Способ получения пероральной вакцины против бешенства плотоядных животных

(51) 61 39/205 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ пероральной вакцины, который, не растворяясь в желудке попадает в тонкий отдел кишечника,оболочка распадается,вакцинный материал всасывается и попадает в мезентеральные лимфоузлы и происходят иммунные реакции с образованием секреторных антител против бешенства, обуславливающий защиту у животного от инфекций. Капсулы изготавливали из желатины, а затем фиксировали в формалине для создания их устойчивости к желудочному соку. Вакцинный материал из мозга овцы заключали в капсулы и скармливали плотоядным животным. При серологических исследованиях у перорально вакцинированных животных были установлены высокие титры специфических антител против бешенства, способные предохранять привитых животных от этой инфекций.(72) Рожаев Балтабек Галиевич Муралинов Каримхан Каирханович(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕРОРАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ БЕШЕНСТВА ПЛОТОЯДНЫХ ЖИВОТНЫХ(57) Изобретение относится к области ветеринарной эпизоотологии, а именно к способу получения вакцины против бешенства. Техническим результатом является способ получения вакцины против бешенства путем пероральной иммунизаций плотоядных культуральной вакциной изготовленного из вируса бешенства штамм,овечий ВГНКИ после применения которого у животных возникает стойкий иммунитет. Получение специфической Изобретение относится к области ветеринарной эпизоотологии, а именно к способу получения вакцины против бешенства. Существует способ получения антирабической вакцины. Для осуществления способа штамм вируса бешенства Внуково - 32 выращивают в культуре клеток, собирают вируссодержащую жидкость,инактивируют ее последовательной обработкой ультрафиолетовыми лучами и формалином. Инактивированный вирус подвергают концентрированию и очистке с помощью ультрафильтрации через пористые мембраны и гельфильтрации на пористых кремнеземах,модифицированных поливинил-пирролидоном. Аксенова Т А., Эльберт Л.Б., Селимов МА.,Красильников И.В., Кротова Л.И., Грибенча Л.Ф. Авторское свидетельство СССР 736333. Недостатки этого способа состоят в том, что полученная вакцина не является пероральной и не может применятся для диких плотоядных животных. Существует способ получения антирабической вирусвакцины против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных,который осуществляется следующим образом вакцинный вирус бешенства, штамм ТС-80,выращивают в перевиваемой культуре клеток почки сайги и смешивают его с защитными компонентами(вирусная суспензия стабилизирующая среда, состоящая из 40 раствора пептона с 8 раствором лактозы 4 раствор пектина соответственно), полученный после смешивания полуфабрикат наносят на приманку(пористый брикет), замораживают и высушивают сублимацией в течение 24-30 часов (Хрипунов Е.М. и др. 2157700). Недостатки этого способа состоят в том, что полученная вакцина не является гомогенной,брикеты не стандартизованы и могут крошиться при хранении. В настоящее время разработано несколько пероральных вакцин против бешенства, однако они во многом не решают проблемы окончательной иммунизации против бешенства плотоядных животных. Известен способ получения вирусвакцины(Патент РФ, 10.20.2000) против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных, при котором выращенную в перевиваемой культуре клеток почки сайги суспензию вируса бешенства,штамм ТС-80, смешанную со стабилизирующими компонентами в соотношении 112, подвергают сублимационному высушиванию в течение 48-72 часов, размалывают в шаровой мельнице и заполняют полученной массой полые брикетыприманки. Недостаток этого метода состоят в сложности технологии изготовления(лиофилизация,размалывание, заполнение брикетов-приманок),трудности получения почки сайги, осуществления процесса выращивания в культуре клеток и высокая себестоимость препарата. 2 Наиболее близким техническим решением является способ изготовления вакцины, которая содержит сублимационно высушенную суспензию штамма вируса ТС-80 и стабилизатор. В качестве стабилизатора,защищающего вирус от инактивирующего воздействия желудочного сока и факторов внешней среды, она содержит пептон,лактозу и пектин ( 2157700, 1999) После двукратной с интервалом в 12 - 14 суток прививки вакцина стимулирует у вакцинированных животных выработку вируснейтрализующих антител в пределах 116 - 132. Изобретение позволяет получить сублимационную вакцину против бешенства,обладающую высокой иммунологической эффективностью при пероральной иммунизации плотоядных животных от бешенства. В настоящее время борьба с природно-очаговым бешенством среди диких плотоядных животных являются проблематичным. Связано это с тем, что обычные способы вакцинации являются практический не осуществимыми. Наиболее реальной иммунизацией против бешенства диких плотоядных животных является применение пероральных вакцин. Полученные в настоящее пероральные вакцины имеют определенные недостатки, являются слабо иммуногенными, имеют малый срок сохранности и быстро портятся при разбрасывании в виде приманок, плохо сохраняют первичную форму,быстро крошатся и т.д. Задачей изобретения является разработка способа получения вакцины для пероральной иммунизации против бешенства диких плотоядных животных, которое вызывало бы у них возникновение высоких титров специфических антител и предохраняло от заболевания в течение года. Техническим результатом является способ получения вакцины против бешенства путем пероральной иммунизаций плотоядных тканевой вакциной изготовленного из вируса бешенства штамм овечий ВГНКИ, после применения которого у животных возникает стойкий иммунитет. Получение специфической пероральной вакцины,который не растворяясь в желудке попадает в тонкий отдел кишечника, оболочка распадается,вакцинный материал всасывается и попадает в мезентеральные лимфоузлы и происходят иммунные реакции с образованием секреторных антител против бешенства, обуславливающий защиту у животного от инфекций. Технический результат достигается следующим методом Для проведения опытов были использован в качестве вакцинного материала мозг овцы зараженного вирусом фикс штамм овечий. Для испытания вакцины заключали в капсулы в количестве 1 г в каждой. Капсулы изготавливали из желатины, растворяли ее первоначально в холодной воде и затем постепенно нагревали в водяной бане до получения сметанообразной однородной массы. В жидкую желеобразную массу желатина погружали в течение 1 минуту пробирки донной частью, затем извлекали и давали остыть и затвердеть в течение 2 часов при комнатной температуре. Застывшую на поверхности дна пробирки оболочку из желатины разрезали острым скальпелем на расстоянии 4 см от начала по окружности и снимали выворачиванием наружу наподобие чулка. Затем полученные капсулы из желатины обрабатывали в 0,5-ом растворе формалина в течение 5 минут для создания устойчивости к желудочному соку. Как известно желатин является наполнителем многих пищевых продуктов, изготавливается из пектина и при поедании растворяется под воздействием желудочного сока в кислой среде желудка. В опыте были использованы 4 собаки, у которых были вставлены фистулы в желудок, и имелся доступ его полость. Двум животным было скормлено по десять капсул с живым вакцинным содержимым,не обработанных раствором формалина, а другим 2 собакам также задавали по 10 вакцина содержащих капсул фиксированных в формалине. В течение каждого получаса капсулы извлекали пинцетом из желудка животных и проводили визуальный осмотр на внешнее состояние. Наблюдениями было установлено, что в течение 1,5- 2-х часов капсулы не обработанные формалином полностью разрушались, и вакцинная масса попадала в полость желудка. Вакцинную массу в полости исследовали на выживаемость вируса,получая каждые 30 минут на пробу в течение 4 часов до полной эвакуации ее из желудка в кишечник. В полученных из желудка проб из вакцинной массы определяли выживаемость вируса в реакции нейтрализации на белых мышах. Полученные данные приведены в таблице 1. Таблица 1 Выживаемость вакцинного вируса в желудке у собак Собака Проведенными исследованиями установлено, что вакцинный вирус в желудке собаки в течение 3-х часов в десятки раз теряет свою активность и инактивируется. Капсулы обработанные формалином в целостности проходили желудок и растворялись в тонких отделах кишечника. Следовательно,нами были разработаны пероральные вакцины с желатиновой оболочкой фиксированные в формалине и способные противостоять воздействию желудочного сока. Оболочка полученной пероральной вакцины не растворялась в желудке и распадалась в тонком отделе кишечника. Вакцинный материал,всасываясь в тонком отделе кишечника через пфейверовы бляшки, попадала в лимфоидную систему кишки и вызывала иммунный ответ в организме. Антирабические вакцины из ткани мозга животных могут вызывать поствакцинальные осложнения, которые в отдельных случаях заканчиваются летально. Этиология поствакцинальных осложнений неоднозначна и включает несколько факторов, основным из которых являются белки ткани мозга животных,главным образом миелин, вызывающий тяжелые нейропаралитические осложнения вторым может быть фиксированный вирус бешенства, который содержится в живых антирабических вакцинах. Целью наших исследования явилось апробирование различных вакцинных штаммов на патогенность и безвредность при использовании их для приготовления пероральной вакцины для диких плотоядных животных. Опыты были проведены на 12 собаках, которые были распределены на 3 группы, им были скормлены 2 вида тканевого вакцинного штамма вируса - фикс бешенства пассированных через головной мозг овцы и 1 вид культурального штамма, которые были условно обозначены под номерами 1, 2 и 3. Животным первой группы задавали по 3 г мозга, второй группе 6 г и третьей 10 г культурального вирусного материала. За животными проводилось ежедневное клиническое наблюдение в течение 30 дней. Случаев болезни или гибели среди подопытных животных не было. Следовательно,апробированные нами вакцинные штаммы бешенства с целью создания пероральных вакцин являются безвредными для диких плотоядных животных при пероральном применений в повышенных дозах. Культуральный вакцинный штамм обладает слабо реактогенным действием и вызывает незначительные клинические отклонения, что являются не опасными для здоровья животных. Дальнейшей целью исследования было разработка методов иммунизации плотоядных животных пероральной вакциной против бешенства. Для опытов были взяты собаки, которые были распределены на 12 групп, всем подопытным животным скармливались различные виды разработанных и полученных нами пероральных вакцин. Изучалась иммуногенность пероральных вакцин при их однократном, двукратном и трехкратном применений. Вакцины под условными номерами 1, 2, и 3 были заключены в желатиновые капсулы с различной устойчивостью к воздействию кислой среды, не подвергаясь при этом инактивации под воздействием протеолитических ферментов желудка, и способные растворятся только в тонком отделе кишечника. 3 У подопытных животных на 14, 21 и 28 сутки было произведено взятие сыворотки крови для изучения результатов проведенной пероральной вакцинации. Результаты полученных данных приведены в таблице 2. Проведенными экспериментами было установлено, все виды пероральных вакцин обладают иммуногенными свойствами. Наиболее высокими были титры антител против бешенства при дву- и трехкратной вакцинации, показатели которых на 2-3 порядка были выше, чем при однократной вакцинации. Высокую иммуногенность показала вакцина под номером 3 во всех подопытных группах. Следовательно,нами разработан способ получения пероральной вакцины против бешенства плотоядных животных, при экспериментальных исследованиях они показали высокие иммуногенные свойства. Таблица 2 Динамика нарастания титров антител впри пероральной вакцинации плотоядных животных ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения пероральной вакцины против бешенства плотоядных животных, включающий штамм овечий вируса бешенства, отличающийся тем, что используют штамм овечий ВГНКИ,который заключают в устойчивые капсулы,изготовленные из желатины и затем обрабатывают 0,5-м раствором формалина в течение 5 минут.