Антимикробное средство

(51) 61 31/445 (2011.01) 61 31/724 (2011.01) 61 31/04 (2011.01) 07 211/14 (2011.01) 07 211/16 (2011.01) 07 211/68 (2011.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Изобретение относится к области фармакологически активных веществ к применению комплекса гидрохлорида 1 -(2-пропионилоксиэтил)2,5-диметил-4-пропионилоксииминопиперидина с циклодекстрином, в качестве антимикробного средства в отношении диких чувствительных и диких мультирезистентых штаммов микобактерий туберкулеза, а также против музейного штамма грамположительных бактерий). При этом он в 3,9 раза менее токсичен, чем широко используемый в медицинской практике рифампицин.(72) Пралиев Калдыбай Джайловович Искакова Тыныштык Кадыровна Абдильданова Асель Абаевна Ахматуллина Назира Бадретдиновна Ташенова Айман Алиппековна Бисмилда Венера Лазаревна(73) Акционерное общество Институт химических наук им. А.Б. Бектурова(56) 1) Машковский М.Д. Лекарственные средства. М., 1988, часть 2, с. 257-258 2) Инновационный патент РК 20527 РК, 2008 Изобретение относится к области фармакологически активных веществ, конкретно, к применению комплекса гидрохлорида 1-(2 пропионилоксиэтил)-2,5-диметил-4 пропионилоксииминопиперидина с циклодекстрином в качестве антимикробного средства. Из используемых в настоящее время в качестве антимикробных средств наиболее близким по применению к заявляемому средству является рифампицин /Машковский М.Д. Лекарственные средства. М., 1988, часть 2, с. 257-258/. Недостатком применяемого препарата является его высокая токсичность. Задачей изобретения является расширение арсенала средств антимикробного действия. Технический результат - создание нового антимикробного средства. Технический результат достигается применением комплекса гидрохлорида 1 -(2 пропионилоксиэтил)-2,5-диметил-4 пропионилоксиими-нопиперидина с циклодекстрином в качестве антимикробного средства. Синтез и физико-химические характеристики комплекса гидрохлорида 1-(2-пропионилоксиэтил)2,5-диметил-4-пропионилоксииминопиперидина с циклодекстрином приведены в Инновационном патенте 20527 РК, бюл. 12, 15.12.2008. ПРИМЕР. Комплекс гидрохлорида 1-(2-гидроксиэтил)-2,5 диметил-4 пропионилоксииминопиперидина с циклодекстрином под лабораторным шифром ПВТ 43 изучен на антимикробную активность и острую токсичность. Бактериостатическое и бактерицидное действие в отношении диких чувствительных штаммов микобактерий туберкулезаи острую токсичность. Данные сопоставлялись с показателями рифампицина. Результаты исследования представлены в таблицах 1, 2. В качестве экспериментальных животных использованы белые беспородные мыши. Высокая восприимчивость к туберкулезу этих животных позволяет создать эффективную модель туберкулезной инфекции для изучения химиотерапевтического эффекта исследуемого соединения. Установлено, что резистентность к туберкулезу у мышей повышается с возрастом и весом, поэтому группа подопытных животных должна быть стандартизована по этим параметрам в опыт включают половозрелые самцы и самки весом 18-25 г. Токсичность препарата определяли путем внутрибрюшинного введения мышам их различных доз. Длительность наблюдения составляла 2 недели. О степени токсичности препарата судили по величине 50 в опытной и контрольной группах животных. Проведено исследование острой 2 токсичности 4 доз препарата ПВТ-43. В таблице 2 приведены токсическая доза для мышей,вызывающая гибель 50 животных. Таблица 1 - Токсичность ПВТ-43 для белых беспородных мышей Шифр соединения ПВТ-43 Рифампицин Ниже приведены группы токсичности,установленные на основании 50 при внутрибрюшинном введении антибиотиков мышам 1. Нетоксичные антибиотики 5050-100 мг/кг 2. Слабо токсичные антибиотики 505-50 мг/кг 3. Сильно токсичные антибиотики 501-5 мг/кг 4. Очень сильно токсичные антибиотики 501 мг/кг Как следует из данных таблицы 2, 50 ПВТ-43 для белых беспородных мышей составляла 1050 мг/кг, он в 3,9 раза менее токсичен, чем препарат сравнения рифампицин. Таким образом, указанный препарат не обладает выраженной токсичностью. Скрининг на диких чувствительных штаммах микобактерий туберкулеза Бактерицидную и бактериостатическую активность препарата ПВТ-43 определяли на диких чувствительных штаммах микобактерий туберкулеза (10 штаммов, выделенных от больных,находящихся на лечении в НЦПТ РК). Готовили взвесь исследуемых культур соответствующую 5108 (500 млн. микробных тел) микробных клеток по оптическому стандарту мутности Мак-Фарланда 1. Затем производили посев приготовленной взвеси музейной культуры (по 0,2 мл) в пробирки с жидкой питательной средой Школьниковой, содержащей препараты ПВТ-43 в концентрациях 100, 50, 20, 10,5, 2, 1, 0,1, 0,01 мг/мл и в контрольные (2 пробирки) без препарата. Посевы инкубировали в термостате при температуре 37 С в течение 10 дней. По истечении указанного времени производили пересев отмытых осадков культур опытных и контрольных образцов на плотные питательные среды Левенштейна-Йенсена. Из оставшейся части осадка обоих образцов (опытных и контрольных) готовили препараты, окрашивали по ЦильНильсену. Микроскопия окрашенных препаратов показала, что во всех препаратах, приготовленных из опытных образцов присутствуют МБТ, в каждом препарате от 10 и более палочек в поле зрения. В контрольных препаратах - от 10 и более в поле зрения, в каждом препарате. Пересеянные образцы (опытные и контрольные) инкубировали в термостате при температуре 37 в течение 28 дней. Опыты проводили в трех повторностях, в двух сериях. Результаты бактерицидного и бактериостатического действия препарата ПВТ-43 в отношении диких чувствительных штаммов микобактерий туберкулеза представлены в таблице 2 и 3. Таблица 2 Бактерицидная и бактериостатическая активность препарата ПВТ-43 в отношении диких чувствительных штаммов микобактерий туберкулеза. Испытуемый препарат ПВТ-43(без препарата) наблюдался обильный рост колоний. Заключение исследуемый препарат ПВТ-43 обладает бактерицидной и бактериостатической активностью в отношении диких чувствительных штаммов микобактерий туберкулеза. Скрининг на диких устойчивых штаммах микобактерий туберкулеза Бактерицидную и бактериостатическую активность препарата ПВТ-43 определяли на диких устойчивых штаммах микобактерий туберкулеза (10 штаммов, выделенных от больных,находящихся на лечении в НЦПТ РК). Готовили взвесь исследуемых культур соответствующую 5108 (500 млн. микробных тел) микробных клеток по оптическому стандарту мутности Мак-Фарланда 1. Затем производили посев приготовленной взвеси устойчивых культур (по 0,2 мл) в пробирки с жидкой питательной средой Школьниковой,содержащей препарат ПВТ-43 в концентрациях 100,3 50, 20, 10, 5, 2, 1, 0,1, 0,01 мг/мл и в контрольные (2 пробирки) без препарата. Посевы инкубировали в термостате при температуре 37 в течение 10 дней. По истечении указанного времени производили пересев отмытых осадков культур опытных и контрольных образцов на плотные питательные среды Левенштейна-Йенсена. Из оставшейся части осадка обоих образцов (опытных и контрольных) готовили препараты, окрашивали по ЦильНильсену. Микроскопия окрашенных препаратов показала, что во всех препаратах, приготовленных из опытных образцов присутствуют МБТ, в каждом препарате от 10 и более палочек в поле зрения. В контрольных препаратах - от 10 и более в поле зрения, в каждом препарате. Пересеянные образцы (опытные и контрольные) инкубировали в термостате при температуре 37 в течение 28 дней. Опыты проводили в трех повторностях, в двух сериях. Результаты бактерицидного и бактериостатического действия препарата ПВТ-43 в отношении диких устойчивых штаммов микобактерий туберкулеза представлены в таблице 3. Данные таблицы 3 свидетельствуют о бактерицидной активности ПВТ-43 в концентрации 10 мкг/мл и бактериостатической активностью в концентрации 5 мкг/мл на мультирезистентные штаммы. В контрольных пробирках (без препарата) наблюдался обильный рост колоний. Таким образом, исследуемый препарат ПВТ-43 обладает бактерицидной и бактериостатической активностью в отношении диких мультирезистентых штаммов микобактерий туберкулеза Таблица 3 Бактерицидная и бактериостатическая активность препарата ПВТ-43 в отношении диких устойчивых штаммов микобактерий туберкулеза Испытуемый препарат ПВТ-43 Изучение антимикробной активности ПВТ-43 на грамм-положительных бактериях () Микробную взвесь готовили следующим образом одну петлю, культуры с плотной питательной среды засевали на питательный бульон. Оставляли в термостате при температуре 37 18-20 часов. На второй день эту бульонную культуру разводили физиологическим раствором по стандарту мутности (5 ЕД) 500 млн. микробных тел в 1 мл. и дальше разводили 110 и засевали по 0,1 мл в различные пробирки с препаратами. Использовался мясопептонный бульон (МПБ) и питательный агар (МПА) -7,2. Определение чувствительности всех микроорганизмов к предложенным препаратам проводили методом серийных разведений в бульоне. Брали навеску препарата 0,05 г и 0,1 г помещали в стерильную пробирку, заливали этиловым спиртом по 0,1 мл на 1,5 часа для уничтожения 4 сопутствующих микробов. После этой экспозиции в каждую пробирку прибавляли МПБ в количестве 9,9 мл, т.е. 110 и получали основное разведение 10 мг/мл, где было 0,1 г и 5 мг препарата. После этого проводили разведение основного раствора до 0,1 мкг/мл, пользуясь отдельными пипетками для каждой группы разведения. Оставляли в термостате на сутки для подтверждения того, что вс было выполнено стерильно. В день проведения опыта все разведения препаратов в МПБ разливали по стерильным пробиркам в количестве 1 мл для 2-х культур музейных штаммов грамм-положительных бактерий(29213) и заливали по 0,1 мл ранее приготовленной микробной взвеси и ставили 3 контроля 1- МПБ без препаратов и микробов 2- МПБпрепарат 3- МПБсоответствующая микробная взвесь. Все пробирки помещаем в термостат при температуре 37 на 18-20 часов. После чего определяли результаты 1-ый контроль прозрачный,мути нет - стерильный, 2-ой контроль тоже прозрачный, а в 3-м контроле равномерная муть,характерная для роста исследуемого микроба. Затем проводили пересевы на чашки Петри с МПА для подсчта колоний, т.е. определение бактериостатической активности. Через сутки просмотрели посевы рост в опытных и контрольных чашках был одинаковый. Работа проводилась в 3-х повторностях. В пробирках с препаратами ПВТ-43 ростне отмечался (концентрация от 100 мкг/мл до 0,001 мкг). Затем проводили пересевы на чашки Петри с МПА для подсчта колоний, т.е. определение бактериостатической активности. Через сутки просмотрели посевы рост в опытных и контрольных чашках. В опытных чашках с препаратом ПВТ-43 ростне отмечался (от 100 мкг/мл до 0,001 мкг/мл). Таким образом, препарат ПВТ-43 в разведениях от 100 мкг/мл до 0,001 мкг/мл обладал антимикробной активностью против музейных штаммов грамположительных бактерий( . Заключение Выявлено, что препарат ПВТ-43 обладает антимикробной активностью в отношении диких чувствительных и диких мультирезистентых штаммов микобактерий туберкулеза, а также против музейного штамма грамположительных бактерий( ). ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Применение комплекса гидрохлорида 1-(2 пропионилоксиэтил)-2,5-диметил-4 пропионилоксииминопиперидина с циклодекстрином в качестве антимикробного средства.