Штамм гриба Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin BVes3-06 для получения биопрепарата против азиатской перелетной саранчи

(51) 12 1/20 (2010.01) 01 63/00 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ ПОЛУЧЕНИЯ БИОПРЕПАРАТА ПРОТИВ АЗИАТСКОЙ ПЕРЕЛЕТНОЙ САРАНЧИ(57) Предложенный штамм выделен из трупа имаго складчатокрылой осы (, ),найденного в предгорьях Заилийского Алатау летом 2006 г. Обладает высокой биологической активностью в отношении личинок азиатской перелтной саранчи. Гибели азиатской перелтной саранчи в вариантах с прототипом (штамм гриба В-21) составила на первые сутки -10, на третьи - 20, на пятые - 45 и на седьмые - 55. При испытании предлагаемого штамма 3-06 эти показатели были 35,0,52,5, 85 и 100 соответственно. Гибель азиатской перелтной саранчи в контроле(обработка водой) на 1-7 сутки была 2-5. Штамм 3-06 проявил также более высокую скорость роста на среде Чапека по сравнению с прототипом.(72) Сагитов Абай ОразулыЛеднев Георгий РэмовичДуйсембеков Бахытжан Алишерович Лукина Анастасия ВикторовнаСлямова Назира ДусупкановнаСмагулова Шолпан Берекболовна Белгибаева Асель Бейсембековна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский институт защиты и карантина растений 23769 Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии, в частности, к получению средств защиты от прямокрылых и представляет собой штамм гриба для получения вышеуказанного средства. Экспериментальные препаративные формы препарата В.производятся в США (под названием биотрол), во Франции (колеопе), в Чехии(боверол, боверосил) и в бывшем СССР (боверин зерновой). Среди коммерческих микоинсектицидных препаратов следует упомянуть, ,-, ,-, -2561,-201,-1200(///. ). Недостатком указанных препаратов в условиях Казахстана является несовпадение оптимума развития штаммов с климатическими условиями Республики. Известен штамм грибаВ-21(Гештовт Н.Ю. Энтомопатогенные грибы. Биотехнологические аспекты. - Алматы, 2002, с. 123-124). Основным недостатком указанного штамма является проявление им активности при умеренных температурах (20-25) и высокой влажности (более 80), что существенно снижает эффективность использования препарата в условиях континентального Казахстана. Задачей изобретения является получение нового штамма, обладающего более высокой активностью в условиях Казахстана в отношении насекомыхлистоедов, в частности, азиатская перелтная саранча. Морфология и биология. В пределах бывшего СССР два подвида азиатской перелетной саранчи,включая номинативный. В лесостепях и на юге лесной зоны европейской России распространн подвид ...(среднерусская саранча). Крупное насекомое длина тела самцов 35-50, самок - 45-55 мм. Лоб отвесный. Мандибулы синие. Переднеспинка без Х-образного рисунка. Надкрылья длинные, блестящие, длина у самцов - 43,5-56,0, самок - 49,0-61,0 мм. Крылья бесцветные, без перевязей. Задние бдра внутри в основной части синевато-чрные. Длина заднего бедра самцов 22,0-26,0 мм, самок -20,0.32,0 мм. Задние голени желтоватые или красные. Грудь снизу в густых коротких волосках, образующих войлочек. Окраска может варьировать в зависимости от фазовой принадлежности, обычно зелная, бурая, желтовато-зелная или серая. У особей стадной фазы переднеспинка седловидная, с ясной перетяжкой и с прямым или слегка вогнутым срединным килем (в профиль). У особей одиночной фазы она без перетяжки и с высоким, дугообразным в профиль срединным килем. Кубышка большая,слабо изогнутая, иногда прямая, слегка сдавленная с боков, длиной 50-85 мм, диаметром 7-10 мм. Представляет столбик пенистого розовато-белого секрета, в который помещены яйца. Стенки мягкие,матовые,коричнево-розовые,припудренные частичками почвы. Яйца в количестве 40-120 шт.,тонкие, суженные к обоим концам, жлтого цвета, слабо блестящие, длиной 7-8 мм, расположены 4 продольными рядами под углом 40-45 к боковым стенкам. Секрет яиц не скрепляет, поднимается над ними в виде столбика длиной в 1/4-1/5 от величины кубышки. При откладке верхний край кубышки находится на глубине в 5-8 мм от поверхности почвы. Кубышки откладываются, в основном, в лгкие, песчаные почвы. Личинки 5 возрастов. Географическое распространение Ареал включает практически все умеренные и тропические области Восточного полушария. Его северный рубеж в Евразии примерно совпадает с южной границей зоны тайги. В б. СССР средняя полоса и юг европейской части, Кавказ, юг Сибири до Приморья, Казахстан, Средняя Азия, Курильские острова (о. Кунашир). Объект, из которого выделен штамм - Выделен из трупа имаго складчатокрылой осы (,). Где собран предгорья Заилийского Алатау,ущелье реки Чапай. Когда собран июль 2006. Кем собран Леднев Г.Р., ВИЗР Кем выделен Лукина А.В., Смагулова Ш.Б.,Леднев Г.Р. На какую среду выделен агаризованная среда Чапека следующего состава (г/л) 3 - 2 , 0 КН 2 РО 4- 1 , 0 КС 1- 0 , 5472 О- 0 , 5472 О- 0,01 сахароза - 30 г 18 г агар-агара,дистиллированная вода -1000 мл. Для устранения развития посторонней грибной и бактериальной микрофлоры в данную среду дополнительно вносилось 0,04 г молочной кислоты, которая снижала рН до 5,5-6. Микроморфология Штамм 3-06 относится к виду. Гифы септированные,бесцветные. Конидиеносцы расположены вдоль гиф единолично или парами друг против друга, собраны рыхлые мутовки. Конидии шаровидные или короткоовальные 2,03,01,7-2,5 мкм. На вершине бутылевидного конидиеносца расположен характерный зигзагообразный вырост. Фиалиды прямые,короткие. Макроморфология на плотных питательных средах На агаризованной среде Чапека (состав указан выше) Колонии на агаризованной среде Чапека округлые,ватообразные,слегка приподнятые, белого цвета, толщиной 1,5-6 мкм,диаметром 15-19 мм на 10-е сутки культивирования. Агар не окрашивают. Округлые колонии белого цвета, к центру колонии - бежевого или светложелтого цвета,мучнистые. Рельеф сильновыпуклый, имеются капли конденсата на поверхности. Пигментация питательной среды светло-коричневого цвета, темнее к центру (Фиг. 1). На рыбном агаре (состав, (г/л) рыбный экстракт(Фото 2). Рельеф слабовыпуклый. Пигментация питательной среды светло-коричневого цвета, выражена сильнее к центру колонии. 2 23769 Колонии на среде Сабуро белого цвета, позднее слегка желтеют, агар не окрашивают, пушистые,синем не образуют. Состав среды Сабуро (г/л) глюкоза - 40, пептон - 10, агар-агар - 18, вода водопроводная - 1000 мл. Биологическая активность на тест - объектах Оценивалась на личинках азиатской перелтной саранчи 4-5 возрастов, активность высокая (таблица 1). Биологические свойства на лабораторных животных (патогенность) Принадлежит к 3-му классу опасности для теплокровных животных. Рекомендации по поддержанию роста и хранению культуры Хранение на скошенной агаризованной среде,при температуре 4 С. Пересев два раза в год. Используется модифицированная среда Сабуро. Таблица 1 Динамика гибели азиатской перелтной саранчи при перкутанном заражении штаммами гриба В. ,титр спор 1 х 10 7 Смертность , сутки НСР 19,21 21,51 Как видно из таблицы 1, гибели азиатской и на седьмые - 65. При испытании предлагаемого перелтной саранчы в контроле была на 1-7 сутки штамма 3- 06 эти показатели были на первые 10-15, по прототипу (штамм В-21) составляла на сутки 35, на третьи 52,5 , на пятые - 85 и на первые сутки 12, на третьи - 22, на пятые - 47 седьмые - 100 соответственно. Таблица 2 Динамика прироста колоний грибана среде Чапека Диаметр колоний, мм (сутки) Из результатов эксперимента по динамике прироста колоний (таблица 2) видно, что на агаризованной среде Чапека предлагаемый штамм 3-06 проявляет более высокую скорость роста(на 29,33- 71,67), чем стандартный штамм В-21. Как видно из приведенных таблиц,предлагаемый штамм грибаобеспечивает 100-ную гибель личинок азиатской перелтной саранчи на седьмые сутки эксперимента против 55 в опыте с контрольным штаммом (по прототипу). Предлагаемый штамм проявил также более быстрый прирост диаметра колоний на среде Чапека по сравнению со стандартным. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм гриба 3-06,депонирован в ДГП Республиканская коллекция микроорганизмов НЦБ РК КН МОН РК, под номером - 0245,для получения биопрепарата против азиатской перелетной саранчи.