Способ использования уровня IL-1В у больных хроническим вирусным гепатитом С в казахской популяции как суррогатного маркера активности цитолиза, как косвенный признак активности воспаления и фиброза.

(51) 01 33/53 (2006.01) 01 33/576 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ фиброза при вирусном гепатите С у лиц казахской популяции. Способ осуществляется путем измерения содержания -1 в сыворотке крови методом ИФА у представителей казахской популяции, больных вирусным гепатитом С, и проведения корреляции его активности с уровнем сывороточной АЛТ. Средние показатели -1 у пациентов первой группы (с повышением АЛТ до 2-х норм) в 1,3 раза выше у пациентов с ХВГС коренной казахской популяции (р 0,05) и в 1,4 раза больше у пациентов с ХВГС некоренной популяции. Показатели больных с повышением АЛТ от 2-х до 10-ти норм у коренной популяции в 2 раза превышали контрольные значения (р 0,05), у пациентов некоренной популяции - в 1,8 раза (р 0,05). В группе с повышением АЛТ более 10 норм у коренной популяции -1 был в 3,5 раза больше,чем в контрольной группе (р 0,05). Способ позволяет осуществлять корреляцию активности -1 с тяжестью поражения печени у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С.(76) Калиаскарова Кульпаш Сагындыковна ,Стикеева Райхан Куандыковна , Туганбекова Салтанат Кинесовна , Нерсесов Александр Витальевич(56) Казаков А.А., Анциферова М.А. Влияние -1 на функциональную активность фагоцитов // Медицинская иммунология, 2002, Т 4, 2, с.122-123(54) СПОСОБ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ УРОВНЯ 1 У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ВИРУСНЫМ ГЕПАТИТОМ С В КАЗАХСКОЙ ПОПУЛЯЦИИ КАК СУРРОГАТНОГО МАРКЕРА АКТИВНОСТИ ЦИТОЛИЗА, КАК КОСВЕННЫЙ ПРИЗНАК АКТИВНОСТИ ВОСПАЛЕНИЯ И ФИБРОЗА.(57) Изобретение относится к области медицины, в частности терапии, гепатологии, инфекционным болезням и касается использования -1 для диагностики степени активности цитолиза и как косвенный признак активности воспаления и 22315 Изобретение относится к области медицины, в частности терапии, гепатологии, инфекционным болезням и касается использования -1 для диагностики степени активности цитолиза и как косвенный признак активности воспаления и фиброза при вирусном гепатите С у лиц казахской популяции. В диагностике и определении степени активности и тяжести различных патологических процессов важное место отводится изучению состава цитокинов. Много внимания уделяется оценке выработки цитокинов при вирусных заболеваниях печени, с детализацией участия в патологическом процессе (Ивашкин В.Т. с соавт.,Российский гастроэнтерологический журнал. 2001. 2. с. 156-157, Авдеева Ж.И., 2002, Астахин А.В. Российский журнал гастроэнтерологии,гепатологии, колопроктологии. 2002. Т 12. 5. с. 80 Шапиро И.Я. Мед.иммунология. 2002 Т.4. 2. с. 169). Вариабельность темпов прогрессирования цитолиза и фиброза при ХВГ обусловлена влиянием множества факторов, среди которых рассматриваются факторы вируса, хозяина и внешние факторы. Имеется ряд работ по изучению влияния цитокинов, в т.ч. , на метаболизм печеночных клеток в культуре,пораженных вирусом. Разработана экспериментальная модель инфекции вирусом гепатита, пригодная для изучения влияния препаратов интерферона на инфекцию,вызванную цитопатогенным вариантом вирусного гепатита С. На этих клеточных моделях с помощью методов обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции исследовали влияние ИФ- на инфекционную активность вирусного гепатита и изменение активности цитокиновых и-РНК 4,6,8,10,12,18 (Пальцев М.А. Межклеточные взаимодействия.-М. Медицина,1995 Царегородцева Т.М. Мед. иммунология. 2002. Т.4.2. с. 167). Установлено, что наиболее информативным показателем для диагностики активности гепатита является-1,концентрация которого увеличивается у всех больных с хроническим вирусным гепатитом В и С (Ивашкин В.Т. Российский журнал гастроэнтерологии,гепатологии, колопроктологии. 2002. Т 11. 3. с. 2429). О роли генетических факторов хозяина могут свидетельствовать данные о более тяжлом течении ХВГ с высокой частотой развития ГЦК в некоторых регионах или этнических группах - в Японии,Италии, Испании, а также о различиях в частоте хронизации и тяжести течения ХВГ у чернокожих американцев и лиц белой расы, проживающих в одном и том же регионе. В настоящее время изучается несколько групп генетических факторов. Группы генетических факторов Определяющие иммунный ответ Определяющие полиморфизм профиброгенных факторов межклеточного взаимодействия Определяющие активацию коагулопатии Ген гемохроматоза Человеческие антигены главного комплекса гистосовместимости (МНС) были открыты в 1950 году и были названы человеческими лейкоцитарными антигенами , поскольку у человека после трансплантации в первую очередь детектировались антитела против лейкоцитов. На сегодняшний день эти антигены обнаружены практически во всех клетках, имеющих ядро. Система характеризуется чрезвычайно высоким уровнем полиморфизма, т.е. содержит гены, которые проявляются более в одной фенотипической форме и наследуются в соответствии с законами Менделя. Этот полиморфизм приводит к существованию необычайно сложной системы презентации антигена. Пептиды,презентация которых осуществляется при помощи молекул МНС класса 1,происходят из белков цитоплазмы. Этот механизм позволяет иммунной системе распознавать клетки,инфицированные вирусом или бактериями. Теоретически, это также позволяет распознавать мутантные белки или опухолевые клетки. Для 2- фактор некроза опухоли - интерлейкин 1 и др. ФакторЛейдена-ген сохранения жизнеспособности организма необходимо уничтожать поврежднные, денатурированные,несформированные или неправильно сформированные белки. Маркировка уничтожаемых белков осуществляется при помощи белка убиквина. Вирусные белки могут активизировать удаление молекул МНС из эндоплазматического ретикулума,предотвращая связывание вирусных пептидов молекулами МНС. (Авезов С.А. Российский журнал гастроэнтерологии, гецатологии, колопроктологии. 2002. Т . 5. с. 79). Недостатком является то, чтоне может как определнный маркер - фиброза или воспаления рассматриваться в качестве профиброгенного фактора межклеточного взаимодействия в патогенезе фиброза печени, т.к. не обладает специфичностью распознавания при данной патологии, а выявляется как фактор, определяющий иммунный ответ при широком спектре патологии бактериальной, онкологической, мутационной и др. Фактор некроза опухоли-(ФНО-) активирует Т- и В- лимфоциты, естественные клетки-киллеры, 22315 опосредует гепатотоксический эффект, принимает участие в апоптозе поврежденных (в том числе вирусом) клеток. Повышение уровня ФНО- в сыворотке крови характеризует процессы воспаления и элиминации клеток путем прямой цитотоксичности или апоптоза. При ряде воспалительных и аутоиммунных заболеваний уровень ФНО- отражает тяжесть патологического процесса (Козлов В.А. Цитокины и воспаление. 2002 -Т.1, 1. -с. 5-8 Носик Н.Н. Вопросы вирусологии. -2000.-1. -с. 4-10). Недостатком ФНО- является то, что он не может читаться маркером цитолиза, т.к. не обнаружено данных за корреляцию его повышения с увеличением биохимических и морфологических признаков цитолиза.(резистентность к активированному протеину С),фенотипа с точечной мутацией гена, отвечающего за синтез фактора . Именно эта мутация, приводящая к замещению аминокислоты аргинина в положении 506 глутамином - основном участке расщепления фактора , является причиной резистентности факторак инактивирующему воздействию АПС,что приводит к повышенной регенерации тромбина и возникновению тромбофилии. Молекулы мутантного фактораобозначаются как факторЛейден по названию города Лейден, где произошло его открытие. РАПС наблюдается в 2/3 случаев всех наследственно детерминированных тромбозов. Недостатком данного фактора является узконаправленность его выявления преимущественно при патологии свертывающей системы крови. Ангиотензиноген является значимым элементом РАС. Была установлена строгая корреляция между концентрацией ангиотензиногена в плазме крови и давлением выявлено влияние различных генотипов и повышенного уровня экспрессии гена ангиотензиногена на кровяное давление. Для мутаций Т 174 М и М 235 Т установлено наличие ассоциации с различными сердечно-сосудистыми заболеваниями. Роль гена ангиотензиногена как независимого фактора риска ИБС была показана., установившими связь между 235 Т аллелем и увеличением риска развития ИБС-с. 68-72). Недостатком этого фактора является то, что его определяют преимущественно при поражениях сердечно-сосудистой системы. Трансформирующие факторы роста - белки,секретируемые видоизменнными клетками( ), которые могут стимулировать рост нормальных клеток. - - полипептиды,секретируемые многими типами клеток. Могут стимулировать рост одних и тормозить рост других типов клеток. Семейство - включает в себя многие из морфогенетических протеинов(Царегородцева Т.М. Мед. иммунология. 2002. Т.4.2. с. 167 Курманова Г.М. Дис.д.м.н./Научный центр гигиены и эпидемиологии (НЦЭГ). 2004. с. 296) Недостатком трансформирующих факторов роста является то, что они не способствуют цитолизу, а стимулируют регенеративные процессы в разных тканях. Кроме того, они не обладают специфичностью выявления при патологии печени. Гемохроматоз - Окрытие в генетической связи гемохроматоза с антигенамипозволило установить, что наследование происходит по аутосомно-рецессивному типу и что ген находится на хромосоме 6. Методы молекулярной генетики позволили получить участки ДНК, расположенные ближе к теломере, и выявить полиморфные маркры. Мутация гена Цис 28 Тир встречается в хромосомах больных гемахроматозом в 85 случаев. Недостатком является то, что примерно в 50 случаев хромосомы с дефектным геном,обусловливающим гемохроматоз, содержат между- и 61260 одинаковый набор маркрных аллелей, который редко обнаруживается у людей, не болеющих гемохроматозом. Особый интерес представляет изучение генетических факторов, которые могут определять индивидуальные особенности цитолиза и фиброгенеза - прогрессирующего накопления внеклеточного матрикса вследствие повреждения печени. Поражение печени при хронических вирусных гепатитах характеризуется воспалительными изменениями различной степени выраженности и неуклонно прогрессирующими процессами цитолиза и фиброза. О степени тяжести течения заболевания судят по уровню цитолиза,оцениваемого по уровню маркеров цитолиза (АЛТ). О стадии заболевания судят по степени выраженности фиброза при морфологическом исследовании, оцениваемой в баллах согласно различным системам оценки (Дмитриева Е.В. Иммунология.- 2002.- 6.- с.56). На основании экспериментальных моделей было установлено, что в патогенезе фиброза и цитолиза печени одну из ключевых ролей играет Интерлейкин -1. Интерлейкин -1 (-1) - важный медиатор одного из универсальных регуляторов иммунитета и воспалительных реакций с широким спектром биологических эффектов, которые включают пролиферацию Т и В-лимфоцитов,антителообразование, индукцию синтеза других цитокинов (Казаков А.А. с соавт., Мед. иммунология. 2002. Т 4.2. с. 122-123). Задачей данного исследования было выявить возможность использования -1 у больных коренной казахской популяции с хроническим вирусным гепатитом С как суррогатного маркера активности цитолиза и как косвенный признак активности воспаления и цитолиза. Целью исследования было определение уровня-1 при хроническом вирусном гепатите С 3(ХВГС) у пациентов коренной казахской популяции в зависимости от уровня АЛТ. Под наблюдением находилось 66 больных,средний возраст которых 25,80,9 лет. Первая группа (38 человек) с повышением АЛТ до 2-х норм- пациенты ХВГС коренной казахской популяции(21 человек) и некоренной популяции (17 человек). Вторая группа(10 человек) с повышением АЛТ от 2 х до 10-ти норм - пациенты с ХВГС коренной казахской популяции (5 человек) и некоренной популяции (5 человек). Распределение пациентов ХВГС коренной казахской и некоренной популяции в зависимости от уровня АЛТ ПАЦИЕНТЫ Уровень АЛТ Коренная казахская популяция Некоренная популяция Третья группа (18 человек) с повышением АЛТ более 10 норм - пациенты ХВГС коренной казахской популяции (10 человек) и некоренной популяции (8 человек). Группа контроля - 50 пациентов с гепатитом невирусной этиологии и нормальными показателями АЛТ. Противовирусная терапия пациентам не проводилась. Содержание 1 определяли иммуноферментным методом. Средние показатели -1 у пациентов первой группы в 1,3 раза выше у пациентов с ХВГС коренной казахской популяции (р 0,05) и в 1,4 раза больше у пациентов с ХВГС некоренной популяции(р 0,05) против нормальных значений 52,6520,56 пкг/мл. Показатели больных второй группы у пациентов с ХВГС коренной казахской популяции в 2 раза превышали контрольные значения (р 0,05), у пациентов с ХВГС некоренной популяции - в 1,8 раза (р 0,05). В третьей группе у пациентов с ХВГС коренной казахской популяции -1 был в 3,5 раза больше, чем в контрольной группе (р 0,05), в коренной популяции - в 4 раза (р 0,05) соответственно. Исследования показали, что чем активнее цитолитический синдром при ХВГС, тем выше уровень -1 у больных как в коренной казахской,так и в некоренной популяции. Таким образом, способ позволяет осуществлять корреляцию активности -1 с тяжестью поражения печени у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ использования уровня интерлейкина - 1 как суррогатного неинвазивного маркера активности цитолиза, и как косвенный признак активности воспаления и фиброза у больных хроническим вирусным гепатитом С казахской популяции,отличающийся тем,что представителям казахской и некоренной популяций,больных вирусным гепатитом С, проводится измерение содержания -1 в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа и осуществляют корреляцию его активности с уровнем активности сывороточного АЛТ.