Специализированный продукт, подавляющий негативное действие ацетона на организм

(51) 61 31/131 (2009.01) 61 35/20 (2009.01) 61 35/30 (2009.01) 61 36/31 (2009.01) 61 36/899 (2009.01) 07 311/30 (2009.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Технический результат достигается созданием отечественного специализированного продукта,содержащего природные активные компоненты,причем в качестве природных активных компонентов используют отруби пшеничные, зерна рыжика посевного и кукурузные рыльца, сухое молоко, рутин, лизин, головной мозг животного происхождения и воду в определенном соотношении компонентов, мас.Отруби пшеничные-2 Головной мозг животного происхождения- остальное. Причем в качестве мозга животного происхождения используют головной мозг коровы не старше 3-х лет.(72) Баттакова Жамиля Еркиновна Ибраева Лязат Катаевна Узбеков Вадим Анверович Аманбекова Айгуль Укеновна Закарин Батыржан Какимжанович Аманкулов Даурен Бауыржанович(73) Республиканское государственное казенное предприятие Национальный центр гигиены труда и профессиональных заболеваний Министерства здравоохранения Республики Казахстан(56) Предварительный патент РК 18757, кл. А 61 К 35/30, А 61 К 36/00, 2007(54) СПЕЦИАЛИЗИРОВАННЫЙ ПРОДУКТ,ПОДАВЛЯЮЩИЙ НЕГАТИВНОЕ ДЕЙСТВИЕ АЦЕТОНА НА ОРГАНИЗМ(57) Изобретение относится к медицине, а именно к промышленной гигиене и экологии, и может применяться для алиментарной коррекции токсического воздействия ацетона на организм. 25019 Изобретение относится к медицине, а именно к промышленной гигиене и экологии, и может применяться для алиментарной коррекции токсического воздействия ацетона на организм. Известен специализированный продукт,обладающий антитоксичным действием,содержащий природные активные компоненты головной мозг животного происхождения, рыжик посевной, солодку голую, люцерну, лизин, отруби кукурузные рыльца, крахмал и сахар в определенном соотношении компонентов(Предварительный патент РК 18757 Специализированный продукт,обладающий антитоксическим действием МПК А 61 К 35/30. Бюл. 2007. - 9). Продукт недостаточно эффективен, так как не оказывает корригирующего действия на нервную,эндокринную и кроветворную системы организма,разбалансированные ингаляционным воздействием ацетона. Задача изобретения создание специализированного продукта,обладающего антитоксическим эффектом,подавляющим негативное действие ацетона на организм и расширение ассортимента средств направленного действия. Технический результат достигается созданием отечественного специализированного продукта,состоящего из комплекса веществ органического происхождения в определенном соотношении компонентов, мас.Отруби пшеничные - 52,5 Рыжик посевной - 4,95 Кукурузные рыльца - 3 Сухое молоко - 30 Рутин - 0,05 Лизин - 2 Головной мозг животного происхождения - 5 Вода - остальное. Количественное соотношение ингредиентов,входящих в состав композици, в целом взято за единицу или 100. Комбинированный состав органического происхождения повышает неспецифическую резистентность организма к воздействию химических факторов, являясь естественным метаболитом. Основным ингредиентом продукта явились отруби пшеничные, богатые клетчаткой и витаминами группы В. Измельченные отруби,представляют собой витаминный комплекс с высокой сорбционной способностью за счет большого содержания клетчатки, что способствует улучшению процессов энтеросорбции при влиянии чужеродных веществ, в данном случае ацетона. Кроме того, для стимуляции этих процессов использовали зерна рыжика посевного и кукурузные рыльца,балластные вещества которых представлены целлюлозой. В целом целлюлоза может эффективно сорбировать водонерастворимые токсины,и стимулировать процессы желчевыделения и перистальтики. Кукурузные рыльца являются стимуляторами желчеотделения. 2 Рыжик посевной, также является источником каротина - предшественника витамина А и содержит большое количество витамина Е, т.е. обладает антиоксидантными свойствами. Для достижения эффективной детоксикации организма применяли сухое молоко, для усиления антиоксидантных свойств применялся рутин. Для улучшения синтеза белка в организме применялась незаменимая аминокислота лизин. Также основным принципом коррекции при действии ацетона является усиление устойчивости клеточных мембран. Это достигалось за счет обогащения их фосфолипидами головного мозга животного происхождения, использования рутина и каротина, обеспечивающих устойчивость мембран клеток организма. При этом использовался мозг крупного рогатого скота - коров, не старше 3-х лет. Продукт применялся как дополнительный компонент питания к традиционному общевиварному рациону в дозе, не превышавшей 1/10 суточной дозы пищи (в среднем - 6 г продукта). Предлагаемый продукт предназначен для стимуляции окисления органических веществ в организме, их выведения, повышает устойчивость клеточных мембран к интоксикации. Технология приготовления специализированного продукта состояла из ряда последовательных процедур. Берутся изначально измельченные отруби. Головной мозг животного происхождения предварительно гомогенизируют, заливают 96 этиловым спиртом и выдерживают 6-7 час,фильтруют, высушивают в сушильном шкафу при 80 С в течение 20 мин., высушенную массу пропускают через сито. Затем все ингредиенты в заданных пропорциях помещают в емкость,заливают кипятком, тщательно перемешивают до получения однородной массы, из которой готовят конечный продукт в виде брикетов массой по 6 г. Продукт хранят в холодильнике. Изобретение иллюстрируется следующим образом. Модель токсикологической нагрузки воспроизводилась с помощью ингаляционной затравки животных ацетоном, который является наиболее показательным по токсическому эффекту среди органических растворителей. Ацетон широко используется в разнообразных отраслях промышленности и в быту как растворитель,разбавитель и очиститель материалов, обладает химическими свойствами, характерными для алифатических кетонов и занимает ведущее место среди вредных веществ,загрязняющих окружающую среду. Кроме того, ацетон - наркотик,последовательно поражающий все отделы ЦНС,накапливается в организме при вдыхании и медленно выводится, что увеличивает возможность хронического отравления. Результат определялся по динамике физиологических, биохимических, морфологических и морфометрических показателей по отношению к контрольным группам животных, не принимавших продукт. Примеры конкретного выполнения. 25019 Был проведен эксперимент на 80 белых крысахсамцах массой тела 180-200 г. Проводились 2 серии эксперимента сроком в 60 и 120 суток. Животные делились на 4 группы по 10 крыс в группе. 1 и 3 контрольные группы (интактные крысы). Крысы 2 и 4 групп подвергались статической ингаляционной затравке в затравочных 200-литровых камерах Курляндского ацетоном в концентрации 400 мг/м 3(2 ПДК) по 4 ч в день 5 дней в неделю в течение 60 суток и 120 суток. Сроки эксперимента соответствовали 7 и 13 годам стажа работы человека в производственных условиях. Концентрация ацетона в камере контролировалась на протяжении эксперимента. Животные 1 и 2 групп содержались на общевиварном рационе. Животные 3 и 4 групп получали специализированный продукт как дополнительный компонент питания к традиционному общевиварному рациону в дозе, не превышавшей 1/10 суточной дозы пищи (в среднем 6 г продукта). В течение эксперимента проводили наблюдения за динамикой изменения массы тела, мышечной силы и суммационно-порогового показателя,свидетельствующего о нервной проводимости,оценивали двигательную и ориентировочноисследовательскую активности, эмоциональную реактивность, агрессивность животных, рабочую и долговременную память, когнитивные способности по результатам выработки условных рефлексов. Измерение мышечной силы крыс производили в горизонтальной плоскости с обеспечением опоры для задних конечностей,для оценки функционального состояния ЦНС определялся суммационно-пороговый показатель у крыс по определению способности суммировать подпороговые импульсы с помощью импульсного электронного стимулятора ИЭС-01 по классической методике в модификации С.В. Сперанского. Ориентировочно-исследовательскую, двигательную активность, уровень негативно-эмоциональных реакций оценивали широко используемым методом открытое поле. В течение 3 мин. у животных регистрировали количество,длительность и последовательность поведенческих актов локомоция, вертикальная стойка без упора, стойка с упором, выход в центр -двигательная или ориентировочно-исследовательская активность груминг, дефекация, уринация - эмоциональная реактивность. Рабочую память животных и эмоциональное состояние анализировали при помощи приподнятого крестообразного лабиринта,основанного на естественной боязни открытого пространства и падения с высоты. Животное помещали в центр пересечения рукавов и фиксировали период первого выхода в открытый рукав, число переходов из открытого и закрытого рукавов, длительность пребывания в них, число и время актов свешивания(оценки риска) в открытых рукавах и выглядывания из закрытых рукавов. Наблюдение вели в течение 3 мин. По существующим представлениям у крыс формируется когнитивная карта, позволяющая им не повторять заходы в уже обследованные рукава,поэтому возрастание количества переходов может свидетельствовать о нарушениях процессов кратковременной памяти. По истечении срока эксперимента животные были умерщвлены методом мгновенной декапитации. После забоя экспериментальных крыс проводили определение активности фермента аденозинтрифосфатазы(АТФ-азы) в тканях головного мозга, семенников и скелетных мышц . В основе этого метода лежал принцип - учет активности АТФ-зы во время гидролиза АТФ по количеству неорганического фосфора. В ткани головного мозга определяли активность холинэстеразы с помощью стандартного набора реагентов . В основе этого метода реакция холинэстеразы с субстратом бутирилтиохолинйодида, дитио-бис-нитробензойной кислотой и масляной кислотой, в результате чего происходит окрашивание супернатанта в желтый цвет. Активность фермента определяли при длине волны 405 нм. В ткани скелетных мышц производили определение активности креатининфосфокиназы с помощью стандартного набора реагентов . В основе метода лежит реакция перехода пирувата в лактат,в . Активность этих ферментов проводили на биохиманализаторе 3300(США, 2005 г.). Проводилось определение уровня первичных продуктов ПОЛ - диеновых конъюгатов в ткани головного мозга, семенников и скелетных мышц по уровню экстинкции отмытых гомогенатов при длине световой волны 233 нм. Было изучено состояние процессов микросомального окисления липидов в ткани головного мозга, семенников и скелетных мышц по уровню продуктов,реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (ТБКреактивные продукты), в основе метода лежит способность продуктов ПОЛ разлагаться в кислой среде при высокой температуре с образованием соединений, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой, образуя окрашенный триметиновый комплекс. О состоянии антиоксидантной защиты судили по активности каталазы. Принцип метода основан на способности перекиси водорода образовывать с солями молибдена стойкий окрашенный комплекс. Проводили определение содержания общих липидов в тканях головного мозга, семенников и скелетных мышц, основой которого являлось образование жировой эмульсии при взаимодействии серной кислоты с пара-диоксановым экстрактом липидов. Для определения холестерина в этих тканях проводили экстракцию липидов по Фолчу, а в основе методики лежала реакция ЛиберманаБурхарда в модификации Узбекова В.А. и Ягуфаровой Г.И. Содержание гликогена в ткани скелетных мышц определяли биохимически по реакции с антроном согласно описанию. с соавт. В тканях скелетных мышц крыс проводили определение уровня оксипролина в основе которого 3 25019 лежит окисление оксипролина до соединения,близкого к пирролу, и последующей конденсации этого соединения с-(диметиламино)бензальдигидом,с образованием стойко окрашенного комплекса. Проводили определение гексуроновых кислот карбазоловым методом согласно описанию Меркурьевой Р.В. и соавт. Интенсивность этих процессов определяли на фотоэлектроколориметре ФЭК-22. Проводился забор материала у крыс для морфологического исследования (ткани головного мозга,семенников,поджелудочной железы,щитовидной и паращитовидной желез,надпочечников). Проводились фиксация всего материала в 10 растворе нейтрального формалина,проводка в различных концентрациях этилового спирта по восходящему принципу, уплотнение парафином с хлороформом, заливка в парафин. С парафиновых блоков готовились микротомные срезы толщиною 5-7 мкм,окрашивались гематоксилином и эозином,по Нисслю. Специфичность метода контролировалась соответствующими реакциями. Морфометрические исследования проводили в тканях крыс для изучения качественного и количественного состава клеточных реакций. Подсчет велся в каждом изученном случае не менее чем в 100 полях зрения, что является достаточным для репрезентативности показателей на 2 уровне вероятностей. Подсчет и дифференцировка клеточных элементов проводились по методике Г.Г. Автандилова при увеличении микроскопа окуляр (ок.) 15, объектив (об.) 20. Статистическая обработка анализируемого материала проводилась на персональном компьютерес использованием пакета прикладных программ 5.0. Проводился расчет коэффициента достоверности (Р), который оценивался по таблице значений критерияпо Стьюденту, дисперсионный анализ. Полученные результаты подтверждают то, что предложенный специализированный продукт оказывает положительное профилактическое действие при применении его с целью алиментарной коррекции на фоне ингаляционной затравки ацетоном. Продукт способствовал улучшению нервной проводимости, о чем свидетельствует уровень суммационно-порогового показателя у крыс,который оказался на 19-22 ниже, чем при чистой затравке ацетоном. Двигательная активность крыс более продолжительное время не снижалась в отличие от крыс, затравленных ацетоном без коррекции(приблизительно в 3,1-2,0 раза выше в тесте открытое поле и в 3,4-3,3 раза в приподнятом крестообразном лабиринте), что свидетельствует о подавлении токсического действия ацетона на нервную систему крыс и сохранении баланса между процессами возбуждения и торможения в ЦНС, а также предохранении развития преобладания тормозных процессов. 4 При анализе эмоциональной реактивности выявлено, что животные, были значительно более спокойны и адаптированы при попадании в открытое поле, интеллектуальная активность была на 46-50 выше, чем при затравке ацетоном без коррекции. Алиментарная коррекция способствовала предупреждению нарушения энергетического метаболизма, о чем свидетельствует сохранение активности АТФ-зы на контрольном уровне на 60 сутки затравки ацетоном и менее выраженное ее снижение на 120 сутки затравки ацетоном (на 21 ниже контроля). Также отмечалось улучшение процессов нервной проводимости в ткани головного мозга крыс, о чем позволяет судить сохранение активности холинэстеразы на контрольном уровне. Кроме того, продукт обладает способностью предупреждать накопление продуктов ПОЛ в ткани головного мозга экспериментальных крыс(снижение уровня холестерина на 34-40) и снижение активности фермента АОЗ -каталазы. Так,уровень диеновых конъюгатов оказался на 22-18 ниже, чем у крыс, не получавших алиментарную коррекцию при затравке ацетоном. Уровень ТБК-РП был в обоих сроках эксперимента на 26 ниже, чем в сравниваемой группе. Активность каталазы при коррекции увеличивалась на 72 на 60 сутки и в 3,3 раза на 120 сутки затравки ацетоном, чем у крыс,затравленных ацетоном без алиментарной коррекции. Полученные данные свидетельствуют о наличии антиоксидантных свойств предлагаемого продукта. Во всех отделах головного мозга крыс при микроскопическом исследовании обнаружено улучшение церебральной гемоциркуляции и увеличение количества нейронов,что свидетельствует об улучшении метаболических процессов в ткани головного мозга. Наблюдалось повышение мышечной силы крыс на 16-17 в сравнении с контрольной группой. Специализированный продукт улучшал энергетический баланс и предупреждал накопление продуктов ПОЛ и липидов в ткани семенников экспериментальных крыс. Влияние на железы внутренней секреции(щитовидная железа,паращитовидная железа,надпочечники,поджелудочная железа) характеризовалось отсутствием явных признаков общей паренхиматозной дистрофии в них. Как показало гистологическое и морфометрическое исследование семенников крыс, на фоне сохраняющихся явлений венозного полнокровия и умеренных дистрофических изменений в клетках сперматогенного эпителия активность сперматогенеза возрастала, что свидетельствовало о нормализации морфофункционального состояния семенников. Кроме того, выявлено положительное влияние непосредственно на кроветворную систему экспериментальных животных предупреждение развития сгущения крови, сохранение полноценного функционирования и нормализации дифференцировки клеток крови, предохранение организма от 25019 развития гипоксии, усиление защитных сил и иммунологической реактивности организма,усиление устойчивости клеточных мембран,повышение содержания липопротеидов высокой плотности в крови. Отмечалось снижение эффекта действия ацетона на красный костный мозг, что отражалось в уменьшении количества липоцитов и мегакариоцитов без признаков токсического отека,улучшении показателей созревания эритроцитов. В ткани отмечалась нормализация энергетического метаболизма и процессов синтеза коллагена,сохранение формы лимфоидных фолликулов белой пульпы и торможение развития дистрофических изменений стромы красной пульпы. Предложенный специализированный продукт природного органического происхождения обладает антитоксическим действием, оказывает воздействие на клеточном уровне, способствует стимуляции распада органических ингредиентов. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Специализированный продукт, подавляющий негативное действие ацетона на организм,содержащий природные активные компоненты отруби пшеничные, зерна рыжика посевного и кукурузные рыльца, лизин, головной мозг животного происхождения, отличающийся тем,что продукт дополнительно содержит сухое молоко,рутин и воду при следующем соотношении компонентов, мас. отруби пшеничные-2 головной мозг животного происхождения- остальное. 2. Специализированный продукт по п.1,отличающийся тем, что в качестве головного мозга животного происхождения используют головной мозг коров не старше 3-х лет.