Питательная среда для культивирования лактобацилл

(51) 12 1/20 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ пептон, глюкоза, гидролизат казеина, мясной экстракт, О 4, О 4, Н 2 РО 4, дрожжевой экстракт, лимоннокислый натрий, фосфорнокислый натрий, твин 80 рН 6,5, предлагается в качестве компонента для обогащения сред дополнительно ввести, в состав питательной среды витаминный комплекс. При следующем соотношении компонентов, мас.- Витаминный концентрат 0,5 г/л, содержащий фолиевая кислота (В 9) 0,13 мг, аскорбиновая кислота 20 мг, пиридоксин (в форме гидрохлорида) 0,67 мг,рибофлавин 0,57 мг,целлюлоза микрокристаллическая 478 мг.(72) Садыков Азамат Мухамедьярович Балтабеков Арман Аллажарович Сураганова Динара Аскаровна Байсханова Динара Маратовна Байкенова Айымжан Ислямовна Идрисова Дамира Шегеновна(54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЛАКТОБАЦИЛЛ(57) Изобретение относится к биотехнологии и может быть эффективно использовано при лабораторном культивировании латобактерий. Задачей изобретения является получение модифицированной питательной среды. Технический результат - получена питательная среда, которая позволяет уменьшить рост, на ней,бактерий других групп, тем самым, обеспечивая улучшение роста молочнокислых бактерий. Это достигается за счет того, что в состав питательной среды для культивирования молочнокислых бактерий группы, содержащей Изобретение относится к биотехнологии и может быть применено в микробиологической, пищевой промышленности и касается способов приготовления питательных сред для культивирования лактобацилл. Известна питательная среда для культивирования молочнокислых бактерий (Патент РК 12096, кл. 12 1/20, опубл. 15.10.2002 г.,), содержащая мас.г/л.- сухая питательная среда 199-1,75- дистиллированная вода - остальное. Недостатком известной среды является сложность ее состава и использование дорогостоящего компонента - сухой питательной среды 199. Известна питательная среда для культивирования микроорганизмов, включающая аминокислотную основу, хлорид натрия, при этом, в качестве аминокислотной основы, используют аммиачноферментативный гидролизат отходов вакцинносывороточного производства и инкубаторного производства в виде глобулинов, или куриных эмбрионов, или сгустков крови, или фибрина,полученный путем аммиачного гидролизата измельченных смешанных с деминерализованной водой отходов и последующего гидролиза нативной поджелудочной железой крупного рогатого скота до содержания аминного азота 500-700 мгпри следующем соотношении химических соединений,мас.г/л Пептон 1-2 Хлорид натрия 1,0-1,2 Аммонийные соли 0,03-0,1 а также, мгОбщий азот 1100-1400 Аминный азот 200-220 Триптофан 80-200(см. пат.2103345, кл. 12 1/00, опубл. 27.01.1998 г.). Недостатком данной питательной среды является высокая стоимость. Наиболее близкой, по технической сущности и достигаемому положительному эффекту и принятая авторами за прототип, является питательная среда для культивирования лактобактерий и бифидобактерий, содержащая пептон, мясной экстракт, дрожжевой экстракт, казеин, глюкозу,калий фосфорнокислый, магний сернокислый,марганец сернокислый, твин 80. 13040, 12 1/20,2003. Недостатком данной среды является недостаточная питательная ценность для лактобактерий. Недостатком известных технических решений является недостаточно высокий выход и значительная длительность выращивания биомассы. В связи с этим поставлена техническая задача,разработать питательную среду с высокими ростовыми свойствами для культивирования молочнокислых бактерий. Задачей предлагаемого изобретения является получение качественной питательной среды на основе пептона, глюкозы, гидролизата казеина,мясного экстракта, с добавлением витаминного концентрата в качестве стимулятора роста лактобактерий. Технический результат, который может быть получен с помощью предлагаемого изобретения,сводится к увеличению количества колоний лактобактерий. Технический результат достигается с помощью питательной среды для культивирования лактобактерий, содержащей пептон, глюкозу,гидролизат казеина, мясной экстракт, О 4,Н 2 РО 4,дрожжевой экстракт,О 4,лимоннокислый натрий, фосфорнокислый натрий,твин, а в качестве стимулятора роста - витаминный концентрат при следующем содержании ингредиентов, мас.г/л- Витаминный концентрат 0,5 , содержащий фолиевую кислоту (В 9) 0,13 мг, аскорбиновую кислоту 20 мг, пиридоксин (в форме гидрохлорида) 0,67 мг, рибофлавин 0,57 мг, целлюлозу микрокристаллическую 478 мг. Сущность получения питательной среды для культивирования лактобактерий заключается в следующем для приготовления сред, в данных экспериментах, использовали гидролизат казеина панкреатический с вариацией концентрации от 0,1 до 3,00 г/л (рекомендуемая концентрация в среде для МКБ - от 0,1 до 1,00 г/л) и пептон ферментативный, неглубокой степени расщепления,с вариацией концентрации от 0,5 до 15,00 г/л. Эксперименты проводили в два этапа. На первом этапе культивирование МКБ осуществляли в колбах в термостате без нейтрализации образующихся кислот. На втором этапе наращивание биомассы МКБ осуществляли в ферментре, при автоматически регулируемых постоянных параметрах процесса температуре и активной кислотности, а также при непрерывном перемешивании. Кроме того, было поставлено несколько параллельных экспериментов культивирования МКБ в ферментре с такими же условиями, но окончание которых (несколькими часами ранее, в момент наблюдения максимума КОЕ МКБ) провели охлаждение культуральной среды с последующим получением биомассы. При проведении экспериментов на колбах на среде МРС 1 с гидролизатом казеина и пептоном в составе вырастает наибольшее количество жизнеспособных клеток МКБ - 4,010 КОЕ в 1 см 3 (максимум клеток соответствует 14-16 часам продолжительности процесса и существенно отличается от максимумов,наблюдаемых на других средах), а при проведении опытов в ферментре на этой среде получен второй по величине результат - 7,10 КОЕ в 1 см 3(соответствует 9 часовой продолжительности культивирования), уступающий только результату на стандартной среде МРС-1. При проведении микроскопических исследований культуральной жидкости, отбираемой в момент, близкий к наблюдению максимума КОЕ 11 см 3, отметили, что морфология клеток МКБ,полученных на среде с витаминным концентратом,существенно отличается от культур выращенных на стандартной среде МРС-1. В микроскопическом препарате присутствует относительно большое количество корковидных форм и палочковидных форм располагающихся попарно или цепочками. Это, возможно, объясняется благоприятным воздействием питательных компонентов среды на биологическую активность культуры. Следовательно,добавление витаминного концентрата целесообразно проводить при использование для наращивания биомассы МКБ на питательной среде МРС-1. На первом этапе исследований рассматривали 7 вариантов сред, варианты из 1-7 были приготовлены на основе витаминного концетрата, концентрация которых варьировалась для пептона - от 5,00 до 11,00 г/л, для гидролизата казеина от 3,00 до 10,00 г/л. Для сравнения использовали стандартную среду МРС-1. Из полученных данных видно, что существенное увеличение количества МКБ наблюдается при увеличении концентрации в среде пептона до 10,00 г/л и гидролизата казеина до 7,00 г/л. Это соответствует варианту среды 11,дальнейшее повышение концентрации этих компонентов не дат практически никакого увеличения 109 или дат несущественное повышение. На втором этапе исследований, уточняли наиболее рациональную концентрацию витаминного концентрата в среде, при массовой доле в ней пептона и гидролизата казеина. Концентрацию комплекса витаминов изменяли в рассматриваемых 7 вариантах от 0,1 до 10,00 г/л. Вариант, из предыдущих опытов, служил, здесь, для сравнения. Эксперименты осуществляли в ферментре при постоянных регулируемых параметрах процесса температуре,рН и при непрерывном перемешивании. Установили, что увеличение концентрации МКБ на 39,1 наблюдается при повышении содержания витаминного концентрата до концентрации 1,5 г/л. Способ поясняется следующими примерами Пример 1. Для активации использовали штамм культуры видаиз коллекции РГП КН МОН РКМ. На основе пептона, глюкозы,гидролизата казеина, мясного экстракта, О 4, Н 2 РО 4,дрожжевого экстракта,О 4,лимоннокислого натрия, фосфорнокислого натрия,твина, а в качестве стимулятора роста - витаминного концентрата. Культура изначально находилась в лиофилизированном состоянии. Культура регидрировалась и 10-кратно раститровывалась в питательной среде. Инкубировали 48 часов при 37 С. Пример 2. Для активации использовали штамм культуры видаиз коллекции РГП КН МОН РКМ. На основе пептона, глюкозы,гидролизата казеина, мясного экстракта, О 4,О 4,Н 2 РО 4,дрожжевого экстракта,лимоннокислого натрия, фосфорнокислого натрия,твина, а в качестве стимулятора роста - витаминного концентрата. Культура изначально находилась в лиофилизированном состоянии. Культура регидрировалась и 10-кратно раститровывалась в питательной среде. Инкубировали 48 часов при 37 С.Наработки при использовании ферментера в промышленных размерах.Перед культивированием глюкоза в виде 33 раствора 20 г/л добавляется в концентрат.Раствор вносится для поддержания концентрации по 5 г/л. Пример 3. Для активации использовали штамм культуры видаиз коллекции РГП КН МОН РКМ. Среда с минимальным содержанием ингредиентов. К 0,5 литра гидролизата, последовательно, добавляют глюкозы 10 г, пептона 4,5 г, сернокислого марганца 0,08 г,сернокислого магния 0,025 г., К 2 НРО 4 20,5 г.,дрожжевого экстракта 0,25, лимоннокислого натрия 0,25, фосфорнокислого натрия 1 г., твина 80 0,5 мл,витаминного концентрата 0,25 г Объем среды доводят до 1,0 л гидролизатом. После внесения всех ингредиентов измеряют рН, доводят до значения 7,4-7,6 разливают по флаконам и стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм в течении 15 мин. Предлагаемое изобретение, по сравнению с прототипом и другими известными техническими решениями, имеет следующие преимущества- повышение качества питательной среды увеличение выхода биомассы микроорганизмов. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Питательная среда для культивирования лактобацилл, включающая пептон, глюкозу,гидролизат казеина, мясной экстракт, 4,Н 2 Р 4,дрожжевой экстракт,4,лимоннокислый натрий, фосфорнокислый натрий твин 80, отличающаяся тем, что дополнительно содержит витаминный концентрат при следующем содержании ингредиентов, г/л Пептон 9,0 Глюкоза 20 гидролизат казеина 1,0 мясной экстракт 10 4 0,160 4 0,05 Н 2 Р 4 1,0 дрожжевой экстракт 5,0 3 лимоннокислый натрий 5,0 фосфорнокислый натрий 2,0 твин 80 1,0 витаминный концентрат 0,5 2. Питательная среда по п.1, отличающаяся тем, что витаминный концентрат состоит из следующих компонентов мг/л