Способ получения вакцины против бруцеллеза животных

(51) 61 39/10 (2010.01) 01 33/569 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ перевар Хоттингера, пептон Мартена, печеночный экстракт, картофельный экстракт, глюкозу и дистиллированную воду, ее стерилизацию, внесение посевного материала с последующим культивированием штамма,концентрацию бактериальной массы, добавление защитной среды, фасовку и лиофилизацию, при этом среда, при этом осуществляют глубинное культивирование штамма 82 на питательной среде,которая дополнительно содержит панкреатический гидролизат коровьей плаценты, панкреатический гидролизат казеина,дрожжевой экстракт, сыворотку крупного рогатого скота, эритрит, натрий хлористый, пропионол Б-400,твин-80,. Преимуществом предлагаемого способа является более высокий выход биомассы бруцелл,повышение производительности труда, снижение себестоимости вакцины.(72) Ахметсадыков Нурлан Нуролдинович Иванов Николай Петрович Кожаев Аскар Нурсултанович Хусаинов Дамир Микдатович Ахметсадыкова Шынар Нурлановна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью НАУЧНОПРОИЗВОДСТВЕННОЕ ПРЕДПРИЯТИЕ АНТИГЕН(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА ЖИВОТНЫХ(57) Изобретение относится к области иммунологии и может быть использовано при промышленном производстве вакцин против бруцеллеза животных. Сущность изобретения способ получения вакцины против бруцеллеза животных,приготовление питательной среды, содержащей Изобретение относится к области иммунологии и может быть использовано при промышленном производстве вакцин против бруцеллеза животных. Известен способ получения живой вакцины против бруцеллеза животных,включающий приготовление питательной среды, содержащей перевар Хоттингера, пептон Мартена, печеночный экстракт, картофельный экстракт, глюкозу и дистиллированную воду, ее стерилизацию, внесение посевного материала с последующим культивированием штамма(Ветеринарные препараты. Под ред. Д.Ф.Осидзе, М.,1981, с. 178.). Недостатком существующего способа является трудоемкость, дороговизна и недостаточный выход биомассы при получении вакцины. Целью изобретения является разработка способа изготовления вакцины против бруцеллеза животных с более высоким выходом биомассы бруцелл,повышение производительности труда, снижение себестоимости вакцины. Эта цель достигается тем, что в предлагаемом способе применятся метод глубинного культивирования в биоферментере на новой по составу питательной среде, которая имеет существенное отличие от ранее используемой. Способ получения вакцины против бруцеллеза животных, приготовление питательной среды,содержащей перевар Хоттингера, пептон Мартена,печеночный экстракт, картофельный экстракт,глюкозу и дистиллированную воду,ее стерилизацию, внесение посевного материала с последующим культивированием штамма, концентрацию бактериальной массы,добавление защитной среды,фасовку и лиофилизацию, при этом среда, при этом осуществляют глубинное культивирование штамма 82 на питательной среде, которая дополнительно содержит панкреатический гидролизат коровьей плаценты, панкреатический гидролизат казеина, дрожжевой экстракт, сыворотку крупного рогатого скота, эритрит, натрий хлористый, пропионол Б-400, твин-80, при следующем соотношении компонентов, мас- панкреатический гидролизат коровьей плаценты 3,0-5,0- панкреатический гидролизат Казеина 4,0-5,0- сухой дрожжевой экстракт 0,5-1,0- сыворотка крупного рогатого скота 0,2-0,3- дистиллированная вода остальное. Пример 1. Приготовления вакцины против бруцеллеза. Технологический процесс предлагаемого способа осуществляется следующим образом. Сухую культуру штамма 82 засевают на эритрит-агар и культивируют в течение 48 ч при температуре 37-38. Далее засевают в биоферментеры из расчета 5-10 млрд. микробных клеток на 1,0 см 3 жидкой питательной среды. Культивируют 24-36 ч при температуре 37-38,поддержании растворенного кислорода на уровне 20-40 см 3/час,6,8-7,1, перемешивании при 200300 об/мин. Питательная среда, прошедшая холодную фильтрацию, используется с составом, об перевар Хоттингера 15,0-20,0 пептон Мартена 3,0-5,0 панкреатический гидролизат коровьей плаценты 3,0-5,0 панкреатический гидролизат казеина 4,0-5,0 печеночный экстракт 0,3-0,5 сухой дрожжевой экстракт 0,5-1,0 картофельный экстракт 0,5-1,0 сыворотка крупного рогатого скота 0,2-0,3 натрий хлористый 0,2-0,4 глюкоза 0,2-0,4 тиаминбромид 0,03-0,05 эритрит 0,005-0,01 пропинол Б-400 0,05-0,1 твин-80 0,03-0,05 дистиллированная вода - остальное. Выход бруцелл составил 450-500 млрд. микробных клеток с 1 см 3 (таблица 1). Концентрирование вакцины достигается использованием в качестве вспомогательного вещества натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы( КМЦ) в оптимальной концентрации 0,2-0,3 . Осаждение бактериальной массы осуществляют непосредственно в реакторе при температуре 15-20 С в течение 48-72 ч при 6,8-7,1. После осаждения бактериальную массу разводят до концентрации 4 млрд. микробных клеток, к вакцине добавляют сахарозо-желатиновую среду высушивания 11, разливают вакцину в ампулы или флаконы, подвергают лиофильной сушке, запаивают ампулы и укупоривают флаконы, этикетируют и упаковывают. На всех стадиях способа изготовления вакцины осуществляется биологический контроль на стерильность и специфичность культуры. Реализуемый биопрепарат также проверяется на иммуногенность, безвредность и на выживаемость. Преимуществом предлагаемого способа является повышение производительности труда, снижение себестоимости вакцины. Пример 2. Иммуногенные свойства вакцины проверяют в опытах на морских свинках. С этой целью морским свинкам (10 голов) массой 300-400 г. вводят подкожно в паховую область взвесь вакцинного штамма 82 в дозе 4 млрд. микробных клеток по оптическому стандарту мутности ГНИИСК им. Л.А. Тарасевича в объеме 1,0 см 3. Иммунизированных свинок через 30-60 суток заражают 5-10 минимальными инфицирующими дозами вирулентной культуры бруцелл вида 54. Суспензию вирулентного штамма бруцелл вводят под кожу в области паха со стороны, противоположной месту введения вакцинной культуры бруцелл. Одновременно заражают 15 контрольных(невакцинированных) свинок в той же дозе. Через 35-40 суток зараженных свинок убивают и проводят бактериологические высевы из паховых,подчелюстных,шейных,параортальных лимфатических узлов, печени, селезенки, почки и костного мозга. При этом используют 1 пробирку с бульоном и две с агаром для каждого из 10 объектов и помещают на 15 суток в термостат при 37-38 для инкубирования. Посевы учитываются дважды первый раз через 4-6 суток, второй раз на 14-е сутки, причем после первого учета пробирки с агаром дополнительно увлажняют посевным материалом. Препарат считают иммуногенным, если он предохраняет не менее 70 вакцинированных морских свинок. В случае заражения более 30 морских свинок, проверку иммуногенных свойств повторяют. Если при повторном контроле иммунных свойств окажется менее 70, то такую вакцину бракуют. Результаты опыта, приведенные в таблице 2,свидетельствуют о высоких иммуногенных свойствах заявленной вакцины. Таблица 1 Данные, характеризующие питательные среды Показатели Состав питательной среды Стерилизация Время культивирования Выход м.к. с Питательная среда прототип перевар Хоттингера,пептон Мартена,печеночный экстракт,картофельный экстракт,глюкоза,дистиллированная вода перевар Хоттингера пептон Мартена панкреатический гидролизат коровьей плаценты панкреатический гидролизат казеина печеночный экстракт сухой дрожжевой экстракт картофельный экстракт сыворотка крупного рогатого скота натрий хлористый глюкоза тиаминбромид эритрит пропинол Б-400 0,1 твин-80 дистиллированная вода Таблица 2 Иммуногенные свойства вакцины, полученной, но новому способу в сравнении с коммерческой Штамм (метод выращивания) Штамм 82 (глубинный) Штамм 82 (на жидкой среде) прототип Штамм 82 (эритрит агар) ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения вакцины против бруцеллеза животных,включающий приготовление питательной среды,содержащей перевар Хоттингера, пептон Мартена, печеночный экстракт,картофельный экстракт,глюкозу и дистиллированную воду, ее стерилизацию, внесение посевного материала с последующим культивированием штамма Количество морских свинок 10 10 10 Количество иммунных абсолютное число защитной среды, фасовку и лиофилизацию,отличающийся тем, что осуществляют глубинное культивирование штамма 82 на питательной среде,которая дополнительно содержит панкреатический гидролизат коровьей плаценты, панкреатический гидролизат казеина,дрожжевой экстракт, сыворотку крупного рогатого скота, эритрит, натрий хлористый, пропионол Б-400,твин-80,при следующем соотношении компонентов, масперевар Хоттингера 15,0-20,0 пептон Мартена 3,0-5,0 панкреатический гидролизат коровьей плаценты панкреатический гидролизат казеина печеночный экстракт сухой дрожжевой экстракт картофельный экстракт сыворотк а крупного рогатого скота натрий хлористый глюкоза тиаминбромид эритрит пропинол Б-400 твин-80 дистиллированн ая вода