено получать взаимодействием 1-(2 этоксиэтил)-4-(октин-1-ил)-4-ацилоксипиперидинов с эквимолярным количествомциклодекстрина. Комплекс 1-(2-этоксиэтил)-4-(октин-1-ил)-4 ацилоксипиперидина с -циклодекстрином проявил себя как высокоактивное соединение, превышающее по активности эталонный препарат левамизол, к тому же он оказался менее токсичным в сравнении с ним.(72) Пралиев Калдыбай Джайловович Искакова Тыныштык Кадыровна Ибраева Сымбат Сериковна Малмакова Айгуль Ергазиевна Бактыбаева Ляйля Кыргызбаевна Сейлханов Тулеген Муратович(73) Акционерное общество Институт химических наук им. А.Б. Бектурова Изобретение относится к области фармакологически активных веществ, конкретно к комплексу 1-(2-этоксиэтил)-4-(октин-1-ил)-4 ацилоксипиперидина с -циклодекстрином (-ЦД) формулы где С 2 Н 5,С 6 Н 5,обладающему миелостимулирующей активностью. Из используемых в настоящее время в качестве миелостимулирующих средств наиболее близким по применению к заявляемому средству является левамизол /(М.Д. Машковский, Лекарственные средства, М., Медицина, 1986, т.2, стр. 169-170)/. Недостатком применяемого препарата является его высокая токсичность. Структурным аналогом заявленного соединения является комплекс сложного эфира 1-(2 этоксиэтил)-4-алкинилпиперидин-4-ола с циклодекстрином, обладающий анальгезирующим и спазмолитическим действием (Предпатент 19826 РК, опубл. 15.08.2008, бюл. 8). Задача изобретения состоит в расширении ассортимента миелостимулирующих лекарственных средств. Технический результат изобретения повышение активности и снижение токсичности. Технический результат достигается комплексом 1-(2-этоксиэтил)-4-(октин-1-ил)-4 ацилоксипиперидина с где С 2 Н 5,С 6 Н 5,обладающим миелостимулирующей активностью. Для получения комплекса 1-(2-этоксиэтил)-4(октин-1-ил)-4-ацилоксипиперидина с циклодекстрином-циклодекстрин и 1-(2 этоксиэтил)-4-(октин-1-ил)-4-ацилоксипиперидин берутся в эквимолярном соотношении. Полученный комплекс представляет собой аморфный порошок,плавящийся выше 240 С с разложением. Пример 1 Комплекс 1-(2-этоксиэтил)-4-(октин-1-ил)-4 пропионилоксипиперидина с -циклодекстрином. Для получения комплекса включения смешивают растворы 0,58 г (0,0017 моль) 1-(2-этоксиэтил)-4(октин-1-ил)-4-пропионилоксипиперидина в 20 мл этилового спирта и 1,95 г (0,0017 моль) (циклодекстрина в 50 мл дистиллированной воды. Смесь помещают в сушильный шкаф, выпаривают этанол и воду при 50-55 С. Получают 2,40 г (94,9 от теор.) комплекса включения 1-(2-этоксиэтил)-4(октин-1-ил)-4-пропионилоксипиперидина с-циклодекстрином в виде белого порошка,плавящегося с разложением выше 240 С. Вычислено,С 50,57 Н 7,131,23. 6610538. Найдено,С 50,59 Н 7,12. Пример 2 Комплекс 1-(2-этоксиэтил)-4-(октин-1-ил)-4 бензоилоксипиперидина с -циклодекстрином. Для получения комплекса включения смешивают растворы 1 г (0,0026 моль) 1-(2 этоксиэтил)-4-(октин-1-ил)-4 бензоилоксипиперидина в 30 мл этилового спирта и 2,95 г (0,0026 моль) (-циклодекстрина в 90 мл дистиллированной воды. Смесь помещают в сушильный шкаф, выпаривают этанол и воду при 50-55 С. Получают 3,85 г (97,20 от теор.) комплекса включения 1-(2-этоксиэтил)-4-(октин-1 ил)-4-бензоилоксипиперидина с -циклодекстрином в виде белого порошка, плавящегося с разложением выше 240 С. Вычислено,С 52,14 Н 6,910,92 6610538. Найдено,С 52,19 Н 6,61. Исследование биологической активности. Комплекс 1-(2-этоксиэтил)-4-(октин-1-ил)-4 пропионилоксипиперидина с -циклодекстрином под лабораторным шифром БИВ-71 и комплекс 1-(2 этоксиэтил)-4-(октин-1-ил)-4 бензоилоксипиперидина с (-циклодекстрином под лабораторным шифром БИВ-81 изучены на миелостимулирующее действие и острую токсичность. Данные сопоставлялись с показателями левамизола. Результаты исследования представлены в таблицах 1-3. ПРИМЕР 3 Токсичность препарата Для исследования острой токсичности группам животных (по 6-8 в каждой) вводили перорально исследуемое соединение в различных дозах и наблюдали за животными в течение 5 суток. У мышей регистрировали внешние признаки интоксикации, продолжительность токсического действия и время гибели животных. Для количественной оценки острой токсичности рассчитывали показатель 50 (доза, вызвавшая гибель 50 исследуемых животных). Данные показатели сопоставлялись с аналогичными показателями левамизола. О степени токсичности препарата судили по показателю 50 в опытной и контрольной группах животных. Таблица 1 Показатели 50 препаратов БИВ-71 и БИВ-81 и левамизола Соединение БИВ-71 БИВ-81 левамизол Как следует из таблицы 1, токсическая доза препаратов БИВ-71 и БИВ-81 составила 583,6 и 531,2 мг/кг, соответственно, что в 2,9 и 2,7 раза ниже токсичности левамизола, используемого в качестве стандарта. ПРИМЕР 4 Изучение миелостимулирующей активности Функциональную нагрузку иммунная система осуществляет с помощью факторов врожденного и приобретенного (или адаптивного) иммунитета. При нарушении количества и функциональной активности клеток иммунной системы развиваются заболевания иммунитета иммунодефициты,аллергические,аутоиммунные и лимфопролиферативные процессы. Лечение этих заболеваний осуществляется с помощью комплекса методов иммунотерапии, одним из которых является применение иммунотропных лекарственных препаратов. Различают три основные группы иммунотропных лекарственных препаратов иммуномодуляторы,иммуностимуляторы,иммунодепрессанты. Спектр синтетических препаратов, применяющихся в медицинской практике в качестве иммуностимулирующих средств, очень ограничен. Препараты животного происхождения генетически детерминированы и, следовательно, не всегда вызывают положительную динамику у больных. Препараты, получаемые из крови,отличаются высокой стоимостью и сенсебилизирующей активностью. Методы. В работе использовали здоровых половозрелых животных - лабораторных крыс обоего пола, 10-15 недельного возраста, массой тела 210-280 г. Разброс в группах по исходной массе тела не превышал 10. Животные были получены одновременно из одного питомника - биологической клиники факультета биологии и биотехнологии КазНУ имени аль-Фараби. До и в период эксперимента контрольные и опытные животные содержались в одинаковых стандартных условиях,на стандартном рационе, по 6 особей в клетке. Все виды экспериментов проводились с соблюдением хронобиологических принципов работы. Забор крови проводили из орбитальной вены крыс,наркотизированных слабым эфирным наркозом в 09.00 часов утра. Анализ крови проводили на гематологическом анализаторе для лабораторных животных(пр-во , Дания). Иммуносупрессию вызывали внутримышечным введением цитостатика циклофосфамида натрия в дозе 30 мг/кг веса животного. Опытным группам животных соединения вводили в дозе 10 мг/мл(растворитель физиологический раствор),внутримышечно в объеме 0,5 мл ежедневно в течение 3 дней, спустя три дня после последнего введения определяли количество клеток в периферической крови. Контрольным животным в таком же объеме и режиме вводили физиологический раствор. Препаратом сравнения являлся левамизол и пантогематоген (М.Д.Машковский, Лекарственные средства, М., Медицина, 1986, т.2, с.169-170). Результаты и их обсуждение. Уже на 1-ые сутки после введения циклофосфамида натрия регистрировалась тяжелая иммуно- и гемодепрессия с поражением как лейкоцитарных клеток, так и красных кровяных клеток. За контроль по уровню поражения кроветворных пулов был взят 3-й день после введения иммунодепрессанта. Проведя анализ гемограммы крови было выявлено, что в большой степени пострадал лейкоцитарный пул. Общий лейкоцитарный показатель с уровня интактных животных (9,151,36)109/ крови упал до(2,370,16)109/ в 3,86 раза (Р 0,05). В лейкограмме снизились абсолютные и относительные значения агранулоцитарных и гранулацитарных лейкоцитов. Среди агранулоцитов относительные значения лимфоцитов со значения (5,460,18)109/ крови упали в 3,41 раза до значения (1,600,2)109/ тогда как относительные значения со значения интактных животных (68,0312,3) крови упали лишь в 1,44 раза до (47,21,8) крови. Критическое падение показателей наблюдалось во всех субпопуляциях крови. Снижение абсолютных значений гемограммы наблюдалось более чем в 2 и 3 раза, а относительные значения уменьшались менее интенсивно, в 1,5 раза. Например, абсолютные значения моноцитарно-эозинофильных клеток со значения (0,50,02)109/ крови снизилось до значения (0,120,10)109/ крови, т.е. в 4,17 раза(р 0,05), тогда как относительное значение(6,281,24) упало лишь до (4,91,3), что составило лишь 1,28-кратную разницу в значениях. Абсолютный показатель гранулоцитарных клеток со значения (3,641,22)109/ упал до (0,650,3)109/,т.е. в 5,6 раза (р 0,01). А относительное значение гранулоцитов со значения (40,08,36) упало в 1,53 раза, достигнув значения (26,184,5). То, что абсолютные значения снижаются значительнее, чем относительные, можно объяснить тем, что абсолютные значения более зависимы от значения общего лейкоцитарного показателя,который интенсивно снижался во время иммунодепрессивной интоксикации организма животных. Циклофосфамид вызывал изменения в значениях эритроцитарных и тромбоцитарных клеток, но более, чем 2-х кратного снижения не было зарегистрировано. Уровень эритроцитарных клеток(4,931,3)1012/ крови, т.е. снижение наблюдалось в 1,32 раза. Уровень гемоглобина упал в 1,55 раза. У интактных животных он составлял 140,716,7 г/ крови. И после интоксикации упал до 90,7512,0 г/ крови. Но гематокритное значение с (39,86,3)(21,217,79). Критическое снижение наблюдалось в тромбоцитарных показателях. Уровень интактных животных составлял (660,25)109/ крови и при искусственно вызванном иммунодепрессивном синдроме составил (70,543,2)109/ крови, что составило более 9,36-кратное снижение (Р 0,01). Вызвав искусственный иммунодепрессивный синдром животным вводили новые соединения БИВ-71 и БИВ-81 в дозе 5 мг/кг в объеме 0,2 мл. Таблица 2 Лейкограмма крови Шифр соединения Показатели лейкограммы и гемограммы крови в группе введения соединений БИВ-71 и БИВ-81 были на уровне показателей крови в группе введения препарата сравнения левамизола (таблицы 1, 2). Они стимулировали пролиферативную активность клеточных пулов костного мозга и стимулировали выброс клеток из периферических лимфомиелоидных органов. Общий лейкоцитарный показатель составлял для БИВ-71 (3,280,03)109/ и(4,151,20)109/ и показателя контрольной группы (2,790,93)109/ крови. Относительное значение гранулоцитов составило для БИВ-71 (29,971,0) и БИВ-81 (53,13,0) против контрольного показателя (43,359,3). Значимых отличий в показателях моноцитов и лимфоцитов зарегистрировано не было. Таблица 3 Гемограмма крови до и после введения исследуемых соединений Показатели- общий лейкоцитарный показатель- гранулоцитарный показатель- относительный лимфоцитарный показатель относительный гранулоцитарный показатель- общий эритроцитарный показатель- гемоглобин НСТ - гематокрит- средний объем эритроцитов МСН - среднее содержание гемоглобина МСНС - средняя концентрация гемоглобина в эритроцитах- широта распределения эритроцитов- тромбоцитарный показатель РСТ - количество тромбокрита- средний объем тромбоцитов- широта распределения тромбоцитов. Эритроцитарный показатель на 6-ой день после первичного введения соединения БИВ-71 составил 4,90,061012/, превышая показатели в группах введения соединения БИВ-81 (4,5070,006)1012/ и левамизола (4,691,36)1012/ крови. Уровень тромбоцитов достиг к 6-му дню наблюдения при введении БИВ-71 достиг(395,37,5)109/ и левамизола (318,2599)109/ против значения (70,543)109/ крови при миелосупрессии. Таким образом, высокой миелостимулирующей активностью в отношении пролиферативной активности лимфомиелоидных пулов крови и стимуляции выбросов из вторичных лимфомиелоидных органов на фоне циклофосфамидной миелосупрессии обладали соединения БИВ-71 и БИВ-81. Показатели левамизола не отличались от показателей контрольной группы. В результате проведенных исследований установлено, что БИВ-71 и БИВ-81 в сериях опытов по изучению миелостимулирующего действия проявили себя как высокоактивные соединения,превышающие активность эталонных препаратов по ряду показателей. Кроме того, они оказались малотоксичным в сравнении с эталонным препаратом. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Комплекс 1-(2-этоксиэтил)-4-(октин-1-ил)-4 ацилоксипиперидина с -циклодекстрином формулы