Спсоб получения биомассы клеток растений в условиях in vitro

(51) 01 4/00 (2011.01) 12 5/04 (2011.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ за счет повышения эффективности процесса, за счет увеличения прироста получаемой биомассы за определенный промежуток времени. Технический результат достигается тем, что способ получения биомассы предусматривает заготовку эксплантов из различных частей растений кодонопсиса ломоносового),их стерилизацию,помещение эксплантов для каллусообразования и роста биомассы в стерильные чашки Петри с питательной средой Мурасиге-Скуга с добавлением ростовых стимуляторов каллусообразования,термостатирование при температуре 261 С и относительной влажности 70, после образования каллусов, чашки Петри с каллусами обрабатывают низкочастотным электромагнитным полем (НЧ Э) с помощью прибора Фауст на рабочей частоте 10-13 Гц в течение 10-15 минут. Каждую последующую неделю проводят визуальную оценку и взвешивание прироста биомассы каллусов.(72) Надирова Санам Абдуллаевна Лесова Жаниха Туреевна(73) Акционерное общество Алматинский технологический университет(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ КЛЕТОК РАСТЕНИЙ В УСЛОВИЯХ(57) Изобретение предназначено для использования в области сельского хозяйства и биотехнологии и может быть использовано для получения оздоровленного посадочного материала(каллуса) растительного сырья для фармацевтической и косметической промышленности. Техническим результатом изобретения является получения биомассыпутем увеличения производительности процесса получения биомассы Изобретение предназначено для использования в области сельского хозяйства и биотехнологии и может быть использовано для получения оздоровленного посадочного материала(каллуса) растительного сырья для фармацевтической и косметической промышленности. Наиболее широко распространенным способом получения биомассы (каллуса) для указанных целей являются биотехнологические способы роста культур клеток и тканей(см. Патент РФ 2286053, кл. А 01 Н 4/00 12 5/04). Известный способ получения биомассыпредполагает изоляцию зон роста в виде различных эксплантов из исходного растения, стерилизацию их и помещение в стерильных условиях на питательную среду Мурасиге-Скуга (МС) с заданным составом фитогормонов и витаминов. Для накопления биомассы(каллуса) обычно используются первичные экспланты в виде проростков семян,частей листьев и стеблей, пазушных и апикальных меристем и почек клубней или корнеплодов растений. Недостатком известного способа является его низкая производительность(эффективность),обусловленная недостаточным приростом биомассы образовавшего каллуса (не более 60 от исходной массы) за определенный период (14-28 дней). Этот недостаток ограничивают возможность применения способа для промышленного производства. Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому является способ получения биомассы(см. РФ 2222933, кл. А 01 Н 4/00 12 5/04, публ. 2007) , включающий заготовку эксплантов из проростков, тканей или клеток, их стерилизацию,помещение эксплантов для каллусообразования роста биомассы в стерильные пробирки с модифицированной питательной средой Мурасиге-Скуга с добавлением ростовых факторов каллусообразования,термостатирование при температуре 261 С и относительной влажности 70. На этапе роста биомассы в способе осуществляется воздействие посредством индуктора последовательностью однонаправленных импульсов магнитной индукции с амплитудным значением 0,05 Тл, периодом 5,12 с, причем апикальную часть экспланта ориентируют противоположно направлению вектора магнитной индукции, а число импульсов устанавливают от 10 до 100. Способ позволяет увеличить количество образующейся биомассы. В этом случае рост биомассы происходит только на неинфицированных эксплантах, образовавших каллус. При этом основные потери исходного материала из-за инфицирования отсутствия каллусообразования не были устранены. Недостатком прототипа является то, что он не позволяет повысить биомассыдо промышленного применения. Техническим результатом изобретения является получения биомассыпутем увеличения 2 производительности процесса получения биомассы за счет повышения эффективности процесса, за счет увеличения прироста получаемой биомассы за определенный промежуток времени. Технический результат достигается тем, что способ получения биомассы предусматривает заготовку эксплантов из различных частей растений кодонопсиса ломоносового),их стерилизацию,помещение эксплантов для каллусообразования и роста биомассы в стерильные чашки Петри с питательной средой Мурасиге-Скуга с добавлением ростовых стимуляторов каллусообразования,термостатирование при температуре 261 С и относительной влажности 70, после образования каллусов, чашки Петри с каллусами обрабатывают низкочастотным электромагнитным полем (НЧ ЭМП) с помощью прибора Фауст на рабочей частоте 10-13 Гц в течение 10-15 минут. Каждую последующую неделю проводят визуальную оценку и взвешивание прироста биомассы каллусов. Способ осуществляют следующим образом. Берется по 40 пробирок с питательной средой и эксплантами являлись зародышевые листки растений кодонопсиса ломоносового (), подвергают их стерилизации, помещают экспланты для каллусообразования и роста биомассы в 40 стерильных чашек Петри с питательной средой Мурасиге-Скуга с добавлением ростовых стимуляторов каллусообразования,термостатируют при температуре 261 С и относительной влажности 70, а после образования каллусов, чашки Петри с каллусами обрабатывают низкочастотным электромагнитным полем (НЧ ЭМП) с помощью прибора Фауст на рабочей частоте 10-13 Гц в течение 10-15 минут. Затем каждую последующую неделю проводят визуальную оценку и взвешивание прироста биомассы каллусов. Эффективность стерилизации (Э 1) определяют по количеству неинфицированных эксплантов после стерилизации (с) в процентах от исходного количества стерилизуемых эксплантов (х) С Э 1100( Э 2) определяют по количеству стерильных эксплантов,образовавших каллус в пробирках с питательной средойв процентах, от исходного количества вводимых в культуру эксплантов (х) Прирост биомассы определяют в граммах и процентах. Прирост биомассы в граммах - это разница между конечным и начальным весом биомассы,образовавшейся за определенный промежуток времени. Прирост биомассы в процентах - это разница между конечным и начальным весом биомассы за определенный промежуток времени, отнесенный к начальному весу каллуса в культивационной пробирке. Результаты стерилизации эксплантов по способу,принятому за прототип низкочастотным электромагнитным полем), и по предложенному способу представлены в таблице 1. Таблица 1 Результаты стерилизации эксплантов кодонопсиса ломоносового ( ) Вариант Исходное количество Количество неинфицированных эксплантов, шт. эксплантов, шт. Предложенный способ 30 Эффективность каллусообразования по предложенному способу представлена результатами эксперимента, приведена в таблице 2. Таблица 2 Результаты каллусообразования из эксплатов кодонопсиса ломоносового ( ) Вариант Предложенный способ 30 Результаты прироста биомассы представлены в таблице 3. Таблица 3 Прирост биомассы кодонопсиса ломоносового ( ) Прирост биомассы Абсолютный. г Таким образом, в результате реализации предлагаемого способа получения биомассыбыла решена проблема получения биомассы за счет повышения эффективности этого процесса практически в два раза. При воздействии (НЧ ЭМП) на каллусы,находящиеся в питательной среде,интенсифицируется процесс проникновения питательной среды внутрь каллусов и растущей биомассы. Ускорение процесса проникновения питательной среды к поверхности каллусов обеспечивает повышение прироста биомассы. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения биомассы клеток растений в условиях,включающий заготовку эксплантов из различных частей растений, их стерилизацию,помещение эксплантов для каллусообразования и роста бимассы в стерильные пробирки с модифицированной питательной средой Мурасиге-Скуга с добавлением ростовых стимуляторов каллусообразования, термостатирование при температуре 261 С и относительной влажности 70, отличающийся тем, что в качестве растения используют кодонопсис ломоносовый( ), а для каллусообразования и роста биомассы чашки Петри с каллусами обрабатывают низкочастотным электромагнитным полем (НЧ ЭМП) с интенсивностью не менее 10-13 Гц в течение 10-15 минут.