Лекарственное средство с противогрибковой и антивирусной активностью в виде мази и способ его получения

(51) 61 39/12 (2006.01) 61 35/66 (2006.01) 61 35/74 (2006.01) 61 31/10 (2006.01) 12 1/92 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ.-20.14 на комплексной питательной среде, содержащей в качестве основного источника углерода коллоидную овсяную муку в количестве 30 г/л и очищенный путем экстракции из мицелия продуцента с помощью 96 этанола, который смешивают при комнатной температуре с диметилсульфоксидом при соотношении антибиотикдиметилсульфоксид 12 и полученную пасту смешивают при комнатной температуре до гомогенного состояния с мазевой основой, состоящей из полиэтиленоксида-1500 и полиэтиленоксида-400 при соотношении компонентов мази, масс. розеофунгин - 2,0,диметилсульфоксид - 4,0, полиэтиленоксид-1500 22,0, полиэтиленоксид-400 - 72,0. Преимущество изобретения заключается в создании эффективного лекарственного средства,сочетающего высокую противогрибковую и антивирусную активность, пригодного для лечения грибковых и вирусных инфекций, поражающих кожные покровы и слизистые оболочки человека и животных. Предлагаемое лекарственное средство может быть использовано в медицине и ветеринарии, способ его получения является технологически простым и пригоден для производства лекарственного средства в промышленных масштабах.(76) Саданов Аманкелди Курбанович Березин Владимир Элеазарович Балгимбаева Ася Султановна Треножникова Людмила Петровна(57) Использование медицина и ветеринария, в частности, микробиология и вирусология, а именно производство и применение новых противогрибковых и противовирусных препаратов Цель создание лекарственного средства в виде мази, обладающего высокой противогрибковой и антивирусной активностью, а также упрощение способа его изготовления. Сущность изобретения лекарственное средство с противогрибковой и антивирусной активностью в виде мази, отличающееся тем, что в качестве активного компонента с противогрибковой и антивирусной активностью содержит антибиотик розеофунгин. Для приготовления лекарственного средства используют антибиотик розеофунгин,полученный путем культивирования продуцента Изобретение относится к области фармации и касается лекарственного средства с противогрибковой и антивирусной активностью. Необходимость подобного лекарственного средства обусловлена ростом грибковых и вирусных заболеваний, поражающих человека и животных, в частности инфекций, развивающихся на кожных покровах и слизистых оболочках организма(дерматофитии, кератомикозы, кандидозы, глубокие микозы,герпесвирусные,папилломавирусные инфекции и т.д.). Для лечения таких заболеваний,вызывающих тяжелые местные и системные поражения организма человека и животных,используется ряд противогрибковых антибиотиков и специфических противовирусных препаратов. Однако длительное применение подобных препаратов привело к появлению устойчивых форм возбудителей, что требует, как постоянного увеличения доз лечебных препаратов, так и поиска новых лекарственных средств. Изобретение заключается в применении для лечения грибковых и вирусных заболеваний,поражающих кожные покровы и слизистые оболочки человека и животных,нового лекарственного средства в виде мази, содержащей в качестве активного компонента полиеновый антибиотик розеофунгин,обладающий противогрибковой и антивирусной активностью, и в качестве мазевого компонента смесь полиэтиленоксида 1500, полиэтиленоксида 400 и диметилсульфоксида в определенном соотношении. Изобретение обеспечивает создание средства с высокой терапевтической активностью и не вызывающего побочных реакций на коже больного. Изобретение относится к лекарствам для терапевтических целей, в частности к медицинским препаратам,характеризуемым специальными физическими формами, а именно к мазям,содержащим антибиотики, и основы для них. Известен полиеновый противогрибковый антибиотик нистатин, продуцируемый. Это первый специфический противогрибковый антибиотик, известный с конца 40-х годоввека. Обладает способностью подавлять рост дрожжеподобных грибов рода( Е.,.,.., , , 1966, .876-880 ,. . . . 2000.,. 78 . 41-58). Недостатком данного антибиотика является низкая эффективность в отношении возбудителей грибковых инфекций вследствие его длительного применения и возникновения устойчивых штаммов. Обладает достаточно высокой токсичностью, не применяется системно. Не обладает антивирусной активностью. Известен полиеновый противогрибковый антибиотик леворин, продуцируемый. Активен в отношении дрожжеподобных грибов родаи некоторых простейших ( ) ( , ,,.-. 2. 24. 235-47). Недостатком антибиотика является высокая токсичность(гепатотоксичность,нефротоксичность, способность провоцировать желудочные и маточные кровотечения). К данному антибиотику выработалась устойчивость у многих грибов рода , вследствие чего его применение часто является малоэффективным. Не обладает антивирусной активностью. Известен полиеновый противогрибковый антибиотик Амфотерицин В, продуцируемый актиномицетом. Оказывает фунгицидное или фунгистатическое действие. Активен в отношении грибов рода , ,,,, , а также лейшманий ( ,.30.1990 .12, .308-29). Недостатком антибиотика является относительно высокая токсичность и низкая эффективность в отношении ряда возбудителей грибковых инфекций. Не обладает антивирусной активностью. Известна мазь, содержащая противогрибковый антибиотик амфотерицин В, применяемая для лечения грибковых заболеваний кожи и слизистых оболочек (М.Д. Машковский. Лекарственные средства. - М. Новая волна, 2000 г., с.356-357). Достоинством мази с использованием антибиотика амфотерицин В является фунгицидное действие в отношении ряда патогенных грибов. Действует данный лекарственный препарат непосредственно на проницаемость клеточных мембран грибов. Указанная мазь является наиболее близким аналогом по отношению к заявляемому изобретению. Способ получения лекарственного средства включает выделение очищенного антибиотика из культуры продуцента, получение концентрата лекарственного средства путем растирания очищенного антибиотика амфотерицина В с расплавленным вазелином, приготовление мазевой основы, содержащей вазелин, стеариновую кислоту,ланолин, сорбитанолеат и вазелиновое масло,введение в мазевую основу концентрата лекарственного средства и последующую эмульгацию смеси. Недостатком указанного лекарственного средства является низкая эффективность в отношении возбудителей многих грибковых инфекций и отсутствие противовирусного действия. Кроме того,недостатком способа получения этого лекарственного средства является использование вазелина при температуре 75-80 С для получения лекарственной субстанции. Такая температура снижает активность лекарственного препарата. Содержание в мазевой основе стеариновой кислоты и сорбитанолеата удорожает мазь и удлиняет технологический процесс производства мази ввиду большого количества компонентов, которые постепенно многостадийно вводятся в состав мази. Таким образом, известные противогрибковые лекарственные средства имеют ряд недостатков они являются недостаточно эффективными,токсичными, проявляют избирательность действия в отношении только определенных возбудителей, не обладают одновременно противогрибковым и антивирусным действием, что снижает возможность их применения в медицинской и ветеринарной практике. Кроме того, технология изготовления известных противогрибковых лекарственных средств является сложной, многостадийной и не обеспечивает получение конечного продукта с высокой противогрибковой и антивирусной активностью. Целью настоящего изобретения являются создание высокоэффективного лекарственного средства с противогрибковой и антивирусной активностью в виде мази и упрощение технологии его изготовления. Поставленная цель достигается путем совершенствования компонентного состава лекарственного средства и оптимизации технологии изготовления, а именно тем, что очищенный антибиотик розеофунгин, полученный с помощью спиртовой экстракции из мицелия продуцента.-20.14,смешивают с диметилсульфоксидом для получения лекарственной субстанции и последнюю вносят в мазевую основу, приготовленную из смеси полиэтиленоксида-1500 и полиэтиленоксида-400 при процентном соотношении компонентов розеофунгин - 2,0, диметилсульфоксид - 4,0,полиэтиленоксид-1500 22,0 и полиэтиленоксид-400 72,0. При этом смешивание компонентов лекарственного средства производится при комнатной температуре в ходе одностадийного цикла. Сущность изобретения поясняется на следующих примерах. Пример 1. Получение биомассы продуцента антибиотика. Продуцент антибиотика розеофунгина.-20.14 выращивают на комплексной питательной среде,содержащей в качестве основного источника углерода муку овсяную коллоидную (30 г/л),глюкозы моногидрат, лактозы моногидрат, кальция карбонат, масло кукурузное и воду очищенную. Выращивание осуществляют в течение 48 часов при температуре 28-30 С. Затем проводят ферментацию в той же питательной среде в течение 72-96 часов при температуре 28-30 С. После окончания ферментации мицелий отделяют от культуральной жидкости путем фильтрации, сепарирования и центрифугирования. Пример 2. Экстракция антибиотика из мицелия продуцента. Антибиотик выделяют из мицелия продуцента 96 этанолом с использованием двукратной экстракции. Соотношение мицелия и растворителя составляет 13 при первой экстракции и 12 при повторной экстракции. Экстракцию проводят в реакторе с мешалкой в течение 2 часов при комнатной температуре. Первый и второй экстракты центрифугируют и объединяют. Этанольный экстракт желтого цвета упаривают в вакууме при температуре 35-40 С до водного остатка. К остатку добавляют дистиллированную воду в соотношении 15 и выдерживают в течение 1 часа при комнатной температуре или в течение 15-16 часов при 4 С. Желтый осадок осаждают центрифугированием и высушивают под вакуумом. Биологическую активность очищенного порошка розеофунгина определяют по(как рекомендовано НИТИАФ). Подлинность препарата подтверждается наличием корреляции между величиной биологической активности и удельной оптической плотностью - величиной экстинкции(Е 1 1 см при 363 нм). Пример 3. Приготовление мазевой формы лекарственного средства. Для приготовления мазевой формы лекарственного средства проводят подготовку основы мази и лекарственной субстанции. Основу мази полиэтиленоксид-1500 и полиэтиленоксид-400, помещают в водяную баню,проводят плавление полиэтиленоксида-1500 до прозрачного состояния при температуре 60-65 С. После расплавления полиэтиленоксида-1500 до прозрачной жидкой массы в него вносят расчетное количество полиэтиленоксида-400. Для приготовления лекарственной субстанции отмеряют расчетное количество исходных компонентов антибиотик розеофунгин и растворитель диметилсульфоксид. Затем антибиотик растирают с растворителем до пастообразного состояния в фарфоровой ступке при комнатной температуре. К концентрату розеофунгина в диметилсульфоксиде при комнатной температуре последовательно добавляют порциями расплавленную мазевую основу и перемешивают на мешалке до гомогенной консистенции. Получают мазь от светло-желтого до желтого цвета. Готовую мазь хранят в сухом,защищенном от света месте, при температуре от 20 С до 8 С. Пример 4. Определение биологической активности препарата. Противогрибковую активность антибиотика розеофунгин определяют путем выявления минимальных подавляющих доз препарата (мкг/мл),блокирующих рост тест-культур. Результаты определения активности антибиотика розеофунгин в отношении широкого спектра возбудителей грибковых инфекций представлены в таблице 1. Показана высокая противогрибковая активность антибиотика розеофунгин по отношению к возбудителям самых различных грибковых заболеваний (дерматомикозов, глубоких микозов,тропических микозов и т.д.). Антивирусную активность антибиотика розеофунгин определяют при обработке вируссодержащего материала антибиотиком в дозах 10 мкг/мл и 50 мкг/мл с последующим определением инфекционной активности обработанного материала. Для тестирования антивирусной активности используют штаммы 3(///15/30, /-11, ///34,ВБНа, ПМВ Сендай, штамм 960). Определение инфекционности обработанного материала осуществляют путем титрования на куриных эмбрионах. Антивирусную активность оценивают по разности титров вируса (вЭИД 50) в обработанном и контрольном (без антибиотика) материалах. Результаты определения антивирусной активности антибиотика розеофунгин в отношении вируса гриппа приведены в таблице 2. Показана высокая антивирусная активность розеофунгина в отношении орто- и прамиксовирусов. Преимущество данного изобретения заключается в создании эффективного лекарственного средства в виде мази для лечения грибковых и вирусных поражений на кожных покровах и слизистых оболочках, а также разработке простого способа изготовления данного лекарственного средства. Разработанное лекарственное средство с противогрибковой и антивирусной активностью позволит расширить арсенал лечебных противогрибковых и антивирусных препаратов и повысить эффективность терапии грибковых и вирусных инфекций, поражающих кожные покровы и слизистые оболочки человека и животных. Таблица 1 Противогрибковая активность антибиотика розеофунгин Тест-организмТ. Таблица 2 Антивирусная активность антибиотика розеофунгин Вирусы Вирус гриппа, штамм ///15/30 Инфекционный титр в обратных логарифмах ЭИД 50 Доза 10 мкг Доза 50 мкг Контроль 4,3 4,2 6,0 6,2 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Лекарственное средство с противогрибковой и антивирусной активностью в виде мази, содержащее противогрибковый компонент, отличающееся тем,что содержит антибиотик Розеофунгин. 2. Способ получения лекарственного средства с противогрибковой и антивирусной активностью в виде мази, включающий использование антибиотика Розеофунгин, отличающийся тем, что используют Розеофунгин, полученный путем культивирования продуцента антибиотика Розеофунгин.1-68 на комплексной питательной среде, содержащей в качестве основного источника углерода коллоидную овсяную муку в количестве 30 г/л и очищенный путем экстракции из мицелия продуцента с помощью 96 этанола, который смешивают при комнатной температуре с диметилсульфоксидом при соотношении антибиотикдиметилсульфоксид 12 и полученную пасту смешивают при комнатной температуре до гомогенного состояния с мазевой основой, состоящей из полиэтиленоксида-1500 и полиэтиленоксида-400 при соотношении компонентов мази, масс. Розеофунгин 2,0,Диметилсульфоксид 4,0 Полиэтиленоксид-1500 22,0 Полиэтиленоксид-400 72,0