Специализированный продукт, предупреждающий негативное действие алифатических углеводородов на организм

(51) 61 35/20 (2010.01) 61 35/282 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Комбинированный состав органического происхождения повышает неспецифическую резистентность организма к воздействию химических факторов, являясь естественным метаболитом. В качестве базового компонента источника фосфолипидов и незаменимых аминокислот в состав включали мелких рачков, богатых каротином. Каротин способствует повышению устойчивости и эластичности мембран. Семена люцерны, богатые биологически активными флаваноидами, содержат балластные вещества,обладающие противовоспалительным и сорбирующим действием. В качестве источника полноценного животного белка использовали сухое молоко. Измельченные отруби,представляют собой витаминный комплекс с высокой сорбционной способностью за счет большого содержания клетчатки. Муку и сахар добавляли для придания продукту оптимальной консистенции. Рутин включался в качестве антиоксиданта. Предлагаемый продукт предназначен для стимуляции окисления органических веществ в организме, их выведения, повышает устойчивость клеточных мембран к интоксикации.(72) Бекеева Саулемай Айдаровна Узбеков Вадим Анверович(56) Нурмаганов М.К. Эффективность использования пищевого продукта экосорб в качестве энтеросорбента при острых экзогенных отравлениях // Российский национальный конгресс Человек лекарство, Москва, 1998. стр. 32(54) СПЕЦИАЛИЗИРОВАННЫЙ ПРОДУКТ,ПРЕДУПРЕЖДАЮЩИЙ НЕГАТИВНОЕ ДЕЙСТВИЕ АЛИФАТИЧЕСКИХ УГЛЕВОДОРОДОВ НА ОРГАНИЗМ(57) Изобретение относится к медикобиологическим исследованиям в области промышленной гигиены и медицинской экологии для оценки токсического воздействия алифатических углеводородов на организм. Технический результат достигается созданием отечественного специализированного продукта,состоящего из комплекса веществ органического происхождения в определенном соотношении компонентов, мас.- 5 семена люцерны - 20 сухое молоко - 15 отруби - 45 мука 10 сахар - 5 рутин - 0,6 г/кг. Изобретение относится к медико-биологическим исследованиям в области промышленной гигиены и медицинской экологии для оценки токсического воздействия алифатических углеводородов на организм. Известен энтеросорбент Экосорб АЖК-1,обладающий антитоксическим действием,представляющий собой комплекс природных активных компонентов, в состав которого входят пшеница твердых сортов, яичная скорлупа,аскорбиновая кислота(Нурмаганов М.К. Эффективность использования пищевого продукта экосорб в качестве энтеросорбента при острых экзогенных отравлениях//Российский национальный конгресс Человек и лекарство, Москва. 21-25 апреля, 1998. - М., 1998. - с. 32). Недостатком энтеросорбента является то, что он не предназначен для стимуляции распада органических компонентов, не делает мембраны макрофагов более эластичными. Задача изобретения создание специализированного продукта,обладающего антитоксическим эффектом в отношении ирритантов химического производства и расширение ассортимента средств направленного действия. Технический результат достигается созданием отечественного специализированного продукта,состоящего из комплекса веществ органического происхождения в определенном соотношении компонентов, мас.- 0,6 г/кг Комбинированный состав органического происхождения повышает неспецифическую резистентность организма к воздействию химических факторов, являясь естественным метаболитом. В качестве базового компонента источника фосфолипидов и незаменимых аминокислот в состав включали мелких рачковбогатых каротином, у которых предварительно удалялся хитин. Каротин способствует повышению устойчивости и эластичности мембран. Использовали готовый измельченный аптечный порошок. Семена люцерны, богатые биологически активными флаваноидами, содержат балластные вещества,обладающие противовоспалительным и сорбирующим действием. В качестве источника полноценного животного белка использовали сухое молоко. Измельченные отруби, представляют собой витаминный комплекс с высокой сорбционной способностью за счет большого содержания клетчатки. Муку и сахар добавляли для придания продукту оптимальной консистенции. Рутин включался в качестве антиоксиданта. Предлагаемый продукт предназначен для стимуляции окисления органических веществ в 2 организме, их выведения, повышает устойчивость клеточных мембран к интоксикации. Анализ научно-медицинской и патентной литературы аналогичных продуктов не выявил. Технология приготовления специализированного продукта состояла из ряда последовательных процедур. Семена люцерны заливали кипятком в кастрюле, закрывали крышку, закрывали кастрюлю термостатирующим материалом и давали настояться в течение 1,5-2 часов. Затем добавляли остальные компоненты, предварительно заливая их кипятком и тщательно перемешивая до получения однородной массы, из которой готовили конечный продукт в виде шарообразных гранул, затем эти гранулы высушивали в термостате при температуре не выше 70 С. Изобретение иллюстрируется следующим образом. Проведены серии подострого эксперимента продолжительностью 8 недель по 4 часа ежедневно на группах крыс массой 170-210 г. Модель токсикологической нагрузки воспроизводилась с помощью затравки животных гексаном,который является наиболее показательным по токсическому эффекту среди алифатических углеводородов. Гексан - яд наркозного действия, основной компонент бензина,широко используется как растворитель, разбавитель и очиститель в производстве синтетических материалов, обычно в смеси с другими алифатическими углеводородами, выделяется из гидравлических жидкостей, бензинов, масел и других синтетических материалов, действует на ЦНС, пищеварительную систему, раздражает дыхательные пути, изменяя частоту и глубину дыхания. Результат определялся по динамике физиологических,биохимических и морфологических показателей по отношению к контрольным группам животных, не принимавших продукт. Примеры конкретного выполнения. Пример 1. Биохимические показатели печени крыс в подостром эксперименте на фоне алиментарной коррекции. Была проведена подострая затравка гексаном в дозе 300 мг/м 3 в течение 8 недель по 4 часа ежедневно 5 дней в неделю. Затравка проводилась в стандартных 200-литровых камерах Курляндского,на половозрелых белых крысах-самцах, массой 170210 г. Животные были разделены на 3 группы 1 группа - интактные крысы животные 2 и 3 групп подвергались статическому ингаляционному воздействию гексаном. Животные 3-ой группы получали дополнительно к традиционному рациону специализированный продукт в суточной дозе 10 г. В течение эксперимента проводили наблюдения за динамикой изменения веса тела. По окончанию срока эксперимента крыс забивали мгновенной декапитацией. Извлекали печень для определения биохимических показателей. Было изучено состояние процессов микросомального окисления липидов в печени по уровню продуктов, 24960 реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (ТБКРП). Метод определения ТБК-РП основан на способности части продуктов перекисного окисления липидов разлагаться в кислой среде при высокой температуре с образованием соединений,реагирующих с тиобарбитуровой кислотой, образуя окрашенный триметиновый комплекс. Гомогенат ткани печени готовили на основе фосфатного буфера (рН 7,4). Уровень диеновых конъюгатов(ДГ) оценивали по уровню экстинции отмытых гомогенатов при длине световой волны 233 нм. О состоянии антиоксидантной защиты судили по активности каталазы. Принцип метода основан на способности перекиси водорода образовывать с солями молибдена стойкий окрашенный комплекс. Для экстракции Хс в тканях использовали принцип липидов по Чолчу. Определение холестерина (Хс) основано на реакции Либермана-Бурхарда изумрудно-зеленое окрашивание Хс в присутствии смеси, состоящей из ледяной уксусной кислоты,уксусного ангидрида и концентрированной серной кислоты (151). Содержание оксипролина в тканях определяли на основе окисления оксипролина до соединения, близкого к пирролу, и последующей конденсации этого соединения с п-(диметиламино)бензальдигидом,с образованием стойко окрашенного комплекса. Определение гексуроновых кислот проводили по методике описанной Алтынбековым Б.Э. с соавт. Содержание липидов в печени определяли турбидиметрическим методом. Статистическая обработка анализируемого материала проводилась на персональном компьютерес использованием пакета прикладных программы. Проводился вариационный анализ коэффициент достоверности(Р) оценивали по таблице значений критерийпо Стьюденту. По результатам экспериментальных данных биохимические показатели печени крыс,подвергнутых воздействию гексана, у животных 2 и 3 групп, как без коррекции, так и на фоне коррекции не отмечалось достоверно значимых изменений содержания ТБК-РП по сравнению с фоновыми показателями (фиг. 1). У животных 2-ой группы уровень диеновых конъюгатов в печени при интоксикации гексаном увеличивался на 35 по сравнению с животными контрольной группы. Было также отмечено менее значительное повышение уровня диеновых конъюгатов в печени крыс у животных 3-ей группы на фоне алиментарной коррекции на 14. При этом, у животных 3-ей группы на фоне алиментарной коррекции при интоксикации гексаном было отмечено достоверно значимое более низкое содержание диеновых конъюгатов в печени(на 18) по сравнению с животными 2-ой группы,подвергнутых воздействию гексаном без коррекции. Активность каталазы в печени крыс 2-ой группы при интоксикации гексаном снижалась на 8 по сравнению с контрольной группой. На фоне алиментарной коррекции у животных 3-ей группы при интоксикации гексаном активность каталазы не снижалась по сравнению с контрольной группой и была выше, чем у животных 2-ой группы при интоксикации без коррекции на 8. Содержание Хс в печени крыс 2-ой группы,подвергнутых подострому воздействию гексаном,было повышенным на 24 по сравнению с контролем. При интоксикации гексаном у животных 3-ей группы на фоне алиментарной коррекции содержание Хс в печени не отличалось от контрольных значений и было ниже, чем при интоксикации гексаном у животных 2-ой группы без коррекции на 25 (фиг. 2). Было отмечено повышение содержания оксипролина в печени у крыс 2-ой группы при подострой интоксикации гексаном на 8 по сравнению с фоновыми показателями. На фоне алиментарной коррекции у животных 3-ей группы при интоксикации гексаном содержание оксипролина в печени было ниже контрольных значений на 8, а по сравнению с животными 2-ой группой подвергнутых интоксикации без коррекции- на 16. Уровень гексуроновых кислот в печени крыс 2 ой группы при интоксикации гексаном повышался на 10 по сравнению с контрольными значениями,а на фоне алиментарной коррекции у животных 3-ей группы - на 7 по сравнению с контрольной группой. Таким образом, отмечено токсическое действие паров гексана, проявляющиеся в изменении биохимических показателей в печени экспериментальных животных соответственно ПДК в условиях подострого эксперимента. Об этом свидетельствуют выраженные изменения в структуре мембран ткани печени и изменений в обмене соединительной ткани в этом органе,подтверждающиеся повышением уровня ДК,содержания холестерина и оксипролина, а также уровня гексуроновых кислот. При этом отмечены изменения процессов микросомального окисления липидов. Применение специализированного продукта предотвращает токсическое действие гексана, что во многом нивелируют изменение соединительнотканного обмена,сохранение антиоксидантной активности. Это дает основание считать, что в ткани печени происходят процессы адаптации, чего не наблюдалось без алиментарной коррекции, которая стимулировала повышение уровня окисления незаменимых аминокислот по циклооксигеназному пути и не препятствовала окислению по лейкотриеновому пути, а также нивелировала накапливающийся холестерин и снижение уровня коллагена в печени. Данный факт,несомненно, связан с изменением мембранной организации гепатоцитов, обусловленной именно алиментарной коррекцией. Пример.2 Морфофункциональное состояние печеночной ткани экспериментальных животных на фоне алиментарной коррекции. Эксперимент проводился идентично примеру 1. Белых крыс забивали методом декапитации. Печень животных фиксировали в 10 растворе нейтрального формалина, с последующей заливкой 3 в парафин. С парафиновых блоков готовились срезы печеночной ткани толщиной 5 мкм, окрашивали общепринятыми методами гематоксилин-эозином,по Нисслю, окраска с помощью ШИК- реакции,также гистохимически определяли содержание гликогена. Морфологическая оценка структурных изменений печени крыс проводилась с учетом гистологических и гистохимических критериев, в частности, оценивалось содержание гликогена в гепатоцитах. Микроскопическое и морфометрическое исследование препаратов проводили с помощью компьютерной микроскопической видеосистемы 550 фирмыАнглия, с встроенным пакетом морфометрических программ. Статистическую обработку полученных результатов осуществляли с помощью программы- Стьюдента. При морфологическом изучении препаратов печени в 1-ой контрольной группе животных, не подвергавшихся воздействию дополнительных факторов, печень имела типичное строение дольчатость выражена четко,гепатоциты располагаются вокруг центральной вены в виде анастомозирующих между собой печеночных балок,имеющих радиальное направление. Между балками имелись синусоиды, которые обычно пустые. Гепатоциты имели одинаковые размеры, при окраске гематоксилином и эозином подразделялись на темные, располагающиеся по периферии дольки и центрально расположенные, с более светлой цитоплазмой. Окраска с помощью ШИК- реакции показала, что гранулы гликогена были средних размеров, распределялись равномерно в клетке и одинаково во всех макрофагальной реакции, а также некоторое полнокровие сосудов (фиг.3). При гистологическом исследовании препаратов печени животных 2-ой группы, подвергавшихся ингаляционному воздействию гексана, на фоне умеренного полнокровия центральных вен и прилежащих к ним синусоидных капилляров выявлялись диффузные дистрофические изменения в дольке в виде белковой (зернистой, вакуольной гидропической) и очаговой жировой дистрофии гепатоцитов. Последняя преобладала в большинстве случаев в перипортальных зонах, а также перивенулярно в центре долях (фиг.4). Известно, что образование белковых зерен в цитоплазме гепатоцитов возможно при декомпозиционных процессах липопротеидных комплексов клетки, которые сопровождаются высвобождением гранул белка и липидов и указывают на нарушение функционального состояния печени. Портальные тракты выглядели несколько расширенными, умерено или скудно инфильтрированными. В инфильтрате преимущественно определялись клетки лимфоидного ряда. Как правило, инфильтрат не выходил за пределы портальной стромы. Отмечалось умеренная пролиферация желчных протоков портальных трактов (фиг.5). В паренхиме обнаруживался полиморфизм гепатоцитов, что проявлялось различными размерами печеночных клеток (фиг. 4). Выявлялись в небольшом количестве двух- и многоядерные печеночные клетки, что отражало проявление адаптивно - репаративных реакции органа. В дольке некрозы гепатоцитов носили мозаичный,мелкоочаговый характер и в большинстве случаях были окружены или пропитаны лимфомакрофагальным инфильтратом. Как показала ШИК-реакция на гликоген, уровень его содержания в печеночных клетках значительно снижался (фиг. 7). При морфометрическом исследовании ткани печени у крыс 2-группы при интоксикации гексаном достоверно значимо повышалась объемная доля дистрофических измененных гепатоцитов в 9 раз по сравнению с показателями крыс контрольной группы. Было также отмечено менее значительное повышение объемной доли дистрофических измененных гепатоцитов в печени крыс у животных 3-ей группы на фоне алиментарной коррекции в 4,9 раз. При этом, у животных 3-ей группы на фоне алиментарной коррекции при интоксикации гексаном в печеночных дольках объемная доля некрозов была более низкой (на 3,7 раза) по сравнению с животными 2-ой группы, подвергнутых воздействию гексаном без коррекции (таблица). Таблица Морфометрические показатели ткани печени крыс в подостром экспериментеГруппы показатели дистрофически измененных 1,1000,024 гепатоцитовнекрозов 0,0060,003 2,390,321 инфильтратов 0,0090,003 7,200,613 фиброза 0,1000,002 0,5400,041 двуядерных гепатоцитов 0,0100,003 0,0170,003 портальных трактов 3,900,103 4,290,223 Примечания- достоверные изменения по сравнению с фоновыми значениями (р 0,05)- достоверные изменения по сравнению с фоновыми значениями (р 0,01)- достоверные изменения по сравнению со 2-группой (р 0,01) Объемная доля инфильтрации в ткани печени крыс 2-ой группы при интоксикации гексаном повышалась в 8 раз по сравнению с контрольной группой. На фоне алиментарной коррекции у животных 3-ей группы при интоксикации гексаном данный показатель не снижался по сравнению с контрольной группой и был ниже, чем у животных 2-ой группы при интоксикации без коррекции на 62. Объемная доля фиброза в ткани печени крыс 2 ой группы, подвергнутых подострому воздействию гексаном, была повышенной на 5,4 раза по сравнению с контролем. При интоксикации гексаном у животных 3-ей группы на фоне алиментарной коррекции данный показатель в ткани печени повышался на 3,7 раза от контрольных значений и был ниже, чем при интоксикации гексаном у животных 2-ой группы без коррекции на 68,5. Было отмечено повышение содержания в паренхиме количества двуядерных гепатоцитов в ткани печени у крыс 2-ой группы на 1,7 раза по сравнению с фоновыми показателями. На фоне алиментарной коррекции у животных 3-ей группы при интоксикации гексаном данный показатель в ткани печени был выше контрольных значений на 1,3 раза, а по сравнению с животными 2-ой группы,подвергнутых интоксикации без коррекции - на 6,5 раза. Объемная доля портальных трактов в ткани печени крыс 2-ой группы при интоксикации гексаном повышалась на 1,7 раза по сравнению с контрольными значениями, а на фоне алиментарной коррекции у животных 3-ей группы - на 1,5 раза по сравнению с контрольной группой. Таким образом, отмечено токсическое действие паров гексана проявляющееся в изменении морфометрического анализа в ткани печени экспериментальных животных в условиях подострого эксперимента. Об этом свидетельствуют нарастания дистрофических и некротических изменений объемной доли гепатоцитов,склеротические изменения портальных трактов, где отмечалась инфильтрация и фиброз печеночной ткани. Также при комплексном гистологическом исследовании препаратов печеночной ткани животных 2-ой группы,подвергавшихся длительному ингаляционному воздействию гексана выявлены значительные изменения, которые выражались в жировой и зернистой дистрофии гепатоцитов,значительным лейкоцитарным инфильтратом. Также отмечалось снижение уровня содержания гликогена в гепатоцитах печени и значительный рост объемной доли альтернативных изменений в организме. Предложенный специализированный продукт природного органического происхождения обладает антитоксическим действием, оказывает воздействие на клеточном уровне, способствует стимуляции распада органических ингридиентов. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Специализированный продукт,предупреждающий негативное действие алифатических углеводородов на организм,содержащий природные активные компоненты,отличающийся тем, что в качестве природных активных компонентов содержит мелких рачковв виде порошка, семена люцерны,сухое молоко, отруби, муку, сахар, рутин в определенном соотношении компонентов, масс.