Комплекс 3-(3-этоксипропил)-7-[2-(пиперазин-1-ил)-3,7-диазабицикло[3.3.1.]нонана с β-циклодекстрином, обладающий миелостимулирующей активностью

(51) 61 31/495 (2006.01) 61 31/4995 (2006.01) 61 47/40 (2006.01) 61 37/02 (2006.01) 07 471/08 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ комплексу 3-(3-этоксипропил)-7-2-(пиперазин-1 ил)этил-3,7-диазабицикло 3.3.1 нонана с-циклодекстрином предложено получать взаимодеиствием 3-(3-этоксипропил)-7-2(пиперазин-1-ил)этил-3,7 диазабицикло 3.3.1 нонана с эквимолярным количеством -циклодекстрина. Комплекс 3-(3-этоксипропил)-7-2-(пиперазин-1 ил)этил-3,7-диазабицикло 3.3.1 нонана с-циклодекстрином проявил себя как высокоактивное соединение, превышающее по активности эталонный препарат левамизол, к тому же он оказался менее токсичным в сравнении с ним.(72) Пралиев Калдыбай Джайловович Искакова Тыныштык Кадыровна Малмакова Айгуль Ергбосыновна Ибраева Сымбат Сериковна Бактыбаева Ляйля Кыргызбаевна Сейлханов Тулеген Муратович(73) Акционерное общество Институт химических наук им. А.Б. Бектурова(57) Изобретение относится к области фармакологически активных веществ, конкретно к Изобретение относится к области фармакологически активных веществ, конкретно к комплексу 3-(3-этоксипропил)-7-2-(пиперазин-1 ил)этил-3,7-диазабицикло 3.3.1 нонана с обладающему миелостимулирующей активностью. Из используемых в настоящее время в качестве миелостимулирующих средств наиболее близким по применению к заявляемому средству является левамизол/(М.Д.Машковский,Лекарственные средства, М., Медицина, 1986, т.2, с.169-170)/. Недостатком применяемого препарата является его высокая токсичность. Структурным аналогом заявленного соединения является оксалат 3-(2-этоксиэтил)-7-(2 морфолиноэтил)-3,7-диазабицикло 3.3.1 нонана,обладающий антибактериальным и местноанестезирующим действием (Предпатент РК 11198, бюл. 2, 2002). Задача изобретения состоит в расширении ассортимента миелостимулирующих лекарственных средств. Технический результат изобретения повышение активности и снижение токсичности. Технический результат достигается комплексом 3-(3-этоксипропил)-7-2-(пиперазин-1-ил)этил-3,7 диазабицикло 3.3.1 нонана с -циклодекстрином формулы 1 обладающим миелостимулирующей активностью. Для получения комплекса 3-(3-этоксипропил)-72-(пиперазин-1-ил)этил-3,7 диазабицикло 3.3.1 нонана с -циклодекстрином берутся в эквимолярном соотношении. Полученный комплекс представляет собой аморфный порошок,плавящийся выше 240 С с разложением. Пример 1 Комплекс 3-(3-этоксипропил)-7-2-(пиперазин-1 ил)этил-3,7-диазабицикло 3.3.1 нонана с-циклодекстрином . Для получения комплекса включения смешивают растворы 1,0 г (0,0031 моль) 3-(3-этоксипропил)-7-2-(пиперазин-1-ил)этил-3,7 диазабицикло 3.3.1 нонанав 15 мл этилового спирта и 3,5 г (0,00309 моль) -циклодекстрина в 50 мл дистиллированной воды. Смесь помещают в сушильный шкаф, выпаривают этанол и воду при 50-55 С. Получают 3,9 г (86,7 от теор.) комплекса включения 3-(3-этоксипропил)-7-2-(пиперазин-1 ил)этил-3,7-диазабицикло 3.3.1 нонана с-циклодекстрином под лабораторным шифром БИВ-82 изучен на миелостимулирующее действие и острую токсичность. Данные сопоставлялись с показателями левамизола. Результаты исследования представлены в таблицах 1,2. Пример 2 Токсичность препарата Для исследования острой токсичности группам животных (по 6-8 в каждой) вводили перорально исследуемое соединение в различных дозах и наблюдали за животными в течение 5 суток. У мышей регистрировали внешние признаки интоксикации, продолжительность токсического действия и время гибели животных. Для количественной оценки острой токсичности рассчитывали показатель 50 (доза, вызвавшая гибель 50 исследуемых животных). Данные показатели сопоставлялись с аналогичными показателями левамизола. О степени токсичности препарата судили по показателю 50 в опытной и контрольной группах животных. Таблица 1 Показатели 50 БИВ-82 и левамизола Соединение БИВ-82 левамизол Как следует из таблицы 1, токсическая доза препарата БИВ-82 составила 667,8 мг/кг, что в 3,34 раза ниже токсичности левамизола, используемого в качестве стандарта. Пример 3 Изучение миелостимулирующей активности В исследовании использовали здоровых половозрелых животных - лабораторных крыс обоего пола, 10-15 недельного возраста, массой тела 210-280 г. Разброс в группах по исходной массе тела 2 50 (мг/кг) 667,8 200,0 не превышал 10. Животные были получены одновременно из одного питомника - биологической клиники факультета биологии и биотехнологии КазНУ им. аль-Фараби. До и в период эксперимента контрольные и опытные животные содержались в одинаковых стандартных условиях, на стандартном рационе, по 6 особей в клетке. Все виды экспериментов проводились с соблюдением хронобиологических принципов работы. Забор крови проводили из орбитальной вены крыс, 29710 наркотизированных слабым эфирным наркозом в 09.00 часов утра. Анализ крови проводили на гематологическом анализаторе для лабораторных животных(пр-во , Дания). Иммуносупрессию вызывали внутримышечным введением цитостатикациклофосфамида натрия в дозе 30 мг/кг веса животного. Опытным группам животных соединения вводили в дозе 10 мг/мл(растворитель физиологический раствор),внутримышечно в объеме 0,5 мл ежедневно в течение 3 дней, спустя три дня после последнего введения определяли количество клеток в периферической крови. Контрольным животным в таком же объеме и режиме вводили физиологический раствор. Препаратом сравнения являлся левамизол и пантогематоген(М.Д. Машковский, Лекарственные средства, М.,Медицина, 1986, т.2, с.169-170). Уже на 1-ые сутки после введения циклофосфамида натрия регистрировалась тяжелая иммуно- и гемодепрессия с поражением как лейкоцитарных клеток, так и красных кровяных клеток. За контроль по уровню поражения кроветворных пулов был взят 3-й день после введения иммунодепрессанта. Проведя анализ гемограммы крови, было выявлено, что в большой степени пострадал лейкоцитарный пул. Общий лейкоцитарный показатель с уровня интактных животных (9,151,36)109/ крови упал до(2,370,16)109/ в 3,86 раза (Р 0,05). В лейкограмме снизились абсолютные и относительные значения агранулоцитарных и гранулацитарных лейкоцитов. Среди агранулоцитов относительные значения лимфоцитов со значения(5,460,18)109/ крови упали в 3,41 раза до значения (1,600,2)109/, тогда как относительные значения со значения интактных животных(68,0312,3) крови упали лишь в 1,44 раза до(47,21,8) крови. Критическое падение показателей наблюдалось во всех субпопуляциях крови. Снижение абсолютных значений гемограммы наблюдалось более чем в 2 и 3 раза, а относительные значения уменьшались менее интенсивно, в 1,5 раза. Например, абсолютные значения моноцитарно-эозинофильных клеток со значения (0,50,02)109/ крови снизилось до значения (0,120,10)109/ крови, т.е. в 4,17 раза(р 0,05), тогда как относительное значение(6,281,24) упало лишь до (4,91,3), что составило лишь 1,28-кратную разницу в значениях. Абсолютный показатель гранулоцитарных клеток со значения (3,641,22)109/ упал до (0,650,3)109/,т.е. в 5,6 раза (р 0,01). А относительное значение гранулоцитов со значения (40,08,36) упало в 1,53 раза, достигнув значения (26,184,5). То, что абсолютные значения снижаются значительнее, чем относительные, можно объяснить тем, что абсолютные значения более зависимы от значения общего лейкоцитарного показателя, который интенсивно снижался во время иммунодепрессивной интоксикации организма животных. Циклофосфамид вызывал изменения в значениях эритроцитарных и тромбоцитарных клеток, но более, чем 2-х кратного снижения не было зарегистрировано. Уровень эритроцитарных клеток(4,931,3)1012/ крови, т.е. снижение наблюдалось в 1,32 раза. Уровень гемоглобина упал в 1,55 раза. У интактных животных он составлял 140,716,7 г/ крови. И после интоксикации упал до 90,7512,0 г/ крови. Но гематокритное значение с (39,86,3) упало в 1,88 раза (Р 0,05) раза, достигнув значения(21,217,79). Критическое снижение наблюдалось в тромбоцитарных показателях. Уровень интактных животных составлял (660,25)109/ крови и при искусственно вызванном иммунодепрессивном синдроме составил (70,543,2)109/ крови, что составило более 9,36-кратное снижение (Р 0,01) Вызвав искуственный иммунодепрессивный синдром животным вводили соединение БИВ-82. Таблица Гемограмма крови до и после введения БИВ-82 Показатели относительный гранулоцитарный показатель- общий эритроцитарный показатель- гемоглобин НСТ - гематокрит- средний объем эритроцитов МСН - среднее содержание гемоглобина МСНС - средняя концентрация гемоглобина в эритроцитах- широта распределения эритроцитов- тромбоцитарный показатель РСТ - количество тромбокрита- средний объем тромбоцитов- широта распределения тромбоцитов При проведении сравнительного анализа показателей лейкограммы и гемограммы крови в группе введения соединения БИВ-82 и препарата сравнения левамизола можно отметить, что показатели в группе введения соединения БИВ-82 были выше. Общий лейкоцитарный показатель отличался на 0,81 значения (4,960,03)109/ крови против (4,151,2)109/ крови, абсолютные значения лимфоцитов (2,070,05)109/ против (2,60,84)109/Ь, гранулоцитов (2,570,17)109/ против(1,290,14)109/. Также отличались и относительные значения в показателях субпопуляций лейкоцитов. Соединение БИВ-82 обладает стимулирующим действием по отношению к лейкопоэзу на уровне левамизола. Показатели крови животных, получавших соединение БИВ-82. В первую очередь следует отметить, что уровень лейкоцитарных клеток вырос до (4,960,03)109/ крови, против значения контрольных животных (2,790,65)109/ крови, т.е. наблюдалась 1,78-кратная разница. Следует отметить, что соединение БИВ-82 значимо стимулировало деление гранулоцитов,чем агранулоцитов. Слабо стимулировало пролиферативную активность лимфоцитарных клеток. После проведенного лечения соединением абсолютное значение лимфоцитов составило(2,070,05)109/ крови против контрольного значения (1,550,25)109/ крови, т.е. в 1,34 раза превосходило контрольное значение. А относительные значения лимфоцитов в группе введения соединения БИВ-82 даже в 1,93 раза были меньше контрольных(41,770,76). Уровень гранулоцитарных лейкоцитов, как абсолютные, так и относительные значения выросли в группе введения соединения БИВ-82. Абсолютное значение гранулоцитов в группе введения соединения БИВ-82 составило(43,359,3)109/ крови, т.е. в 1,19 раза (р 0,01) превышая контроль. Относительное значение в группе введение соединение БИВ-82 также превосходило контрольные значения в 2,27 раза. Значимых отличий в значениях эритроцитарных клеток не было зарегистрировано, ни в общем эритроцитарном показателе, ни в гемоглобине,гематокрите и т.д. Следует отметить изменения в уровне тромбоцитарных клеток, так против контрольного показателя (447,051,0)109/ крови в группе введения БИВ-82 он составил(546,3347,7)109/ крови. В результате проведенных исследований установлено, что БИВ-82 в сериях опытов по изучению миелостимулирующего действия проявил себя как высокоактивное соединение, превышающее активность эталонных препаратов по ряду показателей. Кроме того,он оказался малотоксичным в сравнении с эталонным препаратом. Описанное вещество синтезируется на основе доступного химического сырья. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Комплекс 3-(3-этоксипропил)-7-2-(пиперазин-1 ил)этил-3,7-диазабицикло 3.3.1 нонана с циклодекстрином формулы