Способ получения инактивированной вакцины против микроспории плотоядных животных

(2010.01), 61 31/10 (2010.01), 12 1/14 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ использовано для активной профилактики и лечения микроспории плотоядных животных. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в получении стабильной,безвредной и высокоэффективной инактивированной вакцины против микроспории плотоядных животных. Способ получения инактивированной вакцины против микроспории плотоядных животных,включающий накопление биомассы культур микроспор, смешивание е с инактиватором и добавление адъюванта, в качестве ианктиватора используют дезинтегратор УЗДН-1 при частоте 22 кГц и мощность 100 Вт/см 3 ультразвуковых волн до полного разрушения споровых элементов гриба,3 доводят концентрацию белка до 1,5 мг/см и получают целевой продукт.(72) Сабыржанов Арман Умиржанович Арысбекова Алтынай Танибергеновна Умитжанов Мынбай Бижанов Болат Рахметович Боранбаева Райхан Султанмуратовна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНАКТИВИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ МИКРОСПОРИИ ПЛОТОЯДНЫХ ЖИВОТНЫХ(57) Изобретение относится к области микологии, а именно к способу получения противомикологической вакцины и может быть 23379 Изобретение относится к области микологии, а именно к способу получения противомикологической вакцины и может быть использовано для активной профилактики и лечения микроспории плотоядных животных. Известен способ получения инактивированый вакцины против микроспории животных,включающий накопление биомассы культуры микроспор, смешивание ее с инактиватором и добавление адъюванта Патент Российской Федерации 02084241, кл. А 61 К 39/00, 1997. Недостатком способа получения вакцины против микроспории плотоядных животных является низкая эффективность. Задачей изобретения является повышение иммуногенности вакцины и расширение диапазона эффективности специфической профилактики и лечения микроспории плотоядных животных. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в получении стабильной,безвредной и высокоэффективной инактивированной вакцины против микроспории плотоядных животных. Способ получения инактивированной вакцины против микроспории плотоядных животных,включающий накопление биомассы культур микроспор, смешивание е с инактиватором и добавление адъюванта, в качестве инанктиватора используют дезинтегратор УЗДН-1 при частоте 22 кГц и мощность 100 Вт/см 3 ультразвуковых волн до полного разрушения споровых элементов гриба,доводят концентрацию белка до 1,5 мг/см 3 и получают целевой продукт. Изобретение осуществляется следующим образом. Штамм гриба, используемый для получения инактивированной вакцины против микроспории плотоядных животных депонирован в Лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО КазНИВИ и обладает следующими свойствами. Штамм гриба-0318. Морфологические признаки. Штамм гриба-0318 КазНИВИ 2 обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя микроспории собак. Окрашенные по Граму культуры гриба грамположительные. Культуральные свойства. Культуры гриба быстрорастущие, рост колонии наблюдается на 2-5 й день в виде маленького пушистого возвышения,окруженный зоной блесоватого пушка к 10-му дню достигают диаметра 4-5 см. Штамм гриба-0318 КазНИВИ 2 ветвящиеся, беловатые, сероватые или бежевые,пушистые, бархатисто-мучнистые, распростертые,овальные, растущий край воздушного мицелия паутинистый. Размеры шириной 0,6-3,5 мкм,септированный,изогнуты,иногда гифы ракетообразные, микроконидии немногочисленные,овальные, грушевидные, размером 3-6 х 2,5-3,5 мкм,сидящие или прикрепленные короткими ножками,встречаются не постоянно, располагаются на конидиеносцах различного размера макроконидии многочисленные,веретеновидной формы с 2 вытянутыми концами, с толстостенной гладкой или зубчатой оболочкой, с 8-12 перегородками,размером 50-120 х 15-25 мкм, располагающихся иногда на равном расстоянии одна от другой по ходу мицелия. Артроспоры гриба единичные или отсутствуют. Хламидоспоры округлые,интеркалярные диаметром 8-12 мкм, располагаются на равном расстоянии друг от друга по ходу мицелия, единичные или отсутствуют. Биохимические свойства. Штамм гриба-0318 КазНИВИ 2 - из углеводов постоянно усваивает сахарозу, глюкозу,мальтозу, манит факторы роста - тиамин,никатиновая,патнтотеновая,парабензойные кислоты. Стимуляторы роста - железа, цинк,марганец, медь, молибден, кальций, кобальт,никель, бор и др. Сероводород и индол не образует. Антигенные свойства. На введение культуры штамма в организме кошек, собак и пушных зверей(кроликов) образуются специфические агглютинины в титрах 140 - 1 1280. Маркерные признаки. Физиологические хемогетеротроф. По отношению к кислороду аэроб. Пептоны, аспарагин, глутоминовая кислота,сусло агар, аминокислоты, углеводы, сахароза,глюкоза, мальтоза, маннит факторы роста (тиамин,никотиновая, пантотеновая, парабензойная кислоты и др.) стимуляторы роста (железа, цинк, марганец,медь, молибден, кальций, кобальт, никель, бор и др.). Биохимические - на сусло агаре при рН 7,2-7,4 до концентрации 60 - 145 млн/см 3 макроконидии многочисленные, овальные размером 15-2550-120 мкм микроконидии округлые или грушевидные,иногда продолговатые, размер 3-6 х 2,6-3,5 мкм,встречается не постоянно. Иммунохимические - в реакциях РСК и РНГА титры антител составляет от 140 до 1 1280 отличается от эпизоотических штаммов слабой вирулентностью, высокой спорогенностью и активностью при внутримышечном введении. Патогенные свойства. Штамма гриба-0318 КазНИВИ 2 патогенен для кошек, собак, пушных зверей и мышевидных грызунов. Иммуногенность. При двукратном внутримышечном введении штамм в дозе 20 х 106 макроконидии создает напряженный иммунитет у привитых кошек, собак и пушных зверей (кроликов) к последующему заражению микроспории продолжительностью не менее 12 месяцев. Безвредность. Штамм гриба 0318 КазНИВИ 2 безвреден для кошек, собак и пушных зверей (кроликов) в дозе 20 х 106 макроконидии при внутримышечном введении. Реактогенность. Штамм гриба-0318 КазНИВИ 2 слабореактогенен для кошек,собак и пушных зверей (кроликов) при внутримышечном введении, так как вакцина приготовлена из убитых (инактивированных) клеток дерматофитов. У привитых животных спустя 15-25 дней на месте инъекции развивается небольшой специфически локализованный поверхностный 23379 очажок, который самопроизвольно излечивается в течение 2-3 недель. Спорообразование. Максимальный уровень спорообразования на сусло-агаре 60-145 млн/см 3. Реверсабельность и реактогенность. Штамм гриба-0318 КазНИВи 2 отличается от эпизоотических изолятов слабой вирулентностью, отсутствием заражения при контакте между животными, высокой активностью при внутримышечном введении животным. Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штамма гриба-0318 КазНИВИ 2 стабильно сохраняются на протяжении года (при 2-3-х кратном пассаже в течение года) при пассаже культуры на питательных средах (срок наблюдения). Сохраняемость в лиофильно-высушенном состоянии в присутствии жидкого обезжиренного молока или 10 сахарозы и 1,5 желатина штамм гриба-0318 КазНИВИ 2 не снижает активности при температуре 2-10 С в течение 12 месяцев, в нативном состоянии в течение 6 месяцев, в замороженном при минус 40 С в течении 6 месяцев, при минус 20 С ниже в течение 2 лет. После растворения из лиофилизированного состояния физиологическим раствором хлорида натрия или дистиллированной водой с рН 7,2-7,4 гриб сохраняет биологическую активность при температуре 26-28 С в течение 5 часов, при 4 С - 3 сут. Пример 1. Для получения инактивированной вакцины против микроспории плотоядных животных берут 14 суточную (культуру штамма-0318 и выращивают в матровых колбах на сусло-агаре при рН 7,2-7,4 и температуре 26-28 С в течение 18 дней. Выращенную грибницу культуры в условиях асептики снимают с поверхности питательной среды стеклянными грибными скребками и помещают в стерильные банки. На собранный вакцинный штамм из расчета 11 добавляем по 300,0 см 3 стерильный физиологический раствор. Грибную массу штамма гомогенизируют в миксерах, затем подвергают разрушению ультразвуком на УЗДН-1 частотой волн 22 кГц, интенсивностью 100 Вт/см 2 в течение 1 часа. После разрушения гомогенная масса помещается в холодильник при температуре 4-8 С в течение 1 сут. Затем берется проба для микроскопического анализа на наличие не разрушенных спор с последующим посевом на питательные среды. После этого берутся 3 пробы для бактериологического и микологического контроля в дозе 1,0 см 3. Далее полученную гомогенную массу центрифугируют при 600 об/мин в течение 20 мин. Верхний слой гомогената необходимо для изготовления моновакцины. С помощью фотоэлектроколориметром определяют концентрацию полученного белка в 1,0 см 3 полученного супернатанта. После к грибной суспензии антигена на солевом растворедобавляют гель гидрата окиси алюминия (8-12) по сухому веществу. Посуточную смесь ставят в термостат до 1 сутки и время от времени перемешивают 3-5 раз. После этого к вакцине добавляют глицерин (98 химически чистый) из расчета 8-12 от объема гомогената. Все тщательно перемешивают, разливают по 2,0 см 3 в стерильные ампулы объемом 2,0-5,0 см 3, запаивают в стерильных условиях с помощью газовой горелки, и этикетируют. Пример 2. Для изучения иммуногенной активности инактивированную вакцины против микроспории плотоядных животных берут трех групп животных, в каждой из которых находятся по три вида (по пять голов) животных (собаки, кошки и кролики). Каждому животному опытной группы вводят внутримышечно по 1,0 см 3 ресуспензированной инактивированной вакцины в область крупа дважды с начало левой, а потом справой стороны бедренным группам мышц с интервалом 14 дней. Спустя 25-28 дней после второй иммунизации, все 15 голов животных трех опытной группы, а также по 5 голов из трех контрольных групп(не иммунизированных животных) экспериментально заражают гомологичной вирулентной эпизоотической культурой рода . В течение 30-35 дней за опытными и контрольными группами животных ведут наблюдение, а клинический осмотр животных осуществляют через каждые 3-5 дней. От животных с клиникой микроспории отбирают патологический материал, и проводят высевы на питательные среды и уточняют визуально полученный диагноз заболевания данных животных микроспорией. При обнаружении у животных микроспории, а также подтверждения диагноза, животных подвергают лечению двух или трехкратному введению профилактической дозы жидкой инактивированной вакцины в тех же интервалах, что и профилактические дозы данного биологического препарата. Результаты проведенной работы учитываются спустя 25-30 дней после второй иммунизации заболевших животных терапевтической дозой инактивированной вакциной против микроспории плотоядных животных. Результаты иммуногенной активности(профилактической и терапевтической дозы) инактивированной вакцины против микроспории плотоядных животных отражены в таблицах 1 и 2. Из таблицы 1 и 2 видно, что инактивированная вакцина против микроспории плотоядных животных при ее проверке на иммуногенную активность проявила высокую профилактическую и терапевтическую эффективность, в том числе и при лечении заболевших животных с явной клинической формой микроспории. Использование предлагаемого способа получения инактивированной вакцины против микроспории плотоядных животных в ветеринарной практике позволит повысить эффективность мероприятий по профилактике и терапии от возбудителяв Республике Казахстан. 23379 Таблица 1 Профилактическая эффективность инактивированной вакцины против микроспории плотоядных животных(количество заболевших животных при экспериментальном заражении гомологичной вирулентной эпизоотической культурой гриба рода ) Не заболело Заболело Диагноз Диагноз не подтвердился подтвердился Опытные группы (дважды иммунизированные животные) Собаки 5 5 Кошки 5 5 Кролики 5 5 Контрольные группы (не иммунизированные животные) Собаки 5 5 5 Кошки 5 5 4 1 Кролики 5 5 5 Таблица 2 Проверка терапевтической эффективности инактивированной вакцины против микроспории плотоядных животныхгруппы животных 1 2 3 Вид животных и их возраст Собаки Кошки Кролики ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения инактивированной вакцины против микроспории плотоядных животных,включающий накопление биомассы культуры микроспор, смешивание ее с инактиватором и добавление адъюванта, отличающийся тем, что в качестве инактиватора используют дезинтегратор УЗДН-1 при частоте 22 кГц и мощности 100 Вт/см 2 ультразвуковых воли до полного разрушения споровых элементов гриба, доводят концентрацию белка до 1,5 мг/см 3 и получают целевой продукт. Результаты исследования выздоровело не выздоровело 5 0 5 0 5 0