Способ прогнозирования рецидивов серозно-папиллярного рака яичника

(51) 01 33/48 (2009.01) 01 33/49 (2009.01) 01 33/53 (2009.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии и может быть использовано при лечении больных серозно- папиллярным раком яичников. Способ прогнозирования рецидива серознопапиллярного рака яичника,включающий определение субпопуляций лимфоцитов,присутствующих непосредственно в ткани опухоли. Наиболее важное значение придается исследованию субпопуляций зрелых Т-клеток (3), Т-киллеров(8), Т-хелперных/индукторных клеток (4) и активированных Т-клеток (25) Определение в крови больных раком яичников Т-лимфоцитов позволяет в высокой степени надежности прогнозировать вероятность появления рецидива, так как показатель относительного содержания Т-клеток крови отражает реакцию организма на опухолевый процесс в более ранние сроки, чем собственно рост злокачественной ткани.(72) Тупицын Николай НиколаевичНикогосян Седа ОвиковнаКузнецов Виктор ВасильевичЗуева Елена ВладимировнаТимошенко Валентина Владимировна Каирбаева Мадина Жеткергеновна(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Казахский научно-исследовательский институт онкологии и радиологии Министерства здравоохранения Республики Казахстан(56) Козаченко В.П. Диагностика и лечение рака яичников // Гинекология, 1999, Т.1,2(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РЕЦИДИВОВ СЕРОЗНО-ПАПИЛЛЯРНОГО РАКА ЯИЧНИКА Изобретение относится к медицине, а именно онкологии и может быть использовано при лечении больных серозно- папиллярным раком яичников. Рак яичников занимает 4 -е место по частоте в структуре онкологических заболеваний женской репродуктивной системы и имеет самые высокие показатели смертности среди онкогинекологических заболеваний. Низкая выживаемость больных раком яичников обусловлена, в первую очередь,биологическими особенностями опухоли,в частности, распространением за пределы органа диссеминацией по брюшной полости и появлением рецидивов, несмотря на проведенное лечение. Прототипом заявленного решения является способ распознания рецидивов опухоли яичника с помощью определения уровня маркера СА-125(Козаченко В.П. Диагностика и лечение рака яичников //Гинекология.-1999.-Т.1, 2.-с.1-7). У здоровых женщин уровень маркера СА-125 составлял 25,9 МЕ/мл, у пациенток с опухолью яичников этот показатель значительно повышается. Как показали исследования, у пациенток с запущенными стадиями заболевания уровень маркера был значительно повышен и достоверно отличался от показателей маркера у больных доброкачественными опухолями яичника. Недостаток способа - у больных раком яичника 1 стадии показатели СА-125 практически не отличаются от нормы, что свидетельствует о сомнительной эффективности теста при ранней диагностике заболевания. Исследования последних лет ознаменовались важными открытиями значения инфильтрации рака яичников зрелыми Т-клетками (3) и Тцитотоксическими клетками (8) в прогнозе заболевания. Дифференцировочные лейкоцитарные антигены обозначаются как(кластер дифференцировки) и имеют соответствующий номер. Это свидетельствует о том, что в настоящее время стандартные клинические и морфологические факторы прогноза могут быть дополнены оценкой уровней инфильтрации опухоли зрелыми Тклетками и, в частности, Т-киллерами. Задача изобретения - повышение точности прогнозирования рецидивов с помощью определения процентного содержания общих Тлимфоцитов крови. Поставленная задача решается предлагаемым способом, включающим определение субпопуляций лимфоцитов, присутствующих непосредственно в ткани опухоли. Наиболее важное значение придается исследованию субпопуляций зрелых Тклеток (3), Т-киллеров (8), Т-хелперных/индукторных клеток (4) и активированных Тклеток (25) Новизна - анализируется опухолевая ткань с применением проточной цитометрии. Проточная цитометрия является одним из наиболее высокочувствительных и объективных методов определения различных популяций и субпопуляции лимфоцитов. Работа проводится следующим образом. 2 1. Сбор и запись данных проводится на проточном цитометре( ,США) 2. Затем в режимеосуществляется просмотр проб без записи для оценки клеточного распределения. 3. В режимеи осуществляется запись проб, которых накапливается не менее 500000 клеточных событий. Конкретный пример осуществления способа. Больная Ц., 1938 года рождения, И./б 2455/99,находилась на лечении и мониторинге в ЦНИРРИ с диагнозом малигнизированная опухоль яичников с метастазами в печень, селезенку, большой сальник,стадия 2. В 2006 году выполнена операция - удаление придатков матки с обеих сторон, удаление ряда метастатических узлов с брюшины. Гистологически(К-129365-69)- цистаденокарцинома яичников с метастазами в большой сальник, по брюшине, в печень. При обследовании первичного иммунного статуса содержание общих Т-лимфоцитов крови соответствовало норме. После операции больной проведена системная лучевая терапия в виде субтотального облучения нижней половины тела очаговой дозой 1 Гр до СОД 36 Гр. В дальнейшем осуществлено 8 курсов химиотерапии препаратами таксол и карбоплатин. Достигнута полная клиническая ремиссия,сохраняющаяся 13 месяцев. Мониторинг осуществлялся ежемесячно путем определения уровня СА-125 и процентного содержания Тлимфоцитов крови. Показатели СА-125 оставались в пределах нормы, а Т-клетки крови не превышали 60. В марте 2008 г. при иммунологическом исследовании крови выявлено повышение процентного содержания Т-лимфоцитов до 72. При этом уровень СА-125 оставался в пределах нормы(19,7 ед/мл),а результаты гинекологического, ультразвукового исследования органов малого таза не указывали на наличие рецидива. Учитывая повышение уровня Тлимфоцитов крови, больная была подвергнута повторному обследованию и эхографически выявлен метастаз области ворот селезенки,кистозно-солидного характера,с четкими контурами, 11 мм в диаметре. Состояние расценено как рецидив заболевания,пациентка госпитализирована и 26.04.08 года проведен курс химиотерапии препаратами карбоплатин и циклофосфамид. Через 3 месяца при обследовании после курса лечения по данным эхографии обнаружены лишь точечные остатки метастатического поражения. Еще через месяц проведен второй курс химиотерапии препаратами карбоплатин и циклофосфамид. После лечения при обследовании патологических изменений в малом тазу и брюшной полости не выявлено, отмечен полный регресс метастазов. Показатель Тлимфоцитов крови снизился до 45. Соотношение 8/4 было более 2-х. В настоящее время больная жива, рецидива заболевания нет и находится под наблюдением. Были изучены субпопуляции интратуморальных Т-лимфоцитов у 27 больных серозно-папиллярным раком яичников методами иммуногистохимии (27 больных) и трехцветной проточной цитометрии (11 больных). Методом проточной цитофлуориметрии исследование субпопуляций интратуморальных лимфоцитов при раке яичников проведено с использованием тройной флуоресцентной метки. Периферические лимфоциты идентифицировали на основании выраженной экспрессии общелейкоцитарного антигена 45. Преобладание зрелых (3) Т-клеток среди тумор-инфильтрирующих лимфоцитов (45) подтверждено проточной цитометрией (62-92,6). Из 11 больных раком яичников, в 4 случаях в ткани рака яичников преобладали Т-киллеры-преобладали 3 лимфоциты. 4 Соотношение 8/4 было более 2 лишь в 3 случаях. И эти 3 пациентки прожили 15 месяцев без рецидивов. Наши данные указывают на то, что у больных с высоким(более двух) соотношением интраэпителиальных 8/4 наблюдается достоверное отсутствие рецидива и, следовательно, прогрессирования опухоли и летальных исходов в сроки до 15 месяцев после окончания комбинированного лечения. Совокупность вышеприведенных данных позволило наблюдаемые повышения процентного содержания Т-клеток крови классифицировать как временный признак,возникающий преимущественно в период, предшествующий появлению рецидива заболевания или на момент его существования. Поэтому указанный показатель был выбран в качестве перспективного прогностического показателя. Таким образом, определение в крови больных раком яичников Т-лимфоцитов позволяет в высокой степени надежности прогнозировать вероятность появления рецидива,так как показатель относительного содержания Т-клеток крови отражает реакцию организма на опухолевый процесс в более ранние сроки, чем собственно рост злокачественной ткани. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ прогнозирования рецидива серознопапиллярного рака яичника,включающий определение маркера СА-125, отличающийся тем,что определяют процентное содержание Т-клеток крови и при их значении выше 2-х раз - прогноз положительный, т.е. рецидивов не будет.