Способ моделирования экспериментального хронического орхоэпидидимита

(51) 61 1/00 (2006.01) 61 7/00 (2006.01) 61 8/00 (2006.01) 61 10/00 (2006.01) 61 35/74 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ получения экспериментальной модели хронического орхоэпидидимита для усовершенствования общепринятых и разработка новых методов диагностики, лечения и профилактики этого заболевания у людей. Способ моделирования экспериментального хронического орхоэпидидимита включает введение в паренхиму мошонки на глубину 3 мм бактериальной культуры в виде смешанных культур стафилококкстрептококк в титре 106 микробных тел в объеме 0,2 мл, при этом модель экспериментального хронического орхоэпидемита диагностируют на 30 день после введения бактериальной культуры. В опытах на животных воспроизведена модель хронического орхоэпидидимита, соответствующая клиническому прототипу. Способ является воспроизводимым, мало травматичным, адекватным и специфичным.(72) Алчинбаев Мырзакарим Каримович Медеубеков Улугбек Шалхарович Кусымжанов Суният Мирзакенович Буйрашев Ануар Канашевич Токтабаянов Биржан Галымович Аубакирова Айгуль Токтасыновна(73) Акционерное общество Научный центр урологии им. академика Б.У. Джарбусынова(56) Чиненный В.Л. Острый эпидидимит в урологической практике. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата наук. // Москва, 1991, с.14-15(54) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ХРОНИЧЕСКОГО ОРХОЭПИДИДИМИТА Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к урологии и предназначено для получения экспериментальной модели хронического орхоэпидидимита для усовершенствования общепринятых и разработка новых методов диагностики, лечения и профилактики этого заболевания у людей. Острое воспаление яичка и придатка(орхоэпидидимит), является одним из наиболее частых урологических заболеваний. Более 27 мужчин на протяжении жизни переносят эпидидимоорхит. Как осложнение после различных перенесенных инфекционных заболеваний эпидидимит и эпидидимоорхит встречаются по данным различных авторов с частотой от 6,3 до 18 случаев. Статистические данные о частоте заболевания свидетельствуют об актуальности его изучения с различных точек зрения патогенетической,диагностической,лечебной,профилактической. Переход острого орхоэпидидимита в хронический чреват многими последствиями, среди которых наиболее серьзны это нарушение проходимости придатка яичка,развитие склеротического и дистрофического процессов в яичке, что приводит к нарушению репродуктивной функции этих органов на стороне поражения. При двустороннем поражении, что бывает особенно часто при орхоэпидидимите как следствии хронического простатита, т.е. наличии исходного очага инфекции в предстательной железе, как правило наступает аспермия. Известен способ моделирования экспериментального острого эпидидимита,включающий вскрытие мошонки экспериментального животного (крыса), выделение яичка и семявыносящего протока и введение в его проток культуры в объеме 0,1-0,2 мл кишечной палочки в титре 108 мл микробных тел с последующим ушиванием разреза мошонки.Л. Острый эпидидимит в урологической практике. Автореферат диссертации на соискание ученой степени канд. наук.1991, - Москва.,- с.14- 15). Недостатком способа является его травматичность, а также то, что использование для введения в семявыносящий проток культуры кишечной палочки для моделирования острого воспалительного процесса - эпидидимита - является недостаточно адекватным и оптимальным. При этом способ не предназначен для моделирование экспериментального хронического орхиэпиди димита. Анализ опубликованной патентной и медицинской информации, изучение выявленных аналогов свидетельствует о том, что не выявлено признаков, характерных заявленному способу по осуществлению моделирования экспериментального хронического орхоэпидидимита. Задачей изобретения является разработка способа моделирования экспериментального хронического орхоэпидидимита, который является воспроизводимым,не травматичным,демонстративным и оптимальным. Способ моделирования экспериментального хронического орхоэпидидимита включает введение в паренхиму мошонки на глубину 3 мм бактериальной культуры в виде смешанных культур стафилококкстрептококк в титре 106 микробных тел в объеме 0,2 мл, при этом модель экспериментального хронического орхоэпидидимита диагностируют на 30 день после введения бактериальной культуры. Способ осуществляют следующим образом. Животных содержат в одинаковых условиях обычного виварного режима при смешанном освещении. Кормление производят два раза в день в соответствии с установленными нормами. Для моделирования экспериментального острого орхоэпидидимита используют экспериментальных животных - белых крыс самцов линии Вистар массой тела 250-400 г, т.к. их наружные гениталии имеют относительно крупные размеры. Операционное поле (яичко) экспериментального животного предварительно обрабатывают 70 спиртовым раствором хлоргексидина. Введение осуществляют в паренхиму мошонки инсулиновым шприцом на глубину 3 мм, в объеме 0,2 мл. В качестве бактериальной культуры используют смешанные культуры стафилококкстрептококк в титре 106 микробных тел. Контрольным животным производят ведение 0,9 физиологического раствора в паренхиму мошонки. Для подтверждения модели экспериментального хронического орхоэпидидимита проводят ультразвуковой исследование семенников экспериментальных животных на аппарате 5 поверхностным датчиком с частотой 8-10 Мгц по сравнению с контролем. Также проводят УЗДГ и морфологические исследования экспериментальных животных по сравнению с контролем. Клиническую картину хронического орхоэпидидимита у экспериментальных животных диагностируют на 30 сутки после введения микробной взвеси по результатам УЗИ, УЗДГ, а также морфологических исследований. В течение 30 дней после введения наблюдают следующие клинические показатели 1 - общее состояние животного температуру, вес животного,состояние половых желез. Ультразвуковое исследование семенников экспериментальных животных проводят на аппарате 5 с помощью поверхностного датчика частотой 8-10 Мгц на 3, 7, 15 и 30 сутки. Также проводят УЗДГ на 3, 7, 15 и 30 сутки и морфологические исследования для диагностики развития хронического орхоэпидидимита у экспериментальных животных. Модель экспериментального хронического орхоэпидемита диагностируют на 30 день после введения бактериальной культуры. Пример выполнения способа. Белой крысе-самцу в яичко ввели в паренхиму мошонки инсулиновым шприцом на глубину 3 мм 0,2 мл бактериальной культуры (смешанные культуры стафилококкстрептококк) в титре 106 микробных тел. У крысы в остром периоде инфекции выявляли повышение температуры тела по сравнению с контролем, увеличение в размере семенников,снижение веса, уменьшение пульсационного индекса в артериях семенников, при УЗИ определялись мелкие гиоэховключения размером 24 мм,свидетельствующие о наличии воспалительного процесса в яичке, сосудистый рисунок яичка усиливался, количество видимых сосудов увеличилось. При морфологическом исследовании у крысы после введения бактериальной культуры в конце 1 недели в семенниках были обнаружены изменения,свидетельствующие о нарушении сперматогенеза. Повреждение семенников характеризовалось атрофией сперматогенного эпителия до стадии сперматогоний. Результаты гистологического исследования семенников крыс экспериментальной группы в начале опыта на 3 сутки, показали, что в паренхиме органа отмечалось умеренная деструкция, некробиоз и слущивание клеток сперматогенного эпителия в просвет семенных канальцев, развивались изменения в строении компонентов гематотестикулярного барьера. На 7 сутки наблюдали набухание неклеточных слоев собственной оболочки семенных канальцев и клеток Сертоли. Во многих участках эпителий семенных канальцев теряли свою многослойность. На 30 сутки после введения в паренхиму мошонки бактериальной взвеси при морфологическом и УЗИ и УЗДГ исследовании тканей мошонки определяли экспериментальный хронический орхоэпидидимит, заключающийся в снижение кровотока, формировании зоны склероза,рубцевании и окклюзия семенного протока,нарушении микроциркуляции и трофики тканей,инфильтрации тканей лимфоцитами и плазмоцитами, что приводило к уплотнению всего органа или его большой части. Апробация способа (экспериментальная модель) осуществлена на 40 крысах (табл. 1,2,3,4). Анализируя данные таблицы 1 видно, что в остром периоде во 2 группе наблюдали достоверное повышение температуры тела у экспериментальных животных в сравнении с контрольной 1 группой,затем температура тела к 30 дню нормализовалась,что свидетельствовало о хронизации процесса. На 4 сутки после введения бактериальной культуры 1 экспериментальное животное, которой ввели 0,2 мл смешанной бактериальной культуры погибло, был произведен забор яичка вместе с придатком на морфологической исследование, у остальных животных отмечались клинические и локальные проявления хронического орхоэпидидимита - табл. 1,2,3,4. Снижение веса к 30 дню наблюдения, увеличение размеров семенника,снижение пульсационного индекса в артериях семенников крыс после введения культуры в различных группах. Таблица 1 Динамика изменений температуры тела у крыс сутки 0,02 в сравнении с контрольной группой 0,04 в сравнении с 1,2 группами Таблица 2 Динамика изменений размеров семенников у крыс сутки 0,04 в сравнении с контрольной группой 0,03 в сравнении с 1,2 группами Таблица 3 Динамика изменения веса у крыс сутки Таблица 4 Динамика изменений пульсационного индекса в артериях семенников крыс после введения культуры в различных группах Группы 0,05 в сравнении с показателями до введения культуры УЗИ данныегруппа(проведено введение стафилококкстрептококк). 3 сутки определялось увеличение размеров яичка на 3-5 мм, в структуре - мелкие гиоэховключения размером 2-4 мм,свидетельствующие о наличии воспалительного процесса в яичке, сосудистый рисунок яичка усиливается,количество видимых сосудов увеличивается. 7 сутки определялось увеличение размеров яичка на 5-7 мм, в структуре - множественные мелкие гипоэховключения, сосудистый рисунок яичка усилен, количество видимых сосудов увеличено. 15 сутки размеры яичка прежние, в структуре определялись единичные гипоэховключения, а также появление мелких участков уплотнения размером 1-2 мм. 30 сутки размеры яичка нормальные, в структуре определялись участки повышенной плотности размером от 3-9 мм, на УЗДГ кровоток в области уплотнения значительно снижен,отмечается оскуднение и деформация сосудистого рисунка в области участка фиброза, скорость кровотока снижена по сравнению с контрольной группой. При сравнении данных УЗДГ опытной и контрольной групп экспериментальных животных,на 30 сутки, в структуре семенников определялись участки повышенной плотности размерами 3-9 мм,значительное снижение кровотока в области уплотнения, отмечается оскуднение и деформация сосудистого рисунка. При морфологическом исследовании у экспериментальных животных после введения бактериальной культуры в конце 1 недели в семенниках были обнаружены изменения,свидетельствующие о нарушении сперматогенеза. Повреждение семенников характеризовалось атрофией сперматогенного эпителия до стадии сперматогоний. Результаты гистологического исследования семенников крыс экспериментальной группы в начале опыта на 3 сутки, показали, что в паренхиме органа отмечалось умеренная деструкция, некробиоз и слущивание клеток сперматогенного эпителия в просвет семенных канальцев. А также развивались изменения в строении компонентов гематотестикулярного барьера. На 7 сутки наблюдали набухание неклеточных слоев собственной оболочки семенных канальцев и клеток Сертоли. Во многих участках эпителий семенных канальцев теряли свою многослойность. На 30 сутки в семенных канальцах выявили очаговое нарушение сперматогенеза, происходило слущивание умеренного числа половых клеток и их гибель. В других канальцах деструктивные изменения обнаружены в семенных канальцев вплоть до их полного опустошения на всех в одной опытной группе. Наблюдали уменьшение диаметра семенных канальцев, тенденцию к увеличению количества интерстициальной ткани, в дальнейшем к уплотнению всего органа или его части. При гистологическом исследовании определяли обширное рубцевание и окклюзия протока, ткани инфильтрированы лимфоцитами и плазмоцитами. Воспроизведен экспериментальный хронический орхоэпидидимит, определяемый как хроническое воспаление яичка и придатка и при этом идентичный клиническому прототипу, что дат основание полагать,что подобный интралюминарный рефлюкторно-адгезивный патогенетический механизм присущ орхоэпидидимиту в клинической практике. Полученную экспериментальную модель хронического орхоэпидидимита возможно использовать для изучения эффективности лечебного воздействия различных лекарственных препаратов в эксперименте. В опытах на животных воспроизведена модель хронического орхоэпидидимита, соответствующая клиническому прототипу. Способ является воспроизводимым, мало травматичным, адекватным и специфичным. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ моделирования экспериментального хронического орхоэпидидимита,включающий введение в организм экспериментального животного бактериальной культуры, отличающийся тем, что в качестве бактериальной культуры используют смесь культур стафилококка и стрептококка в титре 106 микробных тел, введение осуществляют в паренхиму мошонки на глубину 3 мм в объеме 0,2 мл, результат моделирования оценивают через 1 месяц после введения бактериальной культуры.